冠状动脉粥样硬化性心脏病患者血浆微小RNA-34a水平对冠状动脉病变程度的影响

丛琳强

(滨州医学院烟台附属医院 心内科, 山东 烟台, 264100)

冠状动脉粥样硬化心脏性疾病(CHD)是严重威胁人类生命安全与生活质量的世界性健康问题，致残率与致死率均极高[1]。CHD的病理表现为冠状动脉管腔形成斑块，出现钙化和淀粉样变，造成管腔狭窄与血管壁毛糙，严重时甚至引发管腔完全闭塞并形成血栓，阻碍冠状动脉血流灌注，导致冠状动脉病变，引发心肌细胞凋亡、坏死以及心肌纤维化[2]。冠状动脉慢性完全闭塞病变(CTO)作为典型的CHD病变，冠状动脉病变相对复杂且病变时间更长，是近年来心血管疾病临床治疗的难点与重点之一[3]。微小RNA(miRNA)作为内源性的非编码单链RNA, 具有重要的生物学性质与作用，且不同的miRNA可能参与多种调控基因的表达[4]。相关研究[5]显示，微小RNA-34a(miR-34a)表达水平与CHD的病理生理过程密切相关。本研究分析CHD患者血浆miR-34a水平与其冠状动脉病变程度的相关性，以期确定miR-34a能否作为新型生物学标志物对CHD患者冠状动脉病变程度进行评估，现报告如下。

1 对象与方法

1.1 研究对象

选取2019年12月—2020年12月入住滨州医学院烟台附属医院心血管内科的93例患者作为研究对象。根据冠状动脉介入造影检查结果，将93例患者分为对照组(非CHD患者)20例与实验组(CHD患者)73例，并根据病变是否为CTO将实验组患者分为CTO组18例与非CTO组55例。CHD患者纳入标准: ① 符合CHD的临床诊断标准者; ② 一般资料完整者; ③ 心肌损伤标志物水平升高者; ④ 冠状动脉造影检查提示血管病变者。非CHD患者纳入标准: 同期体检的各项指标正常的患者。排除标准: ① 合并严重肝肾功能不全或脑卒中者; ② 合并急性肺栓塞、心肌炎等疾病者; ③ 血液系统疾病及自身免疫性疾病患者; ④ 使用类固醇药物或消炎镇痛药治疗者。本研究经滨州医学院烟台附属医院伦理委员会审核批准，且所有患者签署知情同意书。

1.2 方法

血浆miR-34a水平检测: ① 采集患者静脉血(6 mL), 使用乙二胺四乙酸(EDTA)抗凝管保存并进行2次离心处理。② 将离心后的血浆移至无菌EP管，并标注操作时间及患者所属组别。③ 采用血浆microRNA快速提取试剂盒Ⅲ型进行基因提取，具体操作严格按照试剂盒说明书[6]进行，并将收集到的纯miRNA保存于-80 ℃环境待用。④ 采用紫外分光光度法[7]进行miRNA浓度测量，并将获得的血浆miR-34a浓度转化为相对定量值。

冠状动脉病变程度评估: 采用SYNTAX评分和Gensini评分对CHD患者的冠状动脉病变程度进行评估，并以此为基础进一步分析血浆miR-34a水平与CHD患者冠状动脉病变程度的相关性。SYNTAX系统作为衡量冠状动脉病变风险的工具，可通过SYNTAX评分的高低评估术前风险与预后。Gensini评分法是对冠状动脉狭窄程度进行评分的方法，各病变血管评分为病变部分系数与其冠状动脉狭窄基本评分的乘积，总评分为各病变血管评分的总和[8]。

1.3 评分标准

对实验组73例CHD患者实施冠状动脉造影术，并结合造影结果评估SYNTAX评分和Gensini评分。SYNTAX评分按照评分高低可分为高评分(>32分)、中评分(>22～32分)和低评分(0～22分)。Gensini评分标准: 狭窄直径<25%, 1分; 狭窄直径25%～<50%, 2分; 狭窄直径50%～<75%, 4分; 狭窄直径75%～<90%, 8分; 狭窄直径90%～<99%, 16分; 狭窄直径99%～<100%, 32分。

1.4 统计学分析

2 结 果

2.1 各组患者临床资料及血浆miR-34a表达水平比较

非CTO组、CTO组的年龄、收缩压、舒张压和白细胞、血浆miR-34a水平均高于对照组，差异有统计学意义(P<0.05); CTO组有高血压病史者、有糖尿病史者占比和血小板水平均高于对照组，差异有统计学意义(P<0.05); CTO组血浆miR-34a水平高于非CTO组，差异有统计学意义(P<0.05); 3组体质量指数、性别和甘油三酯、总胆固醇、空腹血糖水平比较，差异均无统计学意义(P>0.05)。见表1。

表1 各组患者临床资料及血浆微小RNA-34a表达水平比较

2.2 CHD患者SYNTAX评分与Gensini评分的相关性分析

相关性分析显示, CHD患者SYNTAX评分与Gensini评分呈显著正相关(r=0.361,P<0.001), 表明SYNTAX评分与Gensini评分的一致性较好，见图1。

图1 CHD患者SYNTAX评分与Gensini评分的相关性分析图

2.3 不同SYNTAX评分组CHD患者血浆miR-34a水平及病变血管分布情况比较

根据SYNTAX评分将实验组73例患者分为低评分组(0～22分)33例、中评分组(>22～32分)20例和高评分组(>32分)20例。高评分组多血管病变、CTO者占比和病变血管为左主干、左旋支、右冠状动脉者占比均高于低评分组，中评分组多血管病变、CTO者占比和病变血管为左主干者占比均高于低评分组，高评分组CTO者占比高于中评分组，差异有统计学意义(P<0.05); 低评分组、中评分组、高评分组CHD患者的血浆miR-34a表达水平呈梯度上升趋势，组间差异有统计学意义(P<0.05)。见表2。

表2 不同SYNTAX评分组患者血浆微小RNA-34a水平及病变血管分布情况比较

2.4 不同Gensini评分组CHD患者血浆miR-34a水平及病变血管分布情况比较

根据Gensini评分将实验组73例患者分为G1组(0～32分)29例、G2组(>32～68分)21例、G3组(>68～110分)13例和G4组(>110～256分)10例。G4组病变血管为左主干、左旋支者占比高于G1组, G2组、G3组、G4组多血管病变者占比高于G1组，差异有统计学意义(P<0.05); G3组、G4组CTO者占比均高于G1组、G2组，差异有统计学意义(P<0.05); G1组、G2组、G3组、G4组CHD患者血浆miR-34a表达水平呈梯度上升趋势，组间差异有统计学意义(P<0.05)。见表3。

表3 不同Gensini评分组患者血浆微小RNA-34a水平及病变血管分布情况比较

2.5 CHD患者血浆miR-34a水平诊断冠状动脉病变的ROC曲线及与SYNTAX评分、Gensini评分的相关性

ROC曲线显示，血浆miR-34a水平诊断冠状动脉病变(SYNTAX评分)的曲线下面积(AUC)为0.786, 95%CI为0.739～0.829, 敏感度为0.533, 特异度为0.892, 见图2A; ROC曲线显示，血浆miR-34a水平诊断冠状动脉病变(Gensini评分)的AUC为0.793, 95%CI为0.745～0.835, 敏感度为0.739, 特异度为0.746, 见图2B; 相关性分析显示, CHD患者血浆miR-34a表达水平与SYNTAX评分、Gensini评分均呈显著正相关(r=0.084、0.076,P<0.001), 见图2C、图2D。

A: 血浆miR-34a水平诊断冠状动脉病变(SYNTAX评分)的ROC曲线; B: 血浆miR-34a水平诊断冠状动脉病变(Gensini评分)的ROC曲线; C: 血浆miR-34a水平与SYNTAX评分的相关性; D: 血浆miR-34a水平与Gensini评分的相关性。图2 CHD患者血浆miR-34a水平诊断冠状动脉病变的ROC曲线及相关性分析图

3 讨 论

CHD具有极高的致残率与致死率，不仅严重威胁患者的生命安全与生活质量，而且会对社会经济等造成重大负面影响[9]。miRNA作为内源性的非编码单链RNA, 具有重要的生物学性质与作用[10]。研究[11-13]表明，血浆miR-34a作为小分子非编码RNA, 对多种心血管疾病具有重要的诊断价值[14]。鉴于此，作者猜想血浆miR-34a与CHD患者冠状动脉病变程度存在正相关性，并在此基础上展开研究。本研究结果显示，对照组、非CTO组、CTO组患者血浆miR-34a水平呈梯度上升趋势，组间差异有统计学意义(P<0.05)。miR-34a在动脉粥样硬化斑块中的表达水平较高，故血管病变更为严重的CHD患者体内血浆miR-34a表达水平显著更高[15-16], 这也解释了非CTO组与CTO组患者血浆miR-34a表达水平的差异性。

本研究发现, CHD患者血浆miR-34a水平随着SYNTAX评分、Gensini评分的升高呈现梯度上升趋势，且血浆miR-34a水平与SYNTAX评分、Gensini评分均呈显著正相关性(P<0.001)。由此表明，通过SYNTAX评分、Gensini评分判断血浆miR-34a水平与CHD患者冠状动脉病变程度的相关性，可验证本研究的猜想，即血浆miR-34a与CHD患者冠状动脉病变程度密切相关[17-18]。但由于样本收集时间较短且样本量较少，本研究的样本统计分析结果可能存在误差，未来还需要扩大样本量进一步深入研究。

综上所述，血浆miR-34a水平与CHD患者冠状动脉病变程度呈正相关，有望作为评估CHD患者冠状动脉病变程度的新型生物学指标，建议临床人员继续深入研究。