外周血PD-L1分子表达联合LDH对晚期非小细胞肺癌免疫治疗效果的预测价值*

张燕，张丰林，李敏

（马鞍山市人民医院 肿瘤内科，安徽 马鞍山 243000）

非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer,NSCLC）是一种发病率和死亡率较高的常见恶性肿瘤，发病早期无明显症状，临床确诊时多数已进入晚期[1]。临床主要通过化疗、放疗等方法控制患者病情，延长生存时间，随着免疫靶向治疗的快速发展，改变了癌症患者治疗的格局和理念[2]。相关研究发现，免疫治疗可进一步提高晚期NSCLC 患者生活质量，延长生存时间[3]。免疫治疗中，程序性死亡配体1（programmed death ligand 1, PD-L1）可以结合程序性死亡受体1，抑制活化T 淋巴细胞增殖，促进其凋亡，参与肿瘤免疫逃逸[4]。有研究发现，系统性炎症反应在肿瘤的发生、发展中具有重要影响，且促炎状态与肿瘤患者治疗效果有关，乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase, LDH）作为潜在的炎症标志物参与多种恶性肿瘤的发生、转移[5-6]。然而，外周血PD-L1 分子表达联合LDH 对晚期NSCLC 免疫治疗效果的预测价值尚不清楚。鉴于此，本研究回顾性分析马鞍山市人民医院收治的晚期NSCLC 免疫治疗患者的资料，探究外周血PD-L1 分子表达联合LDH 预测晚期NSCLC 免疫治疗效果的价值。

1 资料与方法

1.1 一般资料

回顾性分析2018年1月—2021年8月马鞍山市人民医院收治的88 例晚期NSCLC 免疫治疗患者的临床资料。其中，男性48 例，女性40 例；年龄24～78 岁，平均（56.02±9.86）岁。纳入标准：①符合《2018年V3 版NCCN 非小细胞肺癌指南更新要点解读》[7]中NSCLC 诊断标准，经细胞学或组织学病理检查确诊；②晚期患者；③接受免疫治疗；④预计生存时间＞3 个月。排除标准：①免疫治疗无法耐受患者；②合并其他恶性肿瘤患者；③血液性或免疫性系统疾病患者；④精神疾病患者；⑤急慢性疾病患者；⑥妊娠期或哺乳期妇女。本研究经医院医学伦理委员会批准，患者及其家属签署知情同意书。

1.2 方法

患者均采用纳武利尤单抗联合含铂类为基础的化疗方案，持续3 个周期。根据临床疗效分为治疗无效组和有效组，分别有47 例和41 例。实体瘤疗效评定标准如下，完全缓解：临床症状和原病灶消失，且持续＞4 周；部分缓解：临床症状明显减轻和原病灶缩小＞50%，持续＞4 周；疾病稳定：临床症状未见减轻，原病灶缩小≤50%或增大≤25%，持续＞4 周；疾病进展：临床症状加重，出现新病灶或原病灶增大＞25%。其中，完全缓解和部分缓解为治疗有效，疾病稳定和疾病进展为治疗无效[8]。

收集并统计患者性别、年龄、病理类型、吸烟史、NSCLC 家族史、合并糖尿病、合并高血压、合并冠心病、TNM 分期、肿瘤直径、肿瘤分化程度、白细胞计数（white blood cell count, WBC）、白蛋白（Albumin,ALB）、C反应蛋白（C-reactive protein,CRP）、肿瘤坏死因子α（tumor necrosis factor-α, TNF-α）、PD-L1、LDH等资料。

采用肝素抗凝管采集新鲜外周血3 mL，流式管内加入30 μL 血液标本，并加入CD14-FITC/PDL1-PE，4℃条件下反应20 min，设置阴性对照管，加入CD14-FITC/IgG-PE，震荡，避光反应20 min，震荡，每个流式管均加入150 μL 溶血剂，震荡，42℃水浴反应至液体变清，加磷酸缓冲液洗涤，1 800 r/min 离心5 min，离心半径13.5 cm，弃上清，加0.5 mL 磷酸缓冲液，采用FACSCanto Ⅱ流式细胞分析仪（美国BD 公司）测定表型，圈出CD14 单核细胞门，建立针对CD14-FITC/PD-L1-PE 的 峰图，分 析PD-L1 表达率。采用酶联免疫吸附试验测定LDH 水平，试剂盒购自北京北控中生生物科技有限公司。

1.3 统计学方法

数据分析采用SPSS 22.0 统计软件。计量资料以均数±标准差（±s）表示，比较用t检验；计数资料以构成比表示，比较用χ2检验；多因素一般Logistic 回归分析探讨影响因素；绘制受试者工作特征（receiver operating characteristic, ROC） 曲线。P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组患者临床资料比较

两组患者性别、年龄、病理类型、饮酒史、NSCLC家族史、合并糖尿病、合并高血压、合并冠心病、TNM 分期、肿瘤直径、WBC、ALB、CRP、TNF-α 比较，差异无统计学意义（P＞0.05），两组患者肿瘤分化程度、PD-L1、LDH 比较，差异有统计学意义（P＜0.05），无效组患者低分化占比、PD-L1、LDH 高于有效组患者。见表1。

表1 两组患者临床资料比较

2.2 导致晚期NSCLC 免疫治疗无效的一般多因素Logistic回归分析

将治疗效果（否= 0，是= 1）为因变量，将分化程度（中高分化= 0，低分化= 1）、PD-L1（连续变量）、LDH（连续变量）作为自变量，进行多因素一般Logistic 回归分析（引入变量的检验水准α=0.05）。结果显示，分化程度[=3.114（95% CI：1.281,7.569）]、PD-L1 [=3.951（95% CI：1.583，9.860）]、LDH [=3.432（95% CI：1.375，8.564）]是导致晚期NSCLC 患者免疫治疗无效的危险因素（P＜0.05）。见表2。

表2 导致晚期NSCLC免疫治疗无效的多因素一般Logistic回归分析参数

2.3 PD-L1、LDH及联合预测晚期NSCLC免疫治疗效果的诊断效能

ROC 曲线分析显示，PD-L1 敏感性最高，为82.98%；PD-L1 和LDH 联合的特异性最高，为97.56%；联合的曲线下面积（area under curve, AUC）最高，为0.934。见表3 和图1。

表3 PD-L1、LDH及联合预测晚期NSCLC免疫治疗效果的诊断效能分析参数

图1 PD-L1、LDH及联合预测晚期NSCLC免疫治疗效果的ROC曲线图

3 讨论

晚期NSCLC 已错过最佳手术时期，临床主要采用化疗延长患者生存时间[9]。免疫治疗是治疗恶性肿瘤的一种新模式，在肺癌、结直肠癌等多种恶性肿瘤中取得显著成效，然而，部分肿瘤细胞可以通过多种机制逃避免疫监视，影响免疫疗效[10]。有研究发现，肿瘤微环境中淋巴细胞表面有PD-L1 表达，可以介导肿瘤的免疫逃逸[11]。此外，系统性炎症反应在肿瘤患者疾病发展中具有重要影响，LDH、中性粒细胞等炎症标志物可影响肿瘤患者预后[12]。因此，分析晚期NSCLC 免疫治疗患者外周血PD-L1 分子表达及LDH 水平对指导临床治疗具有重要意义。

本研究中，无效组患者低分化占比及PD-L1、LDH 均高于有效组患者，且多因素一般Logistic 回归分析显示低分化、PD-L1、LDH 均是影响晚期NSCLC免疫治疗无效的独立危险因素。低分化患者肿瘤恶性程度高，临床治疗难度较大，多数患者疗效不佳[13]。PD-L1 是肿瘤免疫治疗干预的靶点，单核细胞表达的PD-L1 能够与程序性死亡受体1 结合，发挥负性调节作用，使T 细胞不能正常活化，抑制CD4+T 细胞功能，影响机体抗肿瘤作用[14]。此外，PD-L1 可以调节肿瘤细胞自身的生物学行为，参与肿瘤的发生、发展，PD-L1 表达在肿瘤组织中异常升高已被临床研究证实[15]。LDH 是糖酵解中的主要酶类，是细胞代谢状态非常敏感的指标，恶性肿瘤细胞坏死、代谢加速，细胞膜通透性改变，导致癌组织中的酶释放增加，外周血中LDH 活性升高[16]。有研究发现，LDH 水平与恶性肿瘤患者病情密切相关，临床检测LDH 水平变化有助于提高NSCLC 患者疗效[17]。本研究ROC 曲线分析显示，外周血PD-L1，LDH 水平预测晚期NSCLC 免疫治疗效果的最佳截断点分别为33.94%，453.58 u/L，两者联合的特异性和AUC 分别为97.56%和0.934。PD-L1 作为T 下拨负性共刺激分子，主要表达于淋巴细胞和肺泡巨噬细胞，PD-L1 结合程序性死亡受体1 可以抑制CD8+T细胞活化途径的增殖，削弱机体抗肿瘤免疫应答，肿瘤细胞突破防御机制并不断增殖[18]。晚期NSCLC免疫治疗无效患者肿瘤体积增大，多数患者发生淋巴结转移或产生恶性胸膜腔积液，随着病情的恶化，肿瘤组织糖酵解速度加快，导致LDH 水平升高[19]。动态监测外周血PD-L1 分子表达以及LDH 水平能够及时了解患者病情变化，本研究PD-L1 分子表达与LDH 水平联合预测，敏感性稍低，特异性提高，预测晚期NSCLC 免疫治疗效果的价值较高。

综上所述，外周血PD-L1 分子表达联合LDH 水平用于预测晚期NSCLC 免疫治疗效果具有重要价值。然而，由于本研究纳入病例数较少，仍需扩大样本，以进一步证实研究结果。