贵州毕节市中小型养禽场高致病性禽流感血清学调查
2022-07-14刘馨文明袁阳
刘 馨 文 明 袁 阳
贵州大学动物科学学院，贵阳 550025
禽流感病毒是威胁家禽养殖业发展的一类重要病原，可造成家禽养殖业巨大经济损失。据不完全统计，全球感染H5N1 型禽流感超1 000 例，感染H7N9 近3 000 例，死亡率高达40%[1]。因此，加强禽流感病毒的监测和防治对保障家禽养殖业健康发展及公共卫生安全具有重要意义。目前，用于禽流感血清学检测的方法包括血凝和血凝抑制试验、酶联免疫吸附试验、琼脂扩散试验以及中和试验等，其中血凝和血凝抑制试验利用标准阴阳性血清进行检测，具有特异性强、准确度高的特点，被广泛用于禽流感病毒的临床检测。毕节市作为贵州省西北部的一个生态养殖类大市，家禽养殖业正处于蓬勃发展阶段[2]。本研究通过对毕节市中小型养禽场血清的抗体水平以及同一养禽场不同时间段进行检测，充分掌握毕节市中小型养禽场禽流感免疫数据，以期为后期指定免疫程序提供参考，有效提升养禽场的免疫程序合理性，为禽流感的预防和监测提供支撑。
1 材料与方法
1.1 材 料
16 家中小型养禽场血清样本由毕节市七星关区动物疫病预防控制中心提供，其中，采集中型养殖场血清样本均为10 份，小型养殖场血清样本4～9份不等，共计140 份；2020年8月、2020年12月和2021年4月3 个季度月由毕节市A 场提供，不同时间段血清样本数量分别为17、50 和60 份，共计127份。
1.2 方 法
1）样品采集。翅静脉采取2 mL/只鸡全血，等量装入离心管中2 000 r/min 离心5 min。待离心结束后，用滴管吸取上清液，按序标号（注意避免温度过低造成样品呈果冻样从而无法析出血清），置于-20 ℃冰箱内待检。
2）HA-HI 试验。HA 试验中取一次性96 孔V 型微量反应板，于1～12 孔中依次分别加入0.025 mL PBS溶液；吸取0.025 mL 标准病毒原液加入第1 孔中，反复吹打数次混匀；从第1 孔吸取0.025 mL 病毒液加入第2 孔，吸取0.025 mL 加入第3 孔，重复上述操作，依此倍比稀释至第11 孔，混匀后吸取0.025 mL 弃之。第12 孔留做空白对照；吸取0.025 mL PBS 依次加入；充分混匀红细胞悬液，依次加入0.025 mL 体积分数1%的鸡红细胞悬液；振荡混匀，于2～8 ℃下静置45～60 min 观察结果。而HI 试验则利用相同原理倍比稀释后吸取0.025 mL 4HAU 抗原依次于1～11 孔加入，于20～25 ℃室温下静置30 min；每孔依次加入0.025 mL 体积分数为1%的鸡红细胞溶液，震荡均匀后静置30 min 观察结果，红细胞将呈明显纽扣状沉淀。
2 结果与分析
2.1 16 家中小型养禽场血清抗体水平
经调查显示（表1）：140 份受检血清样本中，H5亚型禽流感血清抗体阳性为110 份，H7 亚型禽流感血清抗体阳性为104 份；H5 亚型平均阳性率为77.74%，H7 亚型平均阳性率为73.66%。以群体免疫阳性率达75%及以上者定义为合格，16 个中小型养禽场中，H5 亚型血清抗体5 个不合格，H7 亚型血清抗体6 个不合格，平均合格率分别为68.75%和62.5%。
表1 毕节市16 家中小型养禽场血清抗体水平
16 家中小型养禽场H5 亚型禽流感血清抗体水平阳性率最高为100%，最低为0%，其中8 家养禽场抗体水平达100%，2 家抗体水平为0%（图1）。H7 亚型禽流感血清抗体水平最高阳性率为100%，最低为0%，其中有8 家养禽场抗体水平达100%，有2 家抗体水平为0%（图2）。
图1 16 家养禽场H5 亚型血清抗体阳性率
图2 16 家养禽场H7 亚型血清抗体阳性率
140 份受检血清样本中，H7 亚型抗体效价为8的血清样本共44 份，而抗体效价为1、9 和10 的血清样本为0 份（表3）。
2.2 A 场不同时间点血清抗体水平
对2020年8月、2020年12月以及2021年4月的3 个时间点共检测血清样本127 份。其中H5阳性数为120 份，平均阳性率为94.13%；H7 阳性数为127 份，平均阳性率为100%。以群体免疫达75%以上定义为合格，结果发现2 种高致病性血清亚型均为合格。其中，A 场H5 亚型血清抗体水平在2020年8月、12月2021年4月分别为94.1%、90.0%和98.3%，H7 亚型血清抗体呈稳定状态，在2020年8月、12月和2021年4月均为100%（表2）。
表2 A 场不同时间点血清抗体水平
3 讨 论
对毕节市16 家中小型养禽场高致病性禽流感调查发现，H5 亚型血清抗体的平均阳性率为77.74%，H7 亚型血清抗体的平均阳性率为73.66%。以群体免疫比例为75%及其以上定义为符合标准，则H5 亚型血清抗体水平合格率为68.75%，H7 亚型血清抗体合格率为62.5%；毕节市16 家中小型养禽场H5 血清抗体分布中，HI 效价为8 的比例最高，为44%，HI 效价为5 最低，为3%。未发现HI 效价为1、9 和10 的存在；毕节市16 家中小型养禽场H7 血清抗体分布中，HI 效价为8 的比例最高，为31%，而HI 效价为0 仅次于8，占比为21%，HI 效价为2 最低，为2%。未发现HI 效价为1、9 和10 的存在；对A 场不同季节的血清学试验研究发现，血清抗体水平随检测时间的变化而变化：冬季时期（12月）H5 亚型血清抗体水平最低，而春秋季时期（8月、4月）血清抗体水平较高。
