CTC检测联合CA199、IGFBP2检测对胰腺癌的诊断价值

卢熹微,刘 娇,曹军丽

(秦皇岛市第一医院 肿瘤科,河北 秦皇岛066000)

胰腺癌患者早期临床症状不明显，大部分患者一旦确诊已经错过根治性切除治疗的时机，胰腺解剖结构相对复杂，导致穿刺活检难度增加，并且受胰腺癌侵袭性较强的影响，临床诊断难度增加，因此选择有效的诊断方式对胰腺癌早期诊断具有重要意义[1-2]。研究指出，胰腺癌发病与癌细胞增殖过程中调控细胞因子的浓度有关，胰岛素样生长因子结合蛋白2(Insulin-like growth factor binding protein 2，IGFBP2)浓度增加，会将上游转录因子激活，导致癌细胞DNA扩增速度增加，肿瘤细胞不断增殖[3]。IGFBP2为一种致癌基因，在胰腺癌患者血清中显示高表达，可作为胰腺癌肿瘤标志物，对患者预后具有重要意义[4]。CA199属于一种临床常见的肿瘤标志物，在胰腺癌患者中显示高表达，但是敏感性、特异性不理想[5]。循环肿瘤细胞(circulating tumor cell，CTC)存在于乳腺癌、大肠癌等多种恶性肿瘤中，外周血循环肿瘤细胞(CTCs)受外界因素的影响，被释放到血液中，导致肿瘤患者预后不良[6]。鉴于此，本研究回顾性分析胰腺癌患者临床资料，探讨CTC、CA199、IGFBP2水平与胰腺癌发病的关系。

1 对象与方法

1.1 研究对象

选取2019年12月-2020年12月在秦皇岛市第一医院就诊的胰腺癌80例，为胰腺癌组，男35例，女45例，年龄40-70岁，吸烟32例，饮酒30例。选取同期就诊的胰腺良性疾病患者60例，为胰腺良性疾病组，男32例，女28例，年龄38-70岁，吸烟28例，饮酒21例。选取同时期行健康体检的志愿者30例，为对照组，男15例，女15例，年龄35-75岁，吸烟12例，饮酒10例。三组研究对象在性别比例、年龄、吸烟、饮酒基线资料比较，无统计差异(P>0.05)，具有可比性。

纳入标准：所有患者均符合中华医学会肿瘤学分会制定的关于胰腺癌的诊断标准[7]；所有患者均经过手术、病理学、CT、MRI确诊；所有患者均未进行放疗、化疗治疗；本文研究患者及其家属均知情，签署知情同意书，经过我院伦理委员会的批准。胰腺良性疾病均经过手术、病理确诊为慢性胰腺炎、胰腺假性囊肿、胰腺素瘤等。

排除标准：合并其他肿瘤患者；合并精神异常患者；进行放疗、化疗治疗患者；胰腺转移肿瘤患者；合并传染性疾病患者。

1.2 指标检测

采集三组研究对象入院当天空腹肘部静脉血3 ml，转速为2 000 r/min离心干预5 min，-20℃保持。采用酶联免疫吸附法检测CA199、IGFBP2水平：将提前稀释好的血液标本100 μl加入相应的微孔板反应孔中，第1孔只加样品稀释液为零孔，混合均匀，在37 ℃下处理90 min，甩去孔内液体，吸干水分；将准备好的抗体加入到每孔中0.1 ml，在37 ℃下处理60 min，底物四甲基联苯胺(TMS)空白孔不加；甩去孔内液体，每孔中加满0.01 M PBS，浸泡1-2 min，甩去孔内液体，吸干水分；每孔中加入90 μl TMS，避光处理15-20 min；每孔中加入90 μl TMS终止液，即蓝色变为黄色。在波长450 mm处分析CA199、IGFBP2水平。CTC检测：将采集到的血液标本进行单核细胞悬浊液制备，进行免疫磁性标记、磁性分选后免疫细胞化学染色，由我院经验丰富的肿瘤科阅片人员统计CTC计数。

1.3 统计学处理

2 结果

2.1 各组CTC、CA199、IGFBP2检测水平比较

如表1所示，胰腺癌组CA199、IGFBP2水平均高于胰腺良性疾病组和对照组，胰腺癌组CTC水平高于胰腺良性疾病组(P<0.05)。胰腺良性疾病组CA199、IGFBP2水平高于对照组(P<0.05)。

表1 各组CTC、CA199、IGFBP2检测水平比较

2.2 CTC、CA199、IGFBP2水平与胰腺癌患者临床特征的关系

如表2所示，CTC、CA199、IGFBP2水平与胰腺癌患者性别、年龄无关(P>0.05)。CTC、CA199、IGFBP2水平与胰腺癌患者疾病分期、分化程度、淋巴转移状况有关，患者疾病分期Ⅳ期，低分化、淋巴转移CTC、CA199、IGFBP2水平高于Ⅰ-Ⅲ期、高中分化、无淋巴转移(P<0.05)。

表2 CTC、CA199、IGFBP2水平与胰腺癌患者临床特征的关系

2.3 胰腺癌患者发病的因素分析

如表3所示，以胰腺癌患者是否发病为因变量(0=否，1=是)，CTC、CA199、IGFBP2为自变量，建立Logistic回归模型，并校正患者性别、年龄、吸烟、饮酒、TG、HDL-C、LDL-C、TC等混杂因素影响，最终CTC、CA199、IGFBP2是胰腺癌患者发病的危险因素。

表3 胰腺癌患者发病的Logistic回归分析

2.4 CTC、CA199、IGFBP2对胰腺癌的预测价值

如表4所示，与CTC、CA199、IGFBP2单一诊断相比，联合诊断对胰腺癌的诊断效能较高。

表4 CTC、CA199、IGFBP2对胰腺癌的预测价值

3 讨论

研究认为，肿瘤细胞表面存在着大量的糖蛋白、脂蛋白以及细胞分泌物等，其浓度的高低与肿瘤的发展有关[8]。CTC主要是通过原发肿瘤细胞自行脱落产生，进入人体外周血，以粘附、聚集等方式形成血管簇，浸入血管基底膜导致微转移灶，临床中检测CTCs对胰腺癌早期诊断具有重要的指导作用[9-11]。本研究显示，在胰腺癌患者中，CTC水平高于对照组，且CTC水平与胰腺癌发病存在密切关系，提示血清CTC水平升高是导致胰腺癌的危险因素。分析原因：CTC在胰腺癌细胞中主要通过播散的方式在外周血中大量存在，导致患者循环血中CTC水平增加[12]。本研究ROC分析显示CTC预测胰腺癌的AUC达0.741，提示CTC是胰腺癌发病的警示指标。

CA199是一种黏蛋白型糖类抗体，在消化系统恶性肿瘤中升高比较明显，在胰腺癌中起着生物标志物的作用，在胰腺癌诊断中具有较高的敏感性[13]。作为一种生物标志物，其面临的主要挑战在于炎症和非胰腺癌所造成的假阳性个体原因的假阴性。有研究指出，CA199特异性缺乏，在肝胆疾病以及良性胰腺疾病中30%的患者血浆中CA199表达未增高[14]。杨静[15]研究指出，CTC联合CA199检测能评估胰腺癌患者病情。本研究中，CA199单独检测敏感度达76.25%，因此，CA199在预测患者胰腺癌发病风险方面表现出较高的效能。

IGFBP2浓度增加会对癌症细胞上游转录、增殖产生影响，研究显示IGFBP2在消化、生殖等恶性肿瘤中发挥着重要的参与作用，对癌细胞异型性有诱导作用，引起细胞分化成熟障碍产生[16-17]。本文研究结果显示，IGFBP2在胰腺癌患者中高表达，其机制可能为IGFBP2能够将NOTCH信号通路激活，导致MAPK信号交错式激活风险增加，胰腺癌患者肿瘤细胞特性也发生变化[18-19]。本研究显示胰腺癌患者血清IGFBP2水平高于胰腺良性疾病患者，血清IGFBP2水平升高与胰腺癌发病密切相关，说明IGFBP2参与胰腺癌发病过程。