冷冻浓缩海链藻在南美白对虾育苗中的应用

彭小伟,王兆伟*，陈伟耀

(1.宁波浮田生物技术有限公司,浙江宁波 315700；2.湛江丰联水产有限公司,广东湛江 524200)

微藻是一类分布广泛、营养丰富的自养生物，通常含有30%～40%蛋白质、10%～20%脂肪酸、5%～15%碳水化合物，富含EPA、ARA 和DHA等多不饱和脂肪酸，对幼苗发育具有重要作用，在鱼、虾、蟹、贝等水产动物育苗中不可或缺。海链藻属于硅藻门，含有丰富的蛋白质、维生素、脂肪酸和矿物质，在育苗中海链藻能显著促进对虾生长发育和免疫力。

在对虾育苗中，微藻饵料一般以鲜藻投喂。但鲜活海藻往往由于供应不及时，与育苗进度脱节，很难满足育苗中对鲜活饵料的需求。冷藏浓缩藻(0～4 ℃)虽然可以部分缓解供应脱节的问题，但其保存时间有限，也不能彻底解决这个问题。因此，笔者探索冷冻浓缩海链藻对南美白对虾幼体培育中变态存活率的影响，以期为冷冻浓缩海链藻在对虾育苗中的应用提供理论基础。

1 材料与方法

将750万虾卵放入20 m育苗池中孵化，约24 h后用配合饲料结合宁波浮田生物技术有限公司生产的冷冻浓缩海链藻(250 mL/包，10cells/mL， -20 ℃存储)经200～250目筛网搓洗后投喂虾苗；每4 h投喂上述饵料一次，配合饲料的量根据水体中饵料的残留和虾的摄食情况进行调整，冷冻藻每次投1～2包。当虾苗进入Z3阶段后，不再投喂冷冻浓缩藻。在整个培育过程中，2～4 h取样一次，镜检，确定虾苗所处的时期和不同时期虾苗的数量。整个试验阶段水温保持32 ℃左右。试验持续6 d。

将500万虾卵分别放入2个15 m的育苗池中孵化，约24 h后分别用冷冻和冷藏浓缩海链藻(10cells/mL，存放约7 d，存储温度0～4 ℃)经200～250目筛网搓洗后投喂虾苗，直至虾苗进入Z3阶段；进入Z3后饵料投喂改为配合饲料。在整个培养过程，2～4 h取样一次，镜检，确定虾苗所处的时期和不同时期虾苗的数量。整个试验阶段水温保持32 ℃左右。试验持续6 d。

上述2个试验是在广东湛江市东海岛志诚苗厂开展。

试验在广东牧海生物技术有限公司徐闻县下洋基地开展。对照组投喂虾片(简称虾片组)，试验组分别投喂鲜活非浓缩海链藻(浓度10万～20万/mL，简称鲜活组)、冷冻浓缩海链藻(10cells/mL，低于-20 ℃存储，简称冷冻组)和冷藏普通浓缩海链藻(2×10cells/mL，0～4 ℃存储，简称冷藏组)。每个处理组2个平行，每个平行南美白对虾幼体3万尾，育苗水体为400 L，试验周期为6 d(144 h)。

虾卵孵化约24 h后开始饵料投喂试验，此时虾幼体基本进入溞状阶段。幼体培育条件及投喂策略见表1。其中，浓缩藻和虾片投喂时要经200～250目筛网搓洗投喂。每天08：00 测量对虾幼体密度， 并根据幼体密度调整投饵量。每天16:00 取一定数量幼体进行镜检,并记录幼体发育变态时间及幼体数量变化。试验过程中维持温度在32 ℃左右。幼体密度采用直接取样计数。

表1 南美白对虾溞状幼体各期投喂量Table 1 Feeding amount of daphnia larvae of Litopenaeus vannamei at each stage

2 结果与分析

在配合饲料中加入冷冻浓缩海链藻，虾苗在6 d发育过程中经过无节幼体(N，第一次投喂之前，即0 h之前)、Z1(0～32 h)、Z2(32～60 h)、Z3(60～116 h)和糠虾(M)3个阶段(图1)。

图1 不同阶段幼体形态Fig.1 Larval morphology at different stages

无节幼体阶段(N)，头胸腹不分节，3对附肢，靠卵黄生活；溞1阶段(Z1)，初步形成消化系统(肠道)，还没有形成复眼(有雏形)；溞2阶段(Z2)，复眼有眼柄、额剑；溞3阶段(Z3)，尾部形成尾扇，但腹部无乳头状凸起；糠1阶段(M1)，腹部形成乳头状凸起；糠2阶段(M2)，乳头上形成第2节。

虾苗幼体各阶段的存活率为溞状成活率79.7%，糖虾成活率78.8%。无节幼体是第一次投喂2～3 h前的数量；溞状幼体基本上是Z3的数量，而糠虾的数量是糠1的数量，到糠3时可能还会下降。

这表明冷冻藻添加到配合饲料中，不会抑制虾苗的变态发育，虾可以顺利进入Z3和糠虾阶段。

虾卵放入育苗池约24 h时开始投喂浓缩海链藻。初始投喂6袋，随后根据虾苗池中藻细胞浓度来添加浓缩藻，使池中藻细胞浓度维持在5×10cells/mL左右。进入Z3阶段才开始投喂配合饲料。

表2反映了冷冻组、冷藏组中虾不同时期所处状态。由于两池外界条件基本一致，所以，两池中虾的状态很大程度上可能是由投喂的饵料藻所影响。同时培养的虾苗，冷冻组比冷藏组中虾苗幼体更早进入Z3和糠虾阶段。冷冻存储的藻比冷藏存储的藻更有利于虾苗变态。

不同处理组虾苗幼体不同阶段存活率见表3。由表3可知，冷藏组溞状幼体成活率和糠虾成活率均比冷冻组低。这进一步说明冷冻浓缩海链藻可能比冷藏海链藻更适合作为对虾的开口料。

表2 不同池中虾苗所处周期Table 2 Period of shrimp fry in different ponds

随饵料培育南美白对虾时间的增加，各组南美白对虾存活率逐渐降低。6 d后，冷冻组、冷藏组和鲜活组及虾片组南美白对虾幼体存活率分别为(52.00±4.00)%、(54.00±2.00)%、(56.00±2.67)%、(38.00±0.67)%。其中， 虾片组南美白对虾幼体存活率明显低于海链藻组，后三者之间差别不明显(图2)。鸿兴虾苗厂(湛江徐闻前山镇)在南美白对虾幼体养殖阶段(溞状阶段)，在配合饲料中添加冷藏普通浓缩海链藻2瓶/(池·d)，相比仅使用配合饲料的池子，南美白对虾摄食率高，生长速度快，活力强，成活率提高20%以上。

表3 南美白对虾的孵化率和成活率Table 3 Hatching rate and survival rate of Litopenaeus vannamei

图2 不同处理下虾苗幼体存活率Fig.2 Survival rate of shrimp larvae under different treatments

微藻对南美白对虾幼体各期变态的影响见表4。微藻处理组的变态时间明显比仅投喂虾片的处理组短。到第4天时，微藻处理组虾苗幼体基本处于Z2向Z3的过渡，而虾片组尚处于Z1、Z2阶段；到第6天，微藻组处于向糠虾过渡阶段，此时虾片组仍处于溞状阶段。

表4 南美白对虾幼体在饲养下所处的周期Table 4 Cycle of shrimp larvae of Litopenaeus vannamei under feeding

在微藻处理组中，虽然各处理组对南美白对虾幼体各期变态和存活率影响差别不大，但各组加入的藻液体积差别较大。尤其是添加鲜活海链藻的处理组，到第3天虾苗计数时，加入的藻液体积几乎是原始苗池水样体积的50%。在实际生产育苗中，过多藻液体积的添加可能对育苗带来风险，如可能引起应急反应等。

3 结论与讨论

在水产动物育苗过程中，饵料不合适或者营养不足会影响幼体存活率和变态。在该试验条件下，综合幼体变态和存活率等指标表明，投喂海链藻的南美白对虾幼体存活率相对较好，能较为顺利地变态到下一期，且较直接投喂虾片的南美白对虾幼体变态时间更短。这说明试验条件下的海链藻具有足够的营养物质来促使虾苗变态发育。微藻的总脂含量和各种脂肪酸的组成比率，是其营养价值的主要指标。试验中使用的威氏海链藻，其总脂含量约为8%，且含有20%的EPA和5%的DHA，符合南美白对虾生长对脂质的需求(6.0%～7.5%)；而其具有的EPA 、DHA是许多鱼类幼体、对虾幼体和双壳类幼体的必需脂肪酸，可以促进幼体的生长、发育，提高幼体的存活率。在对虾育苗中，角毛藻是一种常用的优质开口饵料。研究表明，威氏海链藻较角毛藻更能提高中国对虾的成活率和蜕变率，并认为该藻中有更高含量的DHA，且大的细胞个体(7～15 μm)，投喂的中国对虾可以获得更多的蛋白质和脂类营养。总之，威氏海链藻具有良好的营养价值，可以用作南美白对虾的开口饵料。该研究以威氏海链藻投喂日本对虾的幼体同样得到了较好的结果。此外，湛江丰联水产有限公司(湛江雷州覃斗镇)用冷冻浓缩海链藻投喂沙虫也得到了良好的效果：分别用冷冻海链藻和配合饲料投喂沙虫30 d，投喂冷冻浓缩海链藻组的沙虫生物量相对投喂配合饲料组的沙虫生物量高约30%，且投喂冷冻浓缩海链藻组，沙虫摄食更快，活力更高。

微藻的营养组成在保存和存储过程中会发生变化，由于脂肪酸是主要营养成分且容易被氧化，所以，脂肪酸尤其是多不饱和脂肪酸中的EPA和DHA变化尤其受人关注。朱葆华等在不同温度下储存等鞭金藻和绿色巴夫藻(4、-5、-22 ℃)，发现其不饱和脂肪酸不随保存时间的延长发生显著变化，其多不饱和脂肪酸更是趋于稳定，保存没有减少藻细胞脂肪酸的营养价值；王培磊等研究表明，低温保存150 d，小球藻和球等鞭金藻多不饱和脂肪酸含量变化不明显，且浓缩保存藻投喂中国对虾和轮虫的效果与普通藻无显著差异。该研究表明，用冷冻的藻泥(低于-20 ℃)或普通浓缩的藻液(0～4 ℃)代替新鲜的藻液是完全可能的。但冷藏浓缩的海链藻(0～4 ℃)投喂虾苗的效果较冷冻浓缩的效果差，推测，虽然其不饱和脂肪酸的营养价值没有降低，但由于藻细胞浓度太高，胞间营养丰富，在相对较高的温度下(0～4 ℃)，细胞体内反应和胞外的微生物作用，可能产生了一些对对虾幼体发育有害的物质。藻泥在长期保存后发黑，产生刺激性气体似乎可以佐证这一点。因此，要想长期维持高浓缩海链藻的营养价值，对其采用低温冷冻的方式是可行的也是必须的。

总之，将海链藻产品制成高浓缩的状态，而后冷冻低温存储，可以较好地保存海链藻的影响价值，缓解海链藻生产与育苗环节的脱节。冷冻海链藻可以替代新鲜海链藻用作对虾及其他一些海产动物的良好饵料。