补嘘养勒糖浆对产后缺乳模型大鼠治疗作用的研究

李 娜 李清平 陈晓艺▲ 黄小童 方 刚

1.广西中医药大学制药厂，广西南宁 530023；2.广西中医药大学壮医药学院，广西南宁 530001

产后缺乳是指产妇在哺乳期内，乳汁分泌缺少或完全没有，不能满足婴儿母乳喂养的需要[1]。中医学认为缺乳多为产妇气血化源不足，或肝气郁结、气机不畅，或气血失调、经脉涩滞所致[2]。随着国家“三孩”政策的开放，高龄产妇产后气血虚弱而致缺乳的情况更加频繁[3]。针对这一形势，广西中医药大学制药厂联合广西中药大学依据国医大师班秀文教授在中医妇产科、壮医药的壮医理论开发研制了用于治疗产后缺乳的制剂——壮药补嘘养勒糖浆（Buxu Yangle Syrup，BXYL）。本研究通过对甲磺酸溴隐亭诱发大鼠缺乳的药理学研究，验证BXYL 治疗产后缺乳的作用，旨在为后期的临床研究提供依据。

1 材料与方法

1.1 实验动物

72 只SD 雌鼠， 体重220～230 g；18 只SD 雄鼠，体重250～260 g， 由长沙市天勤生物技术有限公司提供，许可证号：SCXK（湘）2019-0014。

1.2 材料与试剂

BXYL（由广西中医药大学制药厂以五指毛桃、当归、田七、麦冬、川芎、木瓜提取、制备所得，批号：2020801，每克膏含10 g 药材）；甲磺酸溴隐亭（匈牙利吉瑞大药厂，批号：T04360A）；通乳颗粒[辽宁上药好护士药业（集团）有限公司，批号：200501]；大鼠泌乳素（prolactin，PRL）酶联免疫吸附测定（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）试剂盒（上海泛柯实业有限公司，批号：F3438-A）；HE 染液（北京雷根生物技术有限公司，批号：0603A20）。

1.3 主要仪器

FA1004 型上皿电子天平；Multiskan Go 型全波长全自动多功能酶标仪； 徕卡EG1150 H 石蜡包埋机；徕卡RM2255 切片机；徕卡DM2500 显微镜。

1.4 方法

1.4.1 分组 实验动物适应性饲养1 周后，取未经孕产的SD 大鼠雌鼠与雄鼠按4∶1 的比例同笼饲养， 交配受孕。 以发现仔鼠为分娩后第1 天，将每窝仔鼠数量调整为8 只， 雌雄各半， 同时将受孕成功并分娩的60只母鼠随机分成6 组，分别为空白组、模型组、阳性组和BXYL 低、中、高剂量组。

1.4.2 制备甲磺酸溴隐亭缺乳大鼠模型及试验用药剂量 除空白组外，其余5 组的母鼠每日早晚采用甲磺酸溴隐亭灌胃1 次，连续10 d。 根据人与动物剂量换算法，溴隐亭溶液用药剂量为0.525 mg/kg，按照330 g大鼠灌胃5 ml 的给药体积灌服，溴隐亭溶液的浓度为0.0693 mg/ml。同时开始给药，每日1 次，连续10 d：给药低剂量2.5 g 生药/kg，中剂量5 g 生药/kg，高剂量10 g 生药/kg（分别相当于人用临床剂量的0.5、1、2 倍），通乳颗粒12.0 g/kg。

1.4.3 对缺乳母鼠所喂养仔鼠体重的影响 每日晨8时用电子秤称仔鼠重， 记录每窝仔鼠每日平均体重，仔鼠体重增加率=（仔鼠每日平均体重-分娩第1 天平均体重）/分娩第1 天平均体重×100%。

1.4.4 对大鼠缺乳模型母鼠泌乳量的影响 出生第2天开始，将仔鼠与母鼠分笼，7 h 后，称量每窝仔鼠体重后与母鼠同笼，让母鼠喂乳，1 h 后，重新给每窝仔鼠称重， 将哺乳前后体重差值作为母鼠8 h 的泌乳量。每日测定1 次，连续9 d。

1.4.5 对缺乳母鼠血清泌乳素的影响 6 组母大鼠分别于分娩后第3、7、11 天清晨尾静脉取血，离心，取上清液，采用ELISA 法测定血清PRL 水平。

1.4.6 对缺乳母鼠垂体和乳腺组织学的影响 将以上各组母鼠在分娩后第11 天称重，放血处死，剥离母鼠垂体和乳腺，福尔马林液固定，石蜡包埋切片HE 染色，光镜检查。

1.5 统计学方法

采用SPSS 16.0 统计学软件进行数据分析， 符合正态分布的计量资料用均数±标准差（±s）表示，两组间比较采用t 检验，不符合正态分布者经过变量转换为正态分布后行统计学分析， 以P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 各组母鼠所喂养仔鼠体重的比较

各组每窝仔鼠每日平均体重增长结果见图1，各组仔鼠每日平均体重及仔鼠平均体重增加率见表1。模型组母鼠所喂养仔鼠体重增长率低于空白组，差异有统计学意义（P＜0.05）；BXYL 高剂量组缺乳性母鼠所喂养的仔鼠体重高于模型组， 差异有统计学意义（P＜0.05）（图1、表1）。

表1 各组仔鼠每日平均体重和体重增加率（±s）

表1 各组仔鼠每日平均体重和体重增加率（±s）

注 与模型组同期比较，aP＜0.05，aaP＜0.01；与空白组同期比较，bP＜0.05；与阳性组同期比较，cP＜0.05；BXYL：补嘘养勒糖浆

分娩后时间（d）12 3 4 5 6 7 8 9 1 0 11仔鼠平均体重BW（g）仔鼠体重增加率WR（%）BW BW WR BW WR BW WR BW WR BW WR BW WR BW WR BW WR BW WR BW WR空白组（n=10）7.62±0.94 8.84±1.51a 16.06±11.80 10.38±1.77aa 36.18±14.85a 12.08±2.14aa 58.58±19.22a 13.94±2.36aa 82.95±22.18a 15.90±2.54aa 108.68±24.63a 18.09±2.84a 137.38±28.94a 20.25±3.04a 165.71±32.18 22.49±3.31a 195.11±36.08 24.87±3.97a 226.37±44.56 26.99±4.09a 254.23±46.87模型组（n=10）7.07±0.50 7.54±0.70 7.14±11.81 8.15±1.01 16.49±18.03 9.39±1.41 35.37±23.12 10.78±1.96 56.57±31.34 12.58±2.00 83.90±33.51 14.17±3.06 115.75±48.10 16.37±3.09 149.18±48.07 18.41±3.45 180.32±53.94 20.62±3.37 213.91±53.11 23.05±3.67 250.95±57.43阳性组（n=10）6.95±0.89 9.32±2.49a 34.18±27.86a 9.86±3.03 41.87±34.90a 11.41±3.52 64.19±42.87 13.27±3.80 92.41±47.11a 14.98±4.31 115.56±55.15 17.05±4.54 145.35±58.79 18.89±5.04 171.92±66.65 20.95±5.45 201.55±73.13 23.10±5.84 232.49±78.44 25.61±6.23 268.49±85.05 BXYL 高剂量组（n=10）8.07±0.90aac 9.40±1.69aa 16.47±12.53 10.89±1.18aa 34.89±8.19aa 12.36±0.97aa 53.08±10.46a 14.53±1.26aa 80.03±13.35a 16.35±1.42aa 102.56±16.12a 18.27±1.55aa 126.33±18.71 20.62±1.81aa 155.48±21.55 23.17±2.11aa 187.05±25.34 24.99±1.92aa 209.65±22.38 27.35±2.23aa 238.92±26.68 BXYL 中剂量组（n=10）7.62±1.54 9.19±1.53aa 21.03±18.32 9.96±1.64a 21.28±11.58ab 11.69±1.75a 54.55±12.45a 13.42±1.83aa 77.63±12.54a 15.45±2.13aa 104.85±14.92a 17.20±2.15a 128.29±31.74 19.29±2.11a 156.17±15.60 21.51±2.35a 185.98±17.14 23.60±2.39a 213.96±19.94 26.32±3.45 250.33±34.16 BXYL 低剂量组（n=10）7.17±0.49 8.47±0.60 18.20±4.46 9.84±0.81 37.24±6.78 11.66±0.76 62.61±7.91 13.41±1.25 87.07±16.89 15.80±1.14 120.37±13.36 17.92±1.27 149.89±15.86 20.02±1.81 179.17±24.11 22.39±1.70 212.32±21.69 24.28±2.04 238.68±25.75 25.97±2.81 262.16±36.65

图1 各组仔鼠每日平均体重

2.2 各组母鼠每日8 h 泌乳量的比较

模型组每日8 h 泌乳量低于空白组，差异有统计学意义（P＜0.01）；BXYL 高、中、低剂量组分娩后3～10 d的每日8 h 泌乳量高于模型组，差异有统计学意义（P＜0.01）；BXYL 高、中剂量组与空白组、阳性组的每日8 h泌乳量比较，差异无统计学意义（P＞0.05）（表2）。

表2 各组母鼠每日8 h 泌乳量的比较（g，±s）

表2 各组母鼠每日8 h 泌乳量的比较（g，±s）

注 与模型组同期比较，aP＜0.05，aaP＜0.01；与空白组同期比较，bP＜0.05，bbP＜0.01；与阳性组同期比较，cP＜0.05，ccP＜0.01；BXYL：补嘘养勒糖浆

分娩后时间（d） 空白组（n=10）模型组（n=10）阳性组（n=10）BXYL 高剂量组（n=10）BXYL 中剂量组（n=10）BXYL 低剂量组（n=10）234567891 0 1.13±0.15aa 2.13±0.16aa 2.72±0.22aa 3.56±0.38aa 3.87±0.25aa 4.20±0.29aa 4．65±0.28aa 4.94±0.30aa 5.21±0.27aa 0.84±0.05 1.03±0.13 2.12±0.32 2.54±0.29 2.90±0.24 3.25±0.24 3.72±0.22 4.09±0.22 4.44±0.20 1.06±0.25a 1.54±0.19aa 2.42±0.27a 3.25±0.20aa 3.76±0.35a 4.16±0.33aa 4.55±0.31aa 4.83±0.30aa 5.12±0.29aa 1.20±0.10aa 1.56±0.18aabb 2.54±0.25aa 3.34±0.19aa 3.83±0.30aa 4.23±0.26aa 4.66±0.24aa 4.98±0.24aa 5.21±0.20aa 1.02±0.18a 1.37±0.12aabbc 2.44±0.34a 3.32±0.23aa 3.66±0.39aa 3.94±0.43aa 4.29±0.46aa 4.59±0.42aa 4.95±0.40aa 0.90±0.08bb 1.28±0.14aabbcc 2.38±0.20abb 3.20±0.22aab 3.44±0.39aabb 3.82±0.38aabc 4.23±0.36aabbc 4.53±0.39aab 4.86±0.35aab

2.3 各组母鼠血清PRL 水平的比较

各组母鼠于分娩后第3 天血清PRL 处于分泌峰值，药物对此期血清泌乳素水平影响较大。 模型组母鼠血清PRL 低于空白组，差异有统计学意义（P＜0.05）；阳性组、BXYL 高、中剂量组缺乳母鼠血清PRL 水平高于模型组，差异有统计学意义（P＜0.05）。 随着哺乳天数递增，各组母鼠血清PRL 下降，开始进入分泌稳定期，药物对此稳定期血清PRL 水平仍有影响。 模型组母鼠血清PRL 低于空白组，差异有统计学意义（P＜0.01）；BXYL 高剂量组第11 天血清PRL 水平高于阳性组，差异有统计学意义（P＜0.01）（表3）。

表3 各组母鼠血清PRL 水平的比较（ng/ml，±s）

表3 各组母鼠血清PRL 水平的比较（ng/ml，±s）

注 与模型组同期比较，aP＜0.05，aaP＜0.01；与空白组同期比较，bP＜0.05；与阳性组同期比较，ccP＜0.01；BXYL：补嘘养勒糖浆；PRL：泌乳素

组别 第3 天 第7 天 第11 天空白组（n=10）模型组（n=10）阳性组（n=10）BXYL 高剂量组（n=10）BXYL 中剂量组（n=10）BXYL 低剂量组（n=10）72.75±12.68a 59.70±7.43 67.47±5.21a 73.81±9.65aa 67.88±5.27a 64.52±6.66 30.17±4.96aa 22.83±2.19 26.39±5.25 28.20±5.03aa 27.81±5.78a 25.36±3.63b 27.78±3.16aa 24.00±2.33 24.41±1.65 27.32±2.48aacc 24.76±1.44ab 26.05±1.87a

2.4 各组母鼠垂体和乳腺组织学结果

各组母鼠在分娩后第11 天放血处死， 剥离母鼠垂体和乳腺作组织形态学检查，各组母鼠乳腺组织形态学结果见图2，垂体组织形态学结果见图3。空白组母鼠乳腺腺泡和导管结构正常，腺小叶间有正常的脂肪和结缔组织；模型组母鼠乳腺小叶数量减少，腺泡和导管结构无明显变化，腺小叶间脂肪和结缔组织增多；与模型组比较，阳性组母鼠乳腺腺小叶增多，腺泡增大导管扩张，腺小叶间脂肪和结缔组织减少；BXYL各剂量组母鼠乳腺腺泡及导管数量明显增多，并扩张增生，乳腺小叶间脂肪结缔组织减少（图2）。 空白组母鼠垂体细胞正常；模型组母鼠垂体细胞核固缩样改变，嗜酸性细胞减少；与模型组比较，阳性组母鼠垂体嗜酸性细胞有所增加， 但达不到空白组水平；BXYL各剂量组母鼠垂体细胞形态正常， 嗜酸性细胞增多（图3）。

图2 各组母鼠乳腺组织形态学（HE 染色，100×）

图3 各组母鼠垂体组织形态学（HE 染色，400×）

3 讨论

中医学认为产后缺乳的病因为气血虚弱、津液不足，使乳汁化生乏源，或经脉阻滞、气血不通，使乳络通行不畅，治疗方法应补气养血、活血通络[4]。 BXYL遵循主帮带的配伍原则，由五指毛桃、当归、田七、麦冬、川芎、木瓜组成。 其中五指毛桃，壮名为Gocijcwz，又称为南芪、土北芪等，具有补嘘（气）、健谷道水道、利湿通络的功效， 其补气补虚功同北芪却不温不燥，更适合产妇实用[5]；当归味甘、辛，性温，功能为补血活血、调经止痛[6]；番木瓜味甘，性平，功效为健胃消食、滋补催乳、舒筋通络，主治脾胃虚弱、食欲不振、乳汁缺少等[7]；麦冬壮名为Megdoeng，味甘、微苦，性微寒，功效为养阴生津、润肺清心[8]。方中的各药在壮医防治产后病中使用频率较高[5]。

母乳中含有碳水化合物、蛋白质、脂肪、维生素、矿物质、消化酶和激素等营养素，是婴儿生长发育的最佳营养，而且含有丰富的抗体，是新生儿肠道获得适应性免疫的第一来源[1]。 PRL 是垂体前叶的一种蛋白质激素，PRL 能够促进乳腺的生长和发育， 并促进乳汁的合成和维持乳汁的分泌，经过催乳素刺激乳腺发育，从而产生乳汁成分[17]，产妇泌乳素水平的多少决定了泌乳量的多少[19]。 因此，本研究通过监测仔鼠体重、母鼠泌乳量、母鼠血清PRL、母鼠垂体和乳腺组织学，验证BXYL 对缺乳模型大鼠的治疗作用。结果显示，BXYL 高剂量组中仔鼠的体重高于模型组，差异有统计学意义（P＜0.05）；BXYL 高、中剂量组的泌乳量高于模型组，差异有统计学意义（P＜0.05）；BXYL高、中剂量组与空白组的泌乳量比较，差异无统计学意义（P＞0.05）；随着时间的增长，泌乳素水平逐渐下降后趋于平稳，但因仅记载3 个时间点的数据，还需进一步深入研究；模型组母鼠血清PRL 低于空白组，差异有统计学意义（P＜0.01）；BXYL 高剂量组第11 天血清PRL 水平高于阳性组，差异有统计学意义（P＜0.01），提示BXYL 各剂量组均能改善模型组大鼠缺乳的状态，并有效调节缺乳模型大鼠的泌乳素水平。 各剂量组母鼠乳腺腺泡及导管数量多于模型组， 并扩张增生，乳腺小叶间脂肪结缔组织减少；而BXYL 各剂量组母鼠垂体细胞形态正常，嗜酸性细胞增多。

综上所述，BXYL 可促进缺乳母鼠乳腺腺小叶增多，腺泡及导管扩大增生，减少乳腺小叶间脂肪结缔组织，且明显增加垂体嗜酸性细胞数量和血清泌乳素水平，从而增加母鼠的泌乳量，提高其所喂养的仔鼠体重。 BXYL 对产后缺乳模型大鼠具有明显的催乳作用，其作用机制有待进一步研究。