慢性乙肝、肝硬化及肝癌患者Treg细胞、IL-10、IL-12表达水平及临床意义

张小红，李江，张然蓉

华中科技大学协和深圳医院检验科，广东 深圳 518052

乙肝病毒是一种嗜肝病毒，存活在肝细胞当中，如果患者的抵抗力较弱，乙肝病毒就会攻击肝脏，导致慢性乙肝、乙肝肝硬化的形成[1]。乙肝肝硬化可分为早中晚期，早期肝硬化只是病理学上出现了改变，肝脏的形态学和功能均正常，当病情发展为中晚期时，肝功能出现异常发生癌变形成肝癌[2]。调节性T细胞(Treg)通过主动调节的方式，抑制存在于正常机体内潜在的自身反应性T细胞的活化与增殖，具有控制和调节机体免疫系统的功能，在自身免疫疾病和癌症的发生过程中发挥了重要作用[3]。白细胞介素10(IL-10)是一种参与炎症和免疫抑制的细胞因子，通过抑制过度的炎症反应，调节细胞的生长和分化，增强天然免疫，促进组织修复机制，在感染和炎症过程中发挥维持组织稳态的重要作用[4]。白细胞介素12(IL-12)主要由树突状细胞、巨噬细胞、中性粒细胞等合成，它能促进Th0细胞向Th1细胞分化，并促进Th1细胞分泌干扰素γ(IFN-γ)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)等细胞因子，参与人体的免疫应答[5]。本研究旨在探讨慢性乙肝、肝硬化及肝癌患者的Treg细胞、IL-10、IL-12表达水平及临床意义，现报道如下：

1 资料与方法

1.1 一般资料 回顾性分析2019年12月至2020年12月华中科技大学协和深圳医院收治的180例肝病患者的临床资料，根据疾病类型将患者分为慢性乙肝65例，肝硬化60例，肝癌55例。纳入标准：①诊疗依从性良好，能够配合各项诊疗者；②精神状况良好，能够正常进行沟通、交流者。排除标准：①肝肺综合征、消化道出血者；②胰腺炎者；③免疫系统、泌尿系统、内分泌系统絮乱者；④合并胃肠道恶性肿瘤者。另选择同期在上述医院体检的60例健康志愿者作为对照组。四组受试者的年龄、性别比较差异均无统计学意义(P＞0.05)，具有可比性，见表1。本研究经医院医学伦理委员会审核通过，所有受试者均对本研究知情并签署同意书。

表1 四组受试者的年龄和性别比较

1.2 诊断标准 (1)慢性乙肝的诊断标准为血清表面抗原和乙肝病毒DNA检测均呈阳性。肝功能指标谷丙转氨酶(ALT)持续上升，肝组织学检查有肝炎病变[6]。(2)肝硬化的诊断标准为肝脏质地比较坚韧或坚硬，边缘不规则，表面有结节感。CT影象学检查表现为肝裂增宽，肝左右叶比例失调，生化学检查一般伴有低蛋白血症、血氨的升高、凝血功能的异常[7]。(3)肝癌的病理学诊断标准为肝脏占位病灶或手术切除的组织标本，经过病理组织学和活细胞学检查，诊断为肝癌[8]。

1.3 观察指标与检测方法 (1)比较四组受试者的Treg细胞、IL-10、IL-12表达水平。Treg细胞：四组受试者通过超高灵敏度多色流式细胞仪(型号：Amnis Cell Stream，厂家：Luminex Corporation)从外周血中检测Treg含量。血清IL-10、IL-12：四组受试者在入院后抽取肘间静脉血10 mL，静置20 min后，按3 000 r/min的转速进行离心20 min，提取血清液冷冻待检提取待检血清5 mL，采用双抗体夹心ELISA法检测血清IL-10、IL-12水平，所使用的试剂盒由广州瑞博奥生物科技有限公司提供。(2)比较四组受试者的肝功能指标水平。提取血清液冷冻待检提取待检血清5 mL，通过采用全自动生化分析仪(型号：TBA-FX8，厂家：安图生物科技有限公司)对ALT、总胆红素(TBIL)、谷草转氨酶(AST)进行检测。(3)分析Treg细胞、IL-10、IL-12水平与ALT、TBIL、AST水平的相关性。

1.4 统计学方法 应用SPSS18.0软件进行数据分析。计量资料以均数±标准差(±s)表示，多组比较采用方差分析，两两比较采用t检验，采用Pearson相关分析法分析相关性。均以P＜0.05为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 四组受试者的Treg细胞、IL-10、IL-12表达水平比较 对照组、慢性乙肝组、肝硬化组和肝癌组患者的Treg细胞、血清IL-10、IL-12水平均逐渐升高，其中肝癌组患者的Treg细胞含量、血清IL-10、IL-12水平均明显高于肝硬化组、慢性乙肝组和对照组，肝硬化组患者的Treg细胞、血清IL-10、IL-12水平均明显高于慢性乙肝组、对照组，慢性乙肝组患者的Treg细胞、血清IL-10、IL-12水平均明显高于对照组，组间比较差异均有统计学意义(P＜0.05)，见表2。

表2 四组受试者的Treg细胞、IL-10、IL-12表达水平比较(x-±s)

2.2 四组受试者的肝功能指标水平比较 对照组、慢性乙肝组、肝硬化组和肝癌组患者的血清ALT、TBIL、AST水平均逐渐升高，其中肝癌组患者的血清ALT、TBIL、AST水平均明显高于肝硬化组、慢性乙肝组和对照组，肝硬化组患者的血清ALT、TBIL、AST水平均明显高于慢性乙肝组、对照组，慢性乙肝组患者的血清ALT、TBIL、AST水平均明显高于对照组，组间比较差异均有统计学意义(P＜0.05)，见表3。

表3 四组受试者的肝功能指标水平比较(±s)

表3 四组受试者的肝功能指标水平比较(±s)

注：与对照组比较，a P＜0.05；与慢性乙肝组比较，b P＜0.05；与肝硬化组比较，c P＜0.05。

组别对照组慢性乙肝组肝硬化组肝癌组F值P值例数60 65 60 55 ALT(U/L)28.18±6.15 100.26±18.75 a 115.20±20.38ab 140.12±27.04 abc 360.122 0.001 TBIL(μmol/L)15.02±4.27 39.98±6.53 a 50.04±8.61 ab 66.57±10.80 abc 440.102 0.001 AST(U/L)30.32±5.04 75.50±10.62 a 97.22±19.48 ab 130.09±30.26 abc 296.969 0.001

2.3 Treg细胞、IL-10、IL-12水平与ALT、TBIL、AST水平的相关性 经Pearson相关分析结果显示，Treg细胞、IL-10、IL-12水平与ALT、TBIL、AST水平均呈正相关(P＜0.05)，见表4。

表4 Treg细胞、IL-10、IL-12水平与ALT、TBIL、AST水平的相关性

3 讨论

肝硬化由慢性乙型病毒性肝炎发展而来，乙型肝炎病毒(HBV)感染肝细胞后，由于体内免疫细胞的攻击，引起肝细胞炎症坏死，导致肝脏逐渐变硬、变形，从而发展为肝硬化[9]。由于体内存在乙型肝炎病毒脱氧核糖核酸(HBV-DNA)，新生的肝细胞不断被炎症反应破坏，肝硬化的病情还在进展[9]。若不及时治疗，肝部组织的炎症破坏继续发展，肝纤维化程度会继续加重，肝小叶结构破坏，纤维组织增生，肝脏细胞假小叶形成，而假小叶的形成容易导致肝硬化，反复的肝硬化最后导致肝癌的形成，严重损害患者的肝功能[10]。

Treg细胞是一种人体自身存在的免疫细胞，维持人体正常的免疫功能，与各种细胞因子进行结合促进免疫反应，对各种自身性的免疫系统疾病有很大影响，如系统性红斑狼疮、白血病、肺癌、胰腺癌等疾病中患者的调节性T细胞数值偏高，会导致抵抗外界细菌的能力降低，引发免疫细胞对自身细胞产生免疫反应[11]。IL-10由效应T淋巴细胞和Treg细胞产生，能够抑制巨噬细胞的特异性免疫功能，加强免疫诱导，抑制巨噬细胞释放炎症因子，减少黏附分子的表达。当IL-10表达过多时会抑制机体的免疫作用，诱发系统性红斑狼疮、子宫内膜癌、淋巴瘤，从而导致肿瘤的生长[12]。IL-12是一种被广泛研究的促炎细胞因子，它通过激活NK细胞和T细胞，在先天免疫和适应性免疫之间建立联系，从而有效促进抗肿瘤免疫反应。外源性IL-12对肿瘤的影响目前已在小鼠、人体中展开研究[13]。本研究结果显示，慢性乙肝、肝硬化及肝癌患者的Treg细胞、血清IL-10、IL-12水平均逐渐升高。通过分析是由于Treg细胞的免疫抑制作用，既能防御人体发生自身免疫性疾病，又能促使肿瘤细胞发生免疫逃逸，间接加快了肿瘤细胞的增殖，增强了肿瘤细胞的浸润能力，对炎性细胞的抑制减弱，加剧炎性细胞合成、分泌、释放IL-12，与夏天等[14]研究中癌组织或癌细胞均可产生IL-10的报道一致。此外慢性乙肝、肝硬化及肝癌患者的肝功能指标ALT、TBIL、AST水平均逐渐升高，通过分析是由于HBV复制与增殖活跃，造成肝细胞大量坏死，导致肝脏炎症加剧，形成肝纤维化，肝脏组织细胞结构发生恶性的病变，故导致肝功能减退，血清ALT、TBIL、AST水平升高[15]。Pearson相关分析结果显示，Treg细胞、IL-10、IL-12水平与ALT、TBIL、AST水平均呈正相关。通过分析是由于Treg细胞能分泌IL-10，IL-12也能诱导IL-10的生成，三者水平的升高会加重肝脏的炎症程度以及肝细胞的受损程度，引发肝细胞坏死。ALT、AST主要分布在肝细胞内，肝细胞坏死会直接导致ALT、AST升高，与此同时肝细胞损伤会造成胆红素代谢过程中断，胆汁就无法正常排泄，导致排入血液中增多，从而导致TBIL水平升高。本研究的不足之处在于未分析免疫功能和凝血功能指标的变化，因此有待后续深入研究。

综上所述，慢性乙肝、肝硬化及肝癌患者Treg细胞、IL-10、IL-12表达水平的升高与肝功能障碍密切相关，对其检测有助于对病情的评估和后期治疗提供数据参考。