MTHFR基因C677T位点多态性及血脂水平与GDM的关系

王玲玲， 任春丽

（1.承德医学院附属医院检验科，河北 承德 067000；2.承德医学院附属医院产科，河北 承德 067000）

妊娠糖尿病（gestational diabetes mellitus，GDM）是妊娠期女性较为常见的并发症，发病率为1%～14%[1]。GDM的病因和致病机制较为复杂，脂代谢异常是其发生的危险因素之一[2]。另外，GDM的发生可能还具有遗传特异性[3]，亚甲基四氢叶酸还原酶（methylene tetrahydrofolate reductase，MTHFR）基因等遗传易感基因可能参与了GDM的发生、发展。为此，本研究拟探讨MTHFR基因C677T位点多态性及血脂与GDM的关系，为GDM的病因研究提供线索和依据。

1 材料和方法

1.1 研究对象

选取2017年1月—2020年12月承德医学院附属医院住院分娩的GDM患者144例，年龄23～36岁。纳入标准：年龄≥20周岁，孕前无糖尿病史，无其他脏器疾病，无其他代谢性疾病。排除标准：孕前患有糖尿病、其他脏器疾病及其他代谢性疾病，临床资料不全。孕妇在孕24～28周行口服葡萄糖耐量试验（oral glucose tolerance test，OGTT），根据国际糖尿病与妊娠研究组（the International Association of Diabetes and Pregnancy Study Groups，IADPSG）标准：（1）空腹血糖（fasting plasma glucose，FPG）≥5.1 mmol/L；（2）OGTT 1 h血糖≥10.0 mmol/L；（3）OGTT 2 h血糖≥8.5 mmol/L；3项中满足任意1项，且排除孕前糖尿病，即可诊断为GDM。选取同期承德医学院附属医院正常孕妇142例作为对照组，年龄22～36岁。2个组之间年龄差异无统计学意义（P>0.05）。本研究经承德医学院附属医院伦理委员会批准，所有对象均知情同意。

1.2 方法

采集所有孕妇孕24～28周空腹静脉血4 mL，其中2 mL采用乙二胺四乙酸抗凝，用于MTHFR基因检测；另2 mL采用肝素抗凝，用于血脂项目检测。采用聚合酶链反应（polymerase chain reaction，PCR）-荧光探针法检测MTHFR基因C677T位点多态性，MTHFR677C/T基因检测试剂盒购自深圳奥萨医药有限公司，检测仪器为LightCycler 480荧光定量PCR仪（瑞士罗氏公司）。采用AU5800全自动生化分析仪（美国贝克曼库尔特公司）及配套试剂检测三酰甘油（triglyceride，TG）、总胆固醇（total cholesterol，TC）、高密度脂蛋白胆固醇（high-density lipoprotein cholesterol，HDL-C）和低密度脂蛋白胆固醇（low-density lipoprotein cholesterol，LDL-C）水平，计算非高密度脂蛋白胆固醇（non-high-density lipoprotein cholesterol，non-HDL-C）水平，计算公式为：non-HDL-C=TC-HDL-C。

1.3 统计学方法

采用SPSS 25.0软件进行统计分析。等位基因频率采用基因频率法计算，Hardy-Weinberg遗传平衡检验采用拟合优度χ2检验。呈正态分布的计量资料以±s表示，组间比较采用两独立样本t检验。呈非正态分布的计量资料以中位数（M）[四分位数（P25～P75）]表示，组间比较采用Mann-WhitneyU检验。计数资料以例或率表示，组间比较采用χ2检验。采用二元Logistic回归分析评估GDM发生的危险因素。以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 Hardy-Weinberg遗传平衡检验结果

GDM组和对照组MTHFR基因型频率分布均符合Hardy-Weinberg遗传平衡（χ2值分别为1.22、2.30，P>0.05）。

2.2 GDM组与对照组MTHFR基因型分布和等位基因频率比较

GDM组MTHFR基因型分布及等位基因频率与对照组比较，差异均有统计学意义（P<0.01）。见表1。

表1 GDM组与对照组MTHFR基因型分布和等位基因频率比较

2.3 GDM组与对照组血脂水平的比较

与对照组比较，GDM组TG、TC、LDL-C和non-HDL-C水平显著升高（P<0.05），HDL-C水平显著降低（P<0.01）。与CC基因型的GDM患者比较，TT基因型的GDM患者TC、non-HDL-C水平显著升高（P<0.05），HDL-C水平明显降低（P<0.01）；CT基因型的GDM患者TG、TC、LDL-C和non-HDL-C水平显著升高（P<0.05），HDL-C水平显著降低（P<0.01），其他项目各基因型之间差异均无统计学意义（P>0.05）。与CC基因型的正常孕妇比较，TT和CT基因型的正常孕妇TG、TC和non-HDL-C水平均显著升高（P<0.01），其他项目各基因型之间差异均无统计学意义（P>0.05）。见表2。

表2 GDM组与对照组血脂水平比较

2.4 GDM发生的危险因素分析

二元Logistic回归分析结果显示，MTHFRT等位基因频率及LDL-C、non-HDL-C水平升高是GDM发生的危险因素[比值比（odds ratio，OR）值分别为5.25、2.44、1.65，95%可信区间分别为3.66～7.53、1.69～3.53、1.41～1.92]，HDL-C升高是GDM发生的保护因素（OR=0.05，95%CI为0.02～0.13）。见表3。

表3 GDM发生的危险因素的分析

3 讨论

由于诊断标准和人群的差异，不同国家和地区GDM的发病率有所不同，欧洲的发病率为5.4%[4]，我国则高达14%[5]，且呈逐年上升趋势。GDM会导致孕妇发生心脑血管疾病及2型糖尿病（type 2 diabetes mellitus，T2DM）的风险增高，还会增加子代发生T2DM和肥胖等慢性疾病的风险[6]。GDM的致病因素尚不完全清楚，目前认为可能具有与T2DM相似的发病机制和遗传特性[7-8]。这提示与T2DM有关的遗传易感基因和血脂代谢异常可能也参与了GDM的发生、发展。因此，分析GDM的危险因素，了解致病原因，并针对相关危险因素采取预防措施，对于有效降低GDM的发病率和改善妊娠结局有十分重要的价值。

MTHFR基因位于染色体1p36.3，含有11个外显子，编码的MTHFR是蛋氨酸代谢过程中的一个关键酶，相对分子质量为77 000。MTHFR基因的第677个核苷酸等位基因可发生突变，由胞嘧啶（C）突变为胸腺嘧啶（T），并产生3种基因型，即野生型（CC）、突变杂合型（CT）、突变纯和型（TT），发生基金突变后的MTHFR活性和耐热性均下降。目前，已有研究报道MTHFR基因C677T的多态性与T2DM有关[9-10]，但其与GDM关系的研究较少。本研究结果显示，GDM组MTHFR基因型分布及等位基因频率与对照组比较，差异均有统计学意义（P<0.01）。这提示MTHFRC677T基因的多态性可能是GDM的遗传危险因素。

2016年，我国对《中国成人血脂异常防治指南》做了进一步的修订[11]，提出了明确的高脂血症诊断标准，同时推荐不同人群采取不同的血脂管理办法。但该指南是否适用于孕妇尚不明确，目前我国还没有孕期血脂异常的诊断标准和管理办法。女性怀孕后，母体为了满足储存能量和胎儿生长发育的需要，血脂水平会出现生理性升高。正常情况下，孕妇生产以后血脂水平会逐渐恢复正常。但有时孕期的血脂异常会导致妊娠高血压、GDM等妊娠并发症[12]。本研究结果显示，与对照组比较，GDM组TG、TC、LDL-C和non-HDL-C的水平显著升高（P<0.05），HDL-C水平显著降低（P<0.01）。这表明血脂水平与GDM密切相关。一项监测整个孕期血脂水平的纵向研究结果显示，GDM患者孕早期TG、TC和LDL-C水平显著高于正常孕妇，且随着孕期的延长呈升高趋势[13]。

本研究结果显示，与CC基因型的GDM患者比较，TT基因型的GDM患者TC、non-HDL-C水平显著升高（P<0.05），HDL-C水平明显降低（P<0.01）；CT基因型的GDM患者TG、TC、LDL-C和non-HDL-C水平显著升高（P<0.05），HDL-C水平显著降低（P<0.01）。与CC基因型的正常孕妇比较，TT和CT基因型的正常孕妇TG、TC和non-HDL-C水平均显著升高（P<0.01）。二元Logistic回归分析结果显示，MTHFRT等位基因频率及LDL-C、non-HDL-C水平升高是GDM发生的危险因素（OR值分别为5.25、2.44、1.65，95%可信区间分别为3.66～7.53、1.69～3.53、1.41～1.92），HDL-C升高是GDM发生的保护因素（OR=0.05，95%可信区间为0.02～0.13）。由此可见，存在MTHFR基因C677T突变的GDM患者和正常孕妇的血脂水平明显异常。GDM组TT、CT基因型分布和T等位基因频率均明显高于对照组（P<0.01），提示MTHFR基因C677T突变可能与GDM患者血脂异常有关。

本研究的不足之处：（1）GDM的危险因素有很多，MTHFR基因C677T位点多态性和血脂只是其中的一部分，更多危险因素尚需进一步研究；（2）样本量较少，因此得出的结论尚需多中心、大样本量的研究进一步验证；（3）本研究只是发现GDM患者血脂与对照组有差异，尚需进一步确定有效的分界点，以利于GDM的防治和管理。

综上所述，MTHFR基因C677T位点多态性可能与GDM患者血脂异常有关，MTHFRT等位基因频率升高是GDM发生的危险因素。