血清激活素-A、肝细胞生长因子及D-二聚体在急性白血病中的变化及意义

吕东 闵晓阳 杨明宇

急性白血病（Acute leukemia，AL）是一种严重的恶性血液系统疾病，在我国发病率为5.68/10万，是儿童及35岁以下成人癌症相关死亡的主要原因[1]。细胞遗传学和分子学分析对预测AL患者的缓解率和生存率具有重要意义。肾母细胞瘤基因1（Wilms'tumor gene 1，WT1）在指导临床个体化治疗、监测微小残留病变（Minimal residual disease，MRD）、预测复发等方面具有较好效能[2]，但AL发展的分子机制多样，因此其不能完全满足临床需要，仍有必要继续挖掘新的标志物，为AL的全面诊断和评估、预测化疗反应、监测MRD以及靶向治疗提供依据。激活素-A（Activin-A）、肝细胞生长因子（Hepatocyte growth factor，HGF）、D-二聚体（D-dimer，D-D）在实体肿瘤中的意义已被大量报道，然而其与AL的关系并不明确。为此，本研究检测了AL患者化疗前后血清Activin-A、HGF及D-D水平，现报道如下。

1 材料与方法

1.1 研究对象 选择2020年1月～2021年3月我院收治的80例AL患者为研究对象。所有患者均完善体格检查、血常规、骨髓象检查、组织化学、流式细胞学检查等，符合AL诊断标准[3]。均为初诊，排除合并其它血液系统疾病、重要脏器病变、感染等患者。其中男42例，女38例；年龄14～52岁，平均（30.28±6.24）岁。根据疾病类型分为两个亚组，即急性髓系白血病组（AML组，n=51）与急性淋巴细胞白血病组（ALL组，n=29）。选择同期50例健康志愿者作为对照组，男27例，女23例；年龄17～60岁，平均（32.63±8.12）岁。本研究经医院伦理委员会批准，入组人员知情同意。

1.2 方法 所有AL患者均完成规范全程化疗，分别于化疗前及化疗结束时抽取空腹外周静脉血4ml，EDTA抗凝，分作两份，一份不离心，一份离心获得上清液，冻存待检。采用ABIPR ISM公司荧光定量PCR仪检测不离心标本中WT1 mRNA的表达水平，RNA提取试剂盒与逆转录试剂盒均为大连宝生物有限责任公司产品。采用双抗体夹心酶联免疫吸附法（试剂盒生产厂家:上海晶抗生物工程有限公司）检测血清Activin-A水平、HGF水平。采用胶乳增强免疫比浊法（试剂盒生产厂家：浙江夸克生物科技有限公司）检测血清D-D水平。对照组仅在入组时检测1次。

1.3 疗效判断与随访 根据《血液病诊断及疗效标准》[3]，80例AL患者有78例达到完全缓解，2例未缓解，由于未缓解例数过少，未进行统计学比较。采用门诊及电话随访对78例完全缓解的患者进行连续跟踪，随访截至2022年2月20日，中位随访时间为13个月，其中66例患者未复发，12例患者复发（复发标准：完全缓解后骨髓原始细胞比例＞0.050或出现髓外浸润）。

1.4 统计学方法 采用SPSS 18.0统计软件分析处理数据，计数资料以率表示，组间比较用χ2检验；计量资料以±s表示，采用独立样本t检验，相关性分析采用Pearson直线相关分析。P＜0.05表示差异有统计学意义。

2 结果

2.1 AL组与对照组基线实验室指标水平比较 与对照组比较，AL组WT1 mRNA、Activin-A、HGF、D-D水平均较高（P＜0.05）。见表1。

表1 AL组与对照组基线实验室指标水平比较（±s）

表1 AL组与对照组基线实验室指标水平比较（±s）

组别 WT1 mRNA Activin-A（pg/L） HGF（pg/ml） D-D（mg/L）AL组（n=80） 0.66±0.38 45.41±14.03 849.11±237.62 0.82±0.29对照组（n=50） 0.17±0.06 14.72±3.24 247.26±66.04 0.46±0.15 t 9.035 15.159 17.470 8.117 P 0.000 0.000 0.000 0.000

2.2 AML组与ALL组基线实验室指标水平比较两组间的WT1 mRNA、Activin-A、HGF、D-D水平比较差异均无统计学意义（P＞0.05）。见表2。

表2 AML组与ALL组基线实验室指标水平比较（±s）

表2 AML组与ALL组基线实验室指标水平比较（±s）

组别 WT1 mRNA Activin-A（pg/L） HGF（pg/ml） D-D（mg/L）AML组（n=51） 0.61±0.25 42.97±15.37 875.25±244.06 0.83±0.12 ALL组（n=29） 0.69±0.38 47.18±13.66 818.17±181.25 0.80±0.23 t 1.134 1.224 1.097 0.767 P 0.260 0.224 0.275 0.445

2.3 化疗对AL患者各项实验室指标水平的影响 与化疗前比较，化疗后AL患者的WT1 mRNA、Activin-A、HGF、D-D水平均明显下降（P＜0.05）。见表3。

表3 AL患者化疗前后各项实验室指标水平比较（±s）

表3 AL患者化疗前后各项实验室指标水平比较（±s）

时间 WT1 mRNA Activin-A （pg/L） HGF（pg/ml） D-D（mg/L）化疗前（n=80） 0.66±0.38 45.41±14.03 849.11±237.62 0.82±0.29化疗后（n=80） 0.48±0.17 29.53±8.52 432.52±189.71 0.52±0.14 t 3.867 8.653 12.254 8.332 P 0.000 0.000 0.000 0.000

2.4 不同预后AL患者化疗前后各项实验室指标水平比较 复发组与无复发组WT1 mRNA、Activin-A、HGF、D-D水平比较差异均无统计学意义（P＞0.05）。见表4。

表4 不同预后AL患者化疗前后各项实验室指标水平比较（±s）

表4 不同预后AL患者化疗前后各项实验室指标水平比较（±s）

时间 WT1 mRNA Activin-A（pg/L） HGF（pg/ml） D-D（mg/L）化疗前无复发组（n=66） 0.69±0.25 46.34±7.11 844.32±137.62 0.82±0.31复发组（n=12） 0.62±0.22 45.72±9.93 876.41±352.74 0.82±0.19 t 0.907 0.260 0.552 0.000 p 0.367 0.795 0.582 1.000化疗后无复发组（n=66） 0.45±0.14 30.29±4.62 428.52±116.36 0.53±0.16复发组（n=12） 0.53±0.11 29.00±8.56 462.52±208.55 0.50±0.26 t 1.873 0.765 0.810 0.537 p 0.064 0.447 0.420 0.592

2.5 AL患者血清Activin-A、HGF及D-D与WT1 mRNA之间的相关性分析 化疗前血清Activin-A、HGF、D-D水平与WT1 mRNA之间均无相关性（P＞0.05）；化疗后血清HGF水平与WT1 mRNA呈正相关（P＜0.05），而Activin-A、D-D水平与WT1 mRNA之间均无相关性（P＞0.05）。见表5。

表5 血清Activin-A、HGF及D-D与WT1 mRNA的相关性分析

3 讨论

目前对于Activin-A在AL中的作用的相关研究较少。本研究结果显示，AL患者的血清Activin-A水平明显高于健康人，提示Activin-A参与了AL的发病。Activin-A是转化生长因子-β（TGF-β）超家族成员，是β-激活素链的同二聚体，主要通过与跨膜激活素Ⅱ型受体B结合发挥其生物学作用。Activin-A在组织中的分布广泛，是一种多效细胞因子，具有急性期反应物、趋化因子、激素、生长因子等多种分子活性，参与多种生理病理过程，包括炎症、代谢、免疫反应、内分泌功能等。研究表明，Activin-A可通过激活Smad2/Smad3信号通路负性调节肌肉生长，降低骨骼肌密度，同时刺激炎症因子生成，干扰脂肪代谢等，在多途径下影响癌症患者的预后[4]。此外，Activin-A还可通过RhoA-ROCK-MEKK1-JNK和MEKK1-p38信号级联传递信号调节肌动蛋白细胞骨架重塑和上皮形态发生中的细胞迁移[5]。Activin-A在AL骨髓细胞中过度表达，并增强AL细胞的侵袭性，同时Activin-A可抑制正常B祖细胞增殖，但不抑制AL前TEL/AML1融合基因阳性克隆的增殖，从而为后者提供了选择性优势，是一种AL促进因子[6，7]。本研究中AL患者血清Activin-A水平异常升高，亦能够推测Activin-A对AL具有促进作用。AML与ALL是AL的主要类型，二者的来源及临床特征不同。Activin-A在AML与ALL患者中的水平并无明显差异，提示Activin-A对AL的鉴别诊断价值有限。本组患者经化疗后仅2例未缓解，绝大多数患者的化疗反应好，化疗后Activin-A水平明显降低，但Activin-A与WT1 mRNA之间无相关性，同时复发者与无复发者之间的Activin-A无明显差异，提示Activin-A可能有助于预测化疗反应，但预测复发的效能不佳。

研究表明，HGF可能是一种造血祖细胞增殖和分化的调节蛋白，被认为是造血功能相关调节因子中的新成员[8]。本研究结果显示，AL患者的血清HGF同样异常升高，提示HGF与AL有关。巨核细胞、单核细胞、血小板、成纤维细胞、平滑肌细胞、肥大细胞和内皮细胞等可表达HGF mRNA，各种类型的人类白血病细胞也会分泌HGF。研究表明，由HGF及其受体c-Met偶联驱动的细胞内信号通路可引起多种细胞的多种生物学反应，包括有丝分裂、运动发生（增强细胞运动性）、形态发生、神经突延伸、抗凋亡活性及造血功能增强等。HGF与AL的关系密切，但其对AL的诊断及预测价值却少有报道。本研究结果显示，血清HGF在AML与ALL患者中的水平无明显差异，在化疗后其水平明显下降，而且在有无复发患者之间亦无明显差异，但化疗后的HGF与WT1 mRNA呈正相关，提示HGF对AL的诊断、评估与监测可能有一定价值。

有研究表明[9]，AL的发生发展伴随着凝血系统激活的增加。D-D是内源性纤维蛋白溶解的敏感指标，可反映凝血和纤溶系统的功能状态。AML和ALL患者D-D水平均升高，且与活化部分凝血活酶时间、凝血酶原时间等其它凝血指标比较，D-D是预测复发的更可靠的标志物。本研究结果显示，D-D水平在AL患者血清中亦明显高于对照组，尽管如此，D-D水平与是否复发亦无关，提示AL的发生会影响D-D水平发生改变，然而这并不能为预测复发提供依据。但检测D-D仍是有益的，其有助于临床医生综合评估患者化疗期间的全身状况，警惕血栓性疾病等并发症出现。

综上，Activin-A、HGF、D-D对AL的诊断及监测疗效具有潜在价值，但是否能作为AL诊断、监测疗效及预测预后的标志物尚需进一步研究。