子宫内膜异位症痛经患者血清中IL-17表达及临床价值

刘恒炼 夏敏

子宫内膜异位症(endometriosis，EMs)是目前临床上一种常见的妇科疾病，在育龄期女性中多发[1]。EMs的主要特征是慢性盆腔疼痛、痛经和不孕，其病理改变的特点是在子宫之外的其他位置或盆腔内出现了具有正常生理功能的子宫内膜腺体及基质[2]。EMs患者有 87.7%会出现痛经症状，疼痛的机制可能与免疫炎性反应、前列腺素升高、激素水平依赖等相关[3]。关于该病发病机制的研究至今尚未有定论，常见有以下几种发病学说，即经血逆流学说，体腔上皮细胞化生学说，静脉及淋巴运送学说，炎症及免疫学说，遗传学说等[4-5]。近年研究发现[6]，EMs病变组织的形成过程包括反复受损、出血、炎症反应与机体抗炎修复等，与机体慢性炎症的免疫反应有密切关系。

随着近年对人体自身免疫性的疾病及慢性的炎症反应性疾病研究的深入，研究人员发现了免疫细胞T细胞的多种亚群，其中Th17细胞这一亚群在免疫系统中发挥重要作用[7-8]。本研究的目的是检测在EMs痛经患者血清中IL-17的表达水平，并探讨其临床价值。

资料与方法

1.资料：选择2019年10月至2020年10月在重庆市中医院妇科就诊的子宫内膜异位症痛经患者作为研究对象。纳入标准包括(1)经腹腔镜检查或开腹手术探查及病理组织活检确诊为子宫内膜异位症的患者；(2)患者伴有痛经症状；(3)近三月内未使用药物或其他治疗的。排除标准包括(1)同时合并有多囊卵巢综合征、子宫腺肌病、盆腔炎等其他妇科疾病；(2)患有慢性炎症性的免疫疾病，如类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮、慢性肠炎、银屑病等；(3)患有代谢性疾病，如糖尿病、高血压等；(4)患有恶性肿瘤等严重疾病。根据上述标准，共纳入52例患者作为观察组，另选取同期52名体检正常的健康女性作为对照组。

2.方法：记录两组患者年龄、身高和体重等基本资料信息；对观察组52名患者进行r-AFS分期，Ⅰ期为微小型，7名；Ⅱ期为轻型，15名；Ⅲ期为中型，18名；Ⅳ期为重型，12名。对观察组52名患者的痛经程度进行VAS评分，无痛为0分，轻度疼痛为1～3分，中度疼痛为4～6分，7～10分为重度疼痛，其中轻度(<4分)18名，中重度(≥4分)34名。

取两组人员5～10 mL外周静脉血，采用ELISA法检测血清中IL-17、IFN-γ和IL-6水平。具体方法为(1)稀释血清并配置所需标准液；(2)加样，每孔分别加入100 μL标准液或待测血清，37℃水浴箱中孵育40 min；(3)用洗涤液进行洗板；(4)每孔分别加入50 μL蒸馏水或一抗，37℃水浴箱中孵育20 min；(5)用洗涤液进行洗板；(6)每孔各加入100 μL酶标抗体，37℃水浴箱中孵育10 min；(7)用洗涤液进行洗板；(8)每孔各加入100 μL底物工作液，37℃水浴箱中孵育15 min；(9)每孔加入100 μL终止液；使用酶标仪进行OD值检测(在450 nm处检测光密度)。

3.统计学处理：使用SPSS 22.0统计学软件对两组数据进行处理和分析，结果采用均值±标准差表示，对于计量资料使用独立样本t检验，P<0.05表示差异具有统计学意义。

结果

1.两组基本资料比较:两组年龄、身高及体重方面比较，差异无统计学意义，具有可比性，见表1。

表1 两组基本资料比较

2.两组血清中IL-17、IL-6及IFN-γ水平比较：观察组血清中IL-17、IL-6及IFN-γ水平均明显高于对照组,差异有统计学意义，见表2。

表2 两组血清中IL-17、IL-6及IFN-γ水平比较(pg/mL)

3.不同r-AFS分期患者血清中IL-17、IL-6及IFN-γ水平比较：观察组按照r-AFS分期，Ⅰ-Ⅳ期，血清中IL-17、IL-6及IFN-γ水平逐渐升高；Ⅳ期血清中IL-17水平显著高于Ⅰ期(P=0.046),IL-6水平与Ⅰ期相比无差异(P=0.164)，IFN-γ水平显著高于Ⅰ期(P=0.002)，见表3。

表3 观察组不同r-AFS分期患者血清中IL-17、IL-6及IFN-γ水平比较(pg/mL)

4.不同VAS评分患者血清中IL-17、IL-6及IFN-γ水平比较：观察组根据VAS评分，中重度疼痛患者血清中IL-17水平显著高于轻度疼痛患者(P=0.045)、IFN-γ水平显著高于轻度疼痛患者(P=0.001)、IL-6水平与轻度患者相比无差异(P=0.176)，见表4。

表4 观察组不同VAS评分患者血清中IL-17、IL-6及IFN-γ水平比较(pg/mL)

讨论

近年研究发现，机体内慢性炎症的免疫反应是经血逆流发生的病理基础，EMs的形成与机体慢性炎症的免疫反应有密切关系[9-11]。T淋巴细胞介导的免疫机制介导了多种炎症途径。Th17细胞[12]对机体炎症反应的发生有强烈的促进作用，其能够分泌多种细胞炎症因子，最主要的是IL-17。IL-17与相关受体结合之后能促进IFN-γ、IL-6及趋化因子的表达，诱导炎症反应，对免疫应答反应进行调节。此外，IL-17还能够促进前列腺素E2和IL-6的分泌，引起其他炎症因子(如IFN-γ和IL-β等)表达增多，增强炎症反应。在人体免疫反应中，当Th17/IL-17这一免疫通路被激活，则内皮细胞及其他多种免疫细胞会在其促进下分泌多种细胞因子[13-14]，如G-CSF、IL-8、ICAM-1和IL-6等，其他T细胞的亚群也被激活，TNF-a及IL-6等细胞因子的分泌会进一步增多。同时，IL-23、IL-6及IFN-β等会反馈性地增强Th17细胞的成熟分化，则IL-17的分泌量也增多[15]。孙文杰等[16]通过回顾性研究发现CRP、IL-6、IL-17和NLR参与了EMs的发生和发展，IL-6分别与IL-17和CRP成正相关。因此，认为CRP、IL-6、IL-17三个指标联合检测可提高EMs诊断的灵敏度和特异性。本研究发现，EMs痛经患者血清中IL-17及另外两种细胞因子IL-6、IFN-γ的表达水平明显高于正常对照组；按照r-AFS分期，EMs症状越重的患者，其血清中IL-17等细胞因子的表达水平越高；根据疼痛VAS评分，EMs痛经患者中，疼痛程度越重的患者血清中IL-17等细胞因子的表达水平也越高。本研究显示，在子宫内膜异位症痛经患者血清中IL-17水平明显升高，证实IL-17参与的炎症免疫反应与子宫内膜异位症痛经的发生有密切关系，可以通过对IL-17的测定来对EMs痛经患者进行病情严重程度的评估，并为临床采用调节炎症免疫反应的方式治疗EMs痛经提供了理论支持，在临床上具有预测和疗效判定的意义。与其他研究需要的多个指标联合检测进行诊断[16]相对节约了成本，提高了诊断率，可操作性得到提高。但其具体的调节治疗方法尚有待进一步研究。