一种疏肝养血健脾复方中药颗粒的研制

陶 刚，涂宏建，冯煦洸，严鲁娟，韩姣姣，贾福怀

(1.宁波御坊堂生物科技有限公司，浙江宁波 315012；2.御坊堂天然健康产品重点农业企业研究院，浙江宁波 315012)

脾与肝是人体重要脏器，肝为藏血之脏，性喜条达而主疏泄，脾虚气弱则统血无权，肝郁血虚则疏泄不利。肝脾是调节气血的枢纽，也是其他脏腑维持正常功能的关键。气血是构成生命的基本物质，气血冲和是健康的前提。传统中医药理论认为肝郁血虚脾弱主病位在肝脾，由肝脾虚弱导致脏器运行不畅、功能失调，宜采用“急则治肝，缓则治脾，肝脾同治”及“以调代补”之法。

疏肝养血健脾颗粒参考中医药经典古方《太平惠民和剂局方》中逍遥散，经配方优化工艺升级而成复方中药颗粒剂，具有疏肝、养血、健脾的功效。该方由柴胡、当归、白芍、白术、干姜、薄荷、炙甘草、熟地黄、茯苓共9味药材经典复配。该研究基于传统中医药制剂经验，采用新时代制剂工艺创新成果，结合复方中药特殊性质，对制剂工艺进行了优化升级，拟定工艺为茯苓粉碎，当归、白术、干姜、薄荷蒸馏成挥发油，为防止挥发油氧化、挥发甚至失效，故用γ-环状糊精进行包埋，药渣与柴胡、白芍、炙甘草、熟地黄4味药材饮片混合水提，浓缩喷雾后与茯苓粉混合后乙醇制粒，低温烘干再与挥发油包埋粉混合均匀后灌装，通过试验优化该中药制剂加工工艺。

1 材料与方法

主要试材。当归、白术、干姜、薄荷、柴胡、白芍、炙甘草、熟地黄、茯苓饮片均购自安徽朱氏康豪中药饮片有限公司；γ-环状糊精(瓦克化学)；芍药苷对照品(购自中国食品药品检定研究院)。

主要试剂。甲醇、乙腈(色谱纯)；三乙胺(分析纯)；磷酸(优级纯)。

主要仪器。数显恒温水浴锅；Agilent HPLC-1260；鼓风干燥箱；超声波清洗器；低速离心机；喷雾干燥机；粉碎机。

产品质量控制测定方法。理化、重金属、农药残留：GB 5009.3—2016、GB 5009.4—2016、GB 5009.11—2014、GB 5009.12—2017、GB 5009.17—2014、GB/T 5009.19—2008；粗多糖：硫酸-苯酚法；微生物指标：GB 4789.2—2016、GB 4789.3—2016、GB 4789.4—2016、GB 4789.10—2016、GB 4789.15—2016；芍药苷：《中华人民共和国药典》一部白芍项下(2020年版)。

挥发油提取工艺。为确定该中药制剂中挥发油制备工艺，以加水量、浸泡时间、提取时间为考察的三因素。采用单因素试验，以挥发油提取率作为参考指标，优选当归、白术、干姜、薄荷的挥发油提取工艺。挥发油提取率=挥发油体积(mL)/含油药材质量(g)×100%。

加水量考察。按配方比例称取4份当归、白术、干姜、薄荷，每份80 g，粉碎后置2 L圆底烧瓶中，分别加入药材量6、8、10、12倍水，浸泡1.5 h，水蒸气蒸馏提取6 h，收集挥发油并计算提取率。

浸泡时间考察。按照配方比例称取5份当归、白术、干姜、薄荷，每份80 g，粉碎后置于2 L圆底烧瓶中，加药材量8倍水，分别浸泡0、0.5、1.0、1.5、2.0 h，水蒸气蒸馏提取6 h，收集挥发油并计算提取率。

提取时间考察。按照配方比例称取4份当归、白术、干姜、薄荷，每份80 g，粉碎后置于2 L圆底烧瓶中，加药材量8倍水浸泡1.5 h，水蒸气蒸馏提取4、5、6、7 h，收集挥发油并计算提取率。

挥发油提取工艺的验证。按试验中确定的最佳条件验证3批次。

固形物含量的测定。精密称取稀浸膏浓缩液样品25 g，置于干燥至恒重且已称重的蒸发皿中，水浴蒸干，于105 ℃干燥箱干燥4 h，干燥器中冷却30 min，精密称定。以干燥品计算供试品中固形物含量，公式为=(-)×，式中，为浸膏固形物含量(g)；为浸膏供试品称取质量(g)；为干燥后供试品蒸发皿总质量(g)；为恒重后蒸发皿质量(g)；为定容体积。

芍药苷的含量测定。

色谱条件。色谱柱Agilent SB-C(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流动相为乙腈-0.1%磷酸溶液-三乙胺(14∶86∶0.05)；流速1.0 mL/min；检测波长230 nm；柱温38 ℃；进样量10 μL。

对照品溶液制备。精密称取芍药苷对照品，加50%甲醇溶解定容至100 mL，得对照品溶液。

试样处理。精密称取0.5 g试样，加50%甲醇定容至25 mL，密塞称重，超声处理30 min(功率150 W，频率60 kHz)，冷却至室温并称重，用50%甲醇补足减少的重量，摇匀后滤过，取续滤液即得。

标准曲线绘制。按照“...”制备对照品溶液，分别精密称取浓度为40.53 μg/mL的对照品溶液0.5、1.0、2.0、5.0、10.0 μL以及浓度为0.135 1 mg/mL的对照品溶液5.0、10.0、15.0 μL，注入HPLC中，测定芍药苷峰面积，以峰面积为纵坐标、进样量为横坐标绘制标准曲线，计算回归方程为=95248+36033，=0997 1(=8)，线性范围为0.023～2.027 μg。

含量测定。精密吸取“...”试样溶液10 μL注入HPLC中，按“...”色谱条件测定，以峰面积计算芍药苷含量。

中药提取工艺研究。

正交试验设计方法。按配方比例称取柴胡、白芍、炙甘草、熟地黄饮片与同配方量当归、白术、干姜、薄荷蒸馏萃取挥发油后残渣9份，每份合计200 g，按L(3)正交试验表安排工艺试验，提取、过滤、浓缩、定容至250 mL得稀浸膏，分别测量稀浸膏中芍药苷及固形物含量。

工艺优化。采用正交试验设计，以白芍中芍药苷含量和浸膏固形物含量为评价指标，选择提取次数、加水量、提取时间这3个影响芍药苷和固形物含量的主要因素进行考察，每因素3个水平，优选中药最佳提取工艺。

以综合评分为考察指标，采用加权综合评分法，以芍药苷和固形物含量9次试验最大值为100分，将指标芍药苷和固形物总量转换为评分值，固形物含量加权系数为0.60，芍药苷总量系数为0.40，综合评价筛选最佳工艺。

最佳提取工艺验证。柴胡、白芍、炙甘草、熟地黄、当归、白术均含多糖成分，白芍含大量芍药苷，因此确定该制剂的功效成分为粗多糖、芍药苷。水和50%()浓度以下的乙醇溶液对多糖提取效果好。芍药苷提取多采用煎煮法和醇提回流法，煎煮法得到浸膏量较多、溶出效果好，乙醇回流法提取芍药苷含量高。但本品为复方制剂，各原料配伍综合起效，因此提取条件不能简单以芍药苷提取量确定。水提取法简单、经济，符合中药传统食用方法，醇提取法会损失大量有益多糖，因此本品采用水提取法结合试验筛选，称取配方比例药材及蒸馏药渣3份，每份200 g，按优选提取工艺进行3次验证试验，浓缩定容，测定芍药苷、固形物总量并计算综合评分。

喷雾干燥工艺考察。根据设备情况，优选中药浓缩液干燥方法为喷雾干燥，在设备干燥条件(进风温度、出风温度)相对固定基础上，浓缩液不同密度对喷干效果影响较大，试验以喷干粉状态及塔内挂壁情况为综合评价指标，考察不同密度下浓缩液干燥效果。

2 结果与分析

加水量对挥发油提取率的影响。由表1可知，加水量8倍时挥发油提取率为1.05%，占12倍水时提取率(1.11%)的94.59%，基本提取完全，考虑节约能耗将加水量定为8倍。

表1 加水量对挥发油提取率的影响Table 1 Effect of water addition on the extraction rate of volatile oil

浸泡时间对挥发油提取率的影响。由表2可知，当浸泡时间为1.5 h时，提取率高达1.10%，挥发油提取量最高，因此浸泡时间定为1.5 h。

表2 浸泡时间对挥发油提取率的影响Table 2 Effect of soaking time on the extraction rate of volatile oil

提取时间对挥发油提取率的影响。由表3可知，提取6、7 h，挥发油提取率最高，考虑工艺及减少成本，优化提取时间为6 h。

表3 提取时间对挥发油提取率的影响Table 3 Effect of extraction time on the extraction rate of volatile oil

挥发油提取工艺验证。由表4可知，验证试验与单因素试验结果接近，说明该工艺稳定可靠。确定当归、白术、干姜、薄荷挥发油提取工艺为8倍水、浸泡1.5 h、提取6 h。

以提取次数、加水量、提取时间设计L(3)正交试验，加权综合评分法评价筛选最佳工艺，正交试验设计见表5。以综合评分为考察指标，提取效果影响因素由大到小依次为提取次数>加水量>提取时间，最佳提取条件ABC。经方差分析可知，提取次数对提取效果综合评分影响显著(<0.05)，提取时间和加水量对提取效果综合评分的影响不显著。综合生产实际，考虑缩短周期、降低成本及节能减排因素，最终优选工艺为ABC，即提取2次，10倍加水量，提取2 h。

表4 挥发油提取工艺验证试验结果Table 4 Validation test results of volatile oil extraction process

表5 正交试验设计及直观分析Table 5 Orthogonal experimental design and intuitive analysis

按上述优选提取工艺进行3次验证试验，浓缩定容，测定芍药苷、固形物总量并计算综合评分，结果见表6。结果发现，3批验证与正交试验优选结果基本吻合，表明正交试验优选提取工艺合理、稳定可行。

表6 中药提取工艺验证试验结果Table 6 Validation test results of traditional Chinese medicine extraction process

优选中药浓缩液干燥方法为喷雾干燥，考察不同密度下稀浸膏干燥效果，结果见表7。结果表明，稀浸膏的相对密度控制在1.03～1.06(测量温度65 ℃)喷干效果较佳。

表7 稀浸膏相对密度对喷干效果的影响Table 7 Effect of relative density of dilute extract on spray-drying effect

粉碎。将茯苓粉碎成细粉，过80目。

蒸馏、包埋。将当归、白术、干姜、薄荷以6∶6∶1∶0.5比例混匀，粗粉后加8倍水浸泡1.5 h，水蒸气蒸馏提取6 h，收集挥发油及药渣。挥发油使用小型沸腾制粒的低温喷雾，与4倍量的γ-环状糊精充分混合，沸腾干燥制成挥发油包埋粉。

提取浓缩干燥。柴胡、白芍、炙甘草、熟地黄按6∶6∶3∶4比例称量并切片，与同配方量提挥发油后药渣混均后加药重10倍水，提取2次，2 h/次，滤过，合并滤液，离心处理，减压浓缩至相对密度为1.03～1.06(测量温度65 ℃)的稀浸膏。稀浸膏喷成干粉，进风温度170～175 ℃，出风温度90～95 ℃，上料速度500 mL/h。

制粒烘干。提取物添加配方量茯苓细粉混匀，加6%的95%乙醇，搅拌4 min，14目制粒，60 ℃烘干3 h。

整粒总混包装。干颗粒14目整粒，加入挥发油包埋粉混合均匀，灌装封口，外包装。

按标准严控产品质量、保障品质对企业发展壮大及提升美誉度十分重要。

(1)感官指标。棕褐色颗粒，具有中药特有滋气味，无异味，无肉眼可见外来异物。

(2)微生物指标。菌落总数≤6 000 CFU/g，大肠菌群≤0.92 MPN/g，霉菌和酵母≤50 CFU/g，致病菌不得检出。

(3)功效成分指标。粗多糖含量(以葡萄糖计)≥80 mg/g，芍药苷≥3.20 mg/g。

(4)理化指标。水分≤8%，灰分≤15%，铅≤0.5 mg/kg，总汞≤0.2 mg/kg，总砷≤0.2 mg/kg。

(5)农药残留指标。六六六≤0.1 mg/kg，滴滴涕≤0.1 mg/kg。

3 结论与讨论

该研究优化了疏肝养血健脾复方中药颗粒制剂的生产工艺。通过单因素试验设计优化挥发油提取工艺及参数为加水量为8倍药材重量、浸泡1.5 h、水蒸气蒸馏提取6 h。以芍药苷含量、固形物含量为指标，通过正交试验优化中药的最佳提取工艺为10倍水煎煮2次，每次2 h。该工艺流程提取效率高、工艺简单、稳定性高，适合大规模生产。

单一药物仅能控制或缓解某些单一症状，很难彻底缓解全部症状，调节复杂身体状况，复方可提升效果并减少毒副作用。人体脏腑气血系统存在动态平衡，诸多中药对调节脏腑气血具有较大优势。本制剂配伍遵循“君臣佐使”原则，以柴胡、当归、白芍为君药，疏肝解郁、养血柔肝、补肝体而助肝用；辅以白术、茯苓、熟地黄，健脾和中、补气养血，协调配合君药；佐以薄荷、干姜助本方疏散条达之力；炙甘草为使，调和诸药，引诸药上行。诸药合用，共凑解肝郁、养血虚、健脾胃之功，使诸症自愈。

古方逍遥散属汤剂，疗效确切但煎煮费时、携带服用不便，而颗粒剂具有稳定性好、安全性高、功效成分高、携带服用方便等优点，适合患者长期服用，消除肝郁血虚脾弱所致两胁作痛、头痛目眩、口燥咽干、神疲食少，或用于胃肠功能紊乱、月经不调、乳房胀痛、脉弦而虚等症。