多腺苷二磷酸核糖聚合酶-1及乳腺癌易感基因-1在三阴性乳腺癌中的表达与意义探究

贾 贺

（单县中心医院病理科，山东 菏泽 274300）

三阴性乳腺癌（triple-negative breast cancer，TNBC）是乳腺癌常见类型，作为女性恶性肿瘤疾病，发病率较高。乳腺癌发病的危险因素较多，比如肥胖、多年乳腺增生病史、居住城市生活压力大、月经初潮较早或绝经年龄较晚、长期精神抑郁刺激、乳腺癌家族史等[1]，而我国近年调查报道显示，乳腺癌发病率持续升高，影响女性身心健康[2]。TNBC指的是分子标记物PR、ER、Her-2均为阴性表达的一类乳腺癌，也是比较特殊的类型，但其在乳腺癌中占15%～24%，相比其他乳腺癌类型，TNBC恶变率更高，侵袭能力更强，进展更快，且复发更早[3]。研究表明，乳腺癌易感基因-1（BRCA-1）表达与多种恶性肿瘤有关，比如恶性黑色素瘤、子宫内膜癌等，且其表达与肿瘤分期及预后也有关[4]。此外，在国外一些报道中指出，多腺苷二磷酸核糖聚合酶-1（PARP-1）抑制剂对BRCA突变的乳腺癌有效[5]。国内关于BRCA-1、PARP-1表达与乳腺癌的研究较多，但多数为单一指标报道，关于TNBC中BRCA-1、PARP-1表达相对少见。本次就单县中心医院收治的TNBC患者进行了研究，旨在探究BRCA-1、PARP-1表达情况，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2017年1月至2021年12月单县中心医院收治的80例乳腺癌患者为研究对象进行回顾性分析，根据是否为TNBC分为观察组（TNBC）和对照组（非TNBC），每组40例。观察组患者年龄23～65岁，平均年龄（42.15±5.31）岁；肿瘤直径：≤2 cm有22例，＞2 cm有18例。对照组患者年龄22～65岁，平均年龄（42.45±5.12）岁；肿瘤直径：≤2 cm有24例，＞2 cm有16例。两组患者一般资料比较，差异无统计学意义（P＞0.05），组间具有可比性。本研究经单县中心医院医学伦理委员会批准。纳入标准：①符合《中国抗癌协会乳腺癌诊治指南与规范（2015版）》[6]中乳腺癌的诊断标准，并经术后病理确诊，其中观察组患者符合《世界卫生组织乳腺肿瘤的组织学分类》[7]中TNBC的诊断标准；②临床资料无缺失。排除标准：①既往乳腺疾病或已接受过放化疗者、精神疾病和其他严重恶性肿瘤；②妊娠或哺乳期者。

1.2 检测方法 入院经手术切除后取患者新鲜乳腺组织标本检测，将采集的组织标本分割为0.1 g左右，存放于EP冻存管（1.5 mL），且取材后30 min内置入-80 ℃保存，以石蜡包埋组织块，实施4 μm厚组织切片，待检。采用免疫组化法检测BRCA-1、PARP-1，方法如下：切片经60 ℃过夜烘干与脱蜡及水化后备用；以蒸馏水处理后，高压抗原修复，冷却到室温；经0.1 mol/L磷酸缓冲盐溶液（PBS）（北京生物制品研究所，国药准字S10850002，规格：1 mL）洗涤，5 min/次，PBS共3次，加入10 mL过氧化物酶阻断剂（合肥卡秋医疗科技有限公司，皖合械备20210096号，规格：100 mL/瓶），时间10～15 min；经0.1 mol/L PBS洗涤，5 min/次，共3次，予以血清封闭15 min；将多余液体甩去，滴入5 mL一抗即兔抗人胸腺细胞免疫球蛋白（Genzyme Polyclonals S.A.S.，国药准字J20130139，规格：5 mL∶25 mg），4 ℃过夜，且选择PBS代替一抗作为空白对照；加100 μL生物素标记二抗（北京百奥莱博科技有限公司，型号：WK376，规格：100 μL），时间10～15 min；经0.1 mol/L PBS洗涤，5 min/次，共3次，加100 mL中性树胶（上海研生实业有限公司，型号：XW-RS-005，规格：100 mL/瓶）；核对显色，予以50 μg苏木精（北京蓝博斯特生物技术有限公司，型号：CH6001，规格：10 g）复染，脱水封固后，采用光镜（成都明萱电子科技有限公司，型号：FGM-XX）检查。

1.3 观察指标 ①比较两组患者BRCA-1、PARP-1表达水平。②分析观察组患者BRCA-1、PARP-1表达水平与临床参数的关系。

1.4 统计学分析 采用SPSS 22.0统计学软件进行数据处理。计量资料以（x）表示，组间比较采用独立样本t检验。以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组患者BRCA-1、PARP-1表达水平比较 观察组患者BRCA-1表达水平低于对照组，而PARP-1表达水平高于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05），见表1。

表1 两组患者BRCA-1、PARP-1表达水平比较（x）

2.2 观察组患者BRCA-1、PARP-1表达水平与临床参数分析 观察组患者BRCA-1表达水平与年龄、淋巴结转移、TNM分期有关（P＜0.05），而PARP-1表达水平与淋巴结转移、TNM分期有关（P＜0.05），见表2。

表2 观察组患者BRCA-1、PARP-1表达水平与临床参数分析（x）

3 讨论

乳腺癌发病率逐年升高，北美与北欧等是该病高发地区，而亚洲与非洲发生率较低。但从20世纪70年代开始，亚洲乳腺癌发病率不断升高，而我国呈现整体升高趋势[8]。TNBC作为特殊的乳腺癌，在我国不同地区发生率有所不同，而且这种乳腺癌除了有侵袭性强与进展快等特点，还有较高的淋巴结转移率，组织学分级普遍较高，治疗难度大，预后较差[9]。从全球范围内相关研究看出，TNBC与种族之间有相关性，BRCA-1基因相关性乳腺癌在乳腺恶性肿瘤中占60%～80%，其中大部分为TNBC，说明这两种亚型之间存在相似的病变机制[10]。另外，抑制PARP-1能降低DNA修复功能，增强对多种肿瘤的治疗效果。为此，针对TNBC患者，可从BRCA-1、PARP-1等方面进行探索，成为研究热点。

本研究结果显示，观察组患者BRCA-1表达水平低于对照组，而PARP-1表达水平高于对照组；观察组患者BRCA-1表达水平与年龄、淋巴结转移、TNM分期有关，而PARP-1表达水平与淋巴结转移、TNM分期有关。在同类研究[11]中有相似结论，但还指出良恶性乳腺肿瘤组织中BRCA-1表达低于正常乳腺组织，且恶性肿瘤组织表达低于良性肿瘤组织表达，说明BRCA-1参与TNBC发生与发展，而且病情越重，则其水平越低。另有BRCA-1表达水平与临床参数研究分析显示，年龄越大其表达水平越高，而临床分期Ⅰ～Ⅱ期中表达水平高于Ⅲ～Ⅳ期，与本研究结论相似，说明BRCA-1是抑癌基因之一[12]。TNBC体内PARP-1表达水平高于非TNBC患者，同类报道中则指出正常乳腺组织、乳腺良性肿瘤、乳腺恶性肿瘤中，PARP-1表达呈递增趋势[13]，说明PARP-1的异常缺失也与乳腺癌发生有关，同时PARP-1表达与淋巴结转移、TNM分期有关，说明TNBC采取PARP-1抑制剂治疗能取得一定的作用。PARP-1作为存于真核细胞中催化聚ADP核糖化的一种细胞核酶，主要在DNA损伤修复与细胞凋亡及基因组稳定性维持中发挥主要作用[14]。从既往体内或体外研究中证实，PARP-1受到抑制后，会导致DNA修复功能降低或被抑制，从而增强放化疗对肿瘤的治疗作用。BRCA-1作为一类抑癌基因，其突变与家族性乳腺癌有关，也是常见的乳腺癌易感基因，发生BRCA-1突变后，进展为乳腺癌的风险显著升高[15]。BRCA-1基因多存在于真核细胞中，是一种有重要的生理功能的蛋白质翻译后的修饰酶，主要作用在于DNA复制与损伤修复、细胞增殖分化调控，甚至对癌基因稳定与细胞凋亡也有作用。随着对其研究不断深入，发现BRCA-1基因高表达和多类恶性肿瘤息息相关，特别是在乳腺癌中有高表达，与恶变程度、淋巴结转移等呈正相关[16]。此外，从研究结果中看出，对于TNBC与非TNBC而言，BRCA-1表达水平与PARP-1表达水平呈相反的趋势，其中TNBC患者中BRCA-1表达水平更低，而PARP-1表达水平更高，说明PARP抑制剂在BRCA-1突变型乳腺癌中应用，可作为新研究方向。但本研究中采集的样本量有限，而且未能与正常乳腺组织进行对比分析，结论可能存在不足，还有待在以后研究中进一步完善。

综上，BRCA-1、PARP-1参与了乳腺癌的发生及发展，TNBC患者BRCA-1表达水平低于非TNBC患者，PARP-1表达水平高于非TNBC患者，且均与淋巴结转移、TNM分期有关，临床应重点加强对淋巴结转移、TNM分期的关注。