胶质母细胞瘤组织RBM8A表达与病人预后及替莫唑胺化疗敏感性的关系

王张立 吴晓旭 崔 阳 王丹妹 包春艳

胶质母细胞瘤（glioblastoma multiforme，GBM）是颅内常见的恶性肿瘤，易复发，预后差，平均生存时间仅17 个月左右。肿瘤增殖快、侵袭性强及高耐药性是GBM 预后差的主要原因。近年来，探索GBM 的生物学标志物成为研究的热点。RBM8A 是高度保守的RNA结合基序（RNA inding motif，RBM）家族成员之一，在无义介导的mRNA 降解（nonsense-mediated mRNA decay，NMD）、基因的可变剪接、细胞周期调控等过程中起重要作用。研究发现，RBM8A 可以调控信号转导及转录激活蛋白3（signal transducer and activator of transcription 3，STAT3）通路、核转录因子-κB（nuclear transcription factor-κB，NF-κB）信号通路和MAPKs 通路等，参与多种肿瘤的发生、发展。本文探讨GBM 组织RBM8A 表达与病人预后及替莫唑胺（temozolomide，TMZ）化疗敏感性的关系。

1 资料与方法

1.1 标本来源 选取2015 年6 月至2020 年6 月手术切除的、经术后病理确诊的130例GBM组织，其中男78 例，女52 例；年龄20～77 岁，平均（55.01±10.02）岁。术前均未接受放/化疗。130 例种，78 例术后接受替TMZ化疗。选取颅脑损伤减压术中切取的非肿瘤脑组织20 例为对照，其中男12 例，女8 例；年龄29～58岁，平均（54.88±8.97）岁。

1.2 免疫组化染色检测组织RBM8A 的表达10%甲醛溶液固定标本，石蜡包埋并制备切片（4 μm）。根据免疫组化试剂盒（北京索莱宝科技有限公司）说明书进行操作。先脱蜡，随后用柠檬酸钠抗原修复液进行抗原修复，再用封闭液封闭2 h。加入兔抗人RBM8A（1:500，上海柯雷生物科技有限公司）温室孵育2 h，PBS 洗涤2 次，加入二抗。DAB 显色、苏木精复染，显微镜下观察RBM8A 表达（图1）。每张切片随机选择5个高倍镜（×200）视野观察。染色评分由染色强度评分（无着色0 分、浅棕色1 分、中棕色2分、深棕色3分）和染色细胞百分比评分（无染色为0分；<25%为1 分；25%～75%为2 分；>75%为3 分）相乘得出，4～9分为高表达。

图1 免疫组化染色检测组织RBM8A 表达（EnVision 二步法，×200）

1.3 术后随访 术后进行门诊和电话随访，随访截止2021 年6 月，随访时间3～50 个月，中位随访时间为12个月。记录病人肿瘤复发、生存情况。

1.4 统计学方法 采用SPSS 20.0软件分析；采用单因素和多因素Cox 回归模型分析生存预后的影响因素；生存曲线分析RBM8A表达水平与TMZ化疗敏感性的关系；

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<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 GBM 组织RBM8A 的 表达GBM 组织RBM8A 高表达率[86.15%（112/130）]明显高于对照组[20%（4/20）；

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<0.05]。2.2 GBM 病人生存预后的影响因素 随访期间死亡98例，失访2例。单因素Cox回归分析显示，年龄、术前KPS评分、肿瘤切除程度、术后TMZ化疗、RBM8A表达水平与GBM 病人预后有关（

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<0.05）。多因素Cox 回归分析显示，年龄≥60 岁、术前KPS 评分<80分、肿瘤未全切除、术后未行TMZ化疗、RBM8A高表达是GBM 生存预后不良的独立危险因素（

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<0.05）。见表1。

表1 本文130例胶质母细胞瘤生存预后的Cox比例风险回归模型分析

危险因素年龄（≥60岁/<60岁）性别（男/女）肿瘤直径（>3 cm/≤3cm）术前KPS评分（<80分/≥80分）肿瘤切除程度（未全切除/全切除）替莫唑胺化疗（否/是）RBM8A（高表达/低表达）单因素风险比1.212 1.118 1.241 1.523 1.259 2.970 1.782 95%置信区间1.055～1.821 0.692～1.500 0.537～1.672 1.149～3.213 1.014～2.230 1.723～6.034 1.605～2.512 P值0.005 0.813 0.527 0.002 0.024<0.001 0.007多因素风险比1.205 95%置信区间1.036～2.452 P值0.008 1.457 1.520 2.105 1.251 1.026～2.124 1.102～2.561 1.674-4.562 1.412～3.471<0.001<0.001 0.006 0.005

2.3 RBM8A 表达与GBM 病人生存预后及TMZ 化疗敏感性的关系 生存曲线分析显示，RBM8A 高表达GBM 病人中位无复发生存时间和中位总生存时间明显低于低表达病人（

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<0.05）。RBM8A 低表达GBM病人中，术后TMZ化疗病人无复发生存时间明显高于未化疗病人（

P

<0.05），术后TMZ 化疗病人总体生存时间明显高于未化疗病人（

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<0.05）。RBM8A高表达GBM病人，TMZ化疗与病人无复发生存时间和总生存时间无明显关系（

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>0.05）。见图2。

图2 生存曲线分析RBM8A表达与胶质母细胞瘤病人生存预后及替莫唑胺化疗敏感性的关系

3 讨论

RBM8A 基因位于人染色体1q21.1，是高度保守的RBM 蛋白家族成员之一。研究发现RBM8A 参与RNA 的转录翻译、细胞凋亡调控及细胞周期调控。NMD 是一种mRNA 监控机制，可防止有害蛋白质的产生。抑癌基因在转录过程中容易产生无义mRNA，引发NMD，进而导致抑癌基因的翻译提前终止，最终导致肿瘤的发生。由于RBM8A是NMD过程中所必须的蛋白，因此RBM8A可能参与肿瘤的发生、发展。研究发现RBM8A与肝细胞癌和胃癌等发生、发展有关。RBM8A参与肿瘤形成的机制尚未完全明确，可能与RBM8A 调控STAT3 通路、NF-κB信号通路、MAPKs通路和P53信号通路等有关。有研究发现，GBM 组织RBM8A 高表达，通过Notch/STAT3信号通路促进肿瘤细胞增殖和侵袭。

GBM 预后受多种因素的影响。本文多因素分析显示TMZ化疗和RBM8A表达水平是GNM病人预后密切相关。研究发现，RBM8A与多种肿瘤的不良生存预后有关。本文也发现RBM8A高表达病人的无复发生存时间及总体生存时间均模型低于低表达病人。有报道显示，RBM8A 与化疗敏感性有关，例如奥沙利铂。TMZ 是广谱抗肿瘤药物，可以通过血脑屏障。GBM 病人在放疗基础上联合应用TMZ，可以提高存活率。但是，有些GBM病人并未从TMZ治疗中获益。本文发现，对于RBM8A低表达病人，TMZ 化疗病人无复发生存时间和总体生存时间均明显高于未化疗病人；但是对于RBM8A高表达病人，TMZ 化疗并不会影响病人的无方法生存时间和总体生存时间。这提示RBM8A 对预测TMZ 的疗效有一定价值。

综上所述，RBM8A 高表达与GBM 病人不良生存预后及TMZ化疗敏感性有关。