乳块散结颗粒制备工艺研究

周维利，孙铜，王坤

(山东省食品药品检验研究院，山东 济南 250101)

乳块散结颗粒由丹参、川楝子、皂角刺、柴胡(醋制)、赤芍、醋香附、夏枯草、鳖甲(醋制)、橘叶、昆布、王不留行和淫羊藿组成，功能活血化瘀，疏肝理气，软坚散结。临床上用于肝气瘀滞，痰瘀互结所致的乳腺增生。本试验以丹参素含量为指标，对其提取和制备工艺进行了研究，现报道如下。

1 仪器与材料

1.1 仪器 HS-337电子分析天平(邢台慧思科技有限公司)；ESJ203-S电子分析天平(洛阳美优实验设备有限公司)；KQ3200DE型数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)；岛津LC-20高效液相色谱仪(岛津)；Shimpack VP-ODS(C18柱，4.6 mm×250 mm，5 μm)；LC-RE-5000旋转蒸发仪(上海力辰仪器科技有限公司)；101-1AB电热恒温干燥箱(金坛市水北科普实验仪器厂)。提取设备、离心机。

1.2 试剂 丹参、川楝子、皂角刺、柴胡(醋制)等药材饮片(济南漱玉平民大药房有限公司)、丹参素对照品(110855-201614，20 mg/支，标示含量98.1%，中国食品药品检定研究院)；乳块散结颗粒(自制)；阴性对样品(自制)；乙腈、甲醇和冰醋酸为色谱纯，水为重蒸去离子水，草酸为分析纯。

2 方法与结果

2.1 丹参素含量测定方法

2.1.1 色谱条件与系统适应性试验[1-6]以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-甲醇-水-冰醋酸(0.5∶8∶92∶1)为流动相；检测波长为280 nm。理论板数按丹参素峰计算不得低于3 500。

2.1.2 对照品溶液 取丹参素钠对照品适量，精密称定，加50%甲醇溶液制成每1 mL含50 μg的溶液(相当于每1含丹参素45 μg)，即得[7]。

2.1.3 供试品溶液 ①取乳块散结颗粒适量，研细，取约1.0 g，精密称定，置离心管中，加水2 mL及中性氧化铝(100～200目)1.5 g，搅拌均匀，用水洗涤3次，每次10 mL，离心(3 000 r·min-1)弃去水洗液，再用5%草酸溶液搅拌提取3次，每次8 mL，离心，合并5%草酸溶液，置25 mL量瓶中，加5%草酸溶液至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得[7]；②取工艺研究试验得清膏2 mL，置离心管中，中性氧化铝(100～200目)1.5 g，搅拌均匀，同①操作，即得。

2.1.4 阴性溶液 制备不含丹参的乳块散结颗粒，按“2.1.3”项下操作，即得阴性样品。

2.1.5 专属性 分别取乳块散结颗粒供试品、丹参素对照品以及阴性对照3种溶液，按“2.1.1”项下色谱条件进样、测定，不含丹参的阴性对照在丹参素峰处无干扰,见图1～3。

图1 丹参素对照品HPLC图

图2 乳块散结颗粒HPLC图

图3 不含丹参阴性HPLC图

2.1.6 线性与范围 取丹参素钠对照品适量，精密称定，加5%草酸溶液溶解并稀释至刻度，作为丹参素钠对照品贮备液(相当于含丹参素264.55 g·mL-1)；分别精密量取1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0、7.0、8.0 mL贮备液置25 mL量瓶中，用5%草酸溶液稀释至刻度，摇匀，作为丹参素对照品溶液。分别吸取上述对照品溶液，按“2.1.1”项下条件进样、测定，以浓度C和峰面积A计算，得回归方程为A=78 937C+928.57，R2=0.999 3；丹参素在10.58～84.65 μg·mL-1范围内，峰面积与浓度呈良好线性关系。

2.1.7 精密度试验 取丹参素对照品溶液(42.33 μg·mL-1)按“2.1.1”项下色谱条件进样、测定，连续进样6次，峰面积RSD为1.21%。

2.1.8 重复性试验 取20200502批乳块散结颗粒(1.02 mg·g-1)样品6份，按“2.1.3”项下制备，按“2.1.1”项下色谱条件进样、测定，重复测定6次，丹参素含量的RSD为0.996%。

2.1.9 稳定性试验 取20200502批乳块散结颗粒供试品溶液分别于0、2、4、6、8和12 h进样测定，丹参素峰面积RSD为0.867%，供试品溶液在室温条件下在12 h内稳定。

2.1.10 回收率试验 取20200502批乳块散结颗粒适量，研细，取约0.5 g，精密称定，取6份，照“2.1.3”项下方法处理，并分别加入丹参素对照品溶液(52.91 μg·mL-1)10.0 mL，混匀，按“2.1.1”项下色谱条件进样、测定，丹参素平均回收率为97.45%，RSD为1.56%。

2.2 工艺研究

2.2.1 提取工艺研究 通过预试验及参考相关文献，经预试验后以水为提取溶剂。分别称取丹参200 g、川楝子40 g、皂角刺64 g、柴胡(醋制)48 g、赤芍56 g、醋香附40 g、夏枯草40 g、鳖甲(醋制)40 g、王不留行64 g、橘叶64 g、昆布64 g、淫羊藿80 g，共9份，每份计800 g，按表1进行试验，以丹参素含量为评价指标进行试验，因素水平见表1～3。

表1 水提因素水平表

表2 L9(34)正交试验设计与结果

表3 水提方差分析

由直观分析可知，各因素影响依次为B>A>C，最佳为A3B3C2(药材加8倍量水提取3次，每次3 h)；考虑到生产成本、效率和人工等因素，综合考虑选择A2B2C1(药材加8倍量水提取2次，每次2 h)。

2.2.2 提取工艺验证 称取乳块散结颗粒处方中各药材饮片6份，每份800 g，分别按A3B3C1和A2B2C1各提取3次，浓缩为1.26(80 ℃)的清膏，测定丹参素含量，结果见表4。

表4 提取工艺验证试验结果表

按A3B3C1与A2B2C1工艺各提取3次，工艺A2B2C1与工艺A3B3C1相比，丹参素含量基本无差别，故选择按A2B2C1进行提取。

2.2.3 醇沉工艺研究

2.2.3.1 醇沉浓度试验 称取乳块散结颗粒处方中各药材饮片4份，每份800 g，按A2B2C1提取，提取液滤过，滤液合并浓缩至1.27(80 ℃)的清膏，分成4份，以不同含醇量进行醇沉，搅匀，静置48 h，滤取上清液，回收乙醇，浓缩为稠膏，测定丹参素含量与稠膏率，结果见表5。

表5 醇沉浓度试验结果表

乙醇浓度为75%进行醇沉时丹参素含量与出稠膏均合适，故选择醇沉浓度为75%。

2.2.3.2 静置时间试验 按“2.2.3.1”项下方法制备清膏，测定含量，分成4份，加乙醇进行醇沉，静置不同时间，滤取上清液，回收乙醇，浓缩为稠膏，测定丹参素含量与稠膏率，结果见表6。

表6 醇沉后静置时间试验结果表

药液静置48 h，分层明显，容易过滤，故选择静置时间为48 h。

2.2.4 成型工艺研究 取丹参200 g、川楝子40 g、皂角刺64 g、柴胡(醋制)48 g、赤芍56 g、醋香附40 g、夏枯草40 g、鳖甲(醋制)40 g、王不留行64 g、橘叶64 g、昆布64 g、淫羊藿80 g，每份计800 g，4份，按“2.2.3.1”项下方法制备清膏，使乙醇浓度达75%，醇沉，静置，滤过，回收乙醇，浓缩为稠膏，分成4份，加入不赋形剂制软材，以14目尼龙网筛制粒，75 ℃干燥，16目筛整粒。

表7 赋形剂试验结果表

结果：在成型试验中，以可溶性淀粉与糊精(1∶1)赋形剂时易制粒，颗粒成型率最佳。

3 讨论

3.1 处方中药材饮片的各主要药理成分均溶于水，以水溶性成分丹参素含量为指标，经预试验后以水为溶剂进行了正交优选，对乳块散结颗粒的最佳直观工艺和综合考虑后提取工艺各进行3批验证试验，最终选定提取工艺为药材饮片加8倍量水提取2次，每次2 h。为最大可能保留有效成分，易于成型，减少颗粒装量，便于患者服用，水提液浓缩至相对密度为1.25～1.30(80 ℃)时进行了醇沉，减少出膏量。

3.2 可溶性淀粉为白色细腻粉末，是可溶颗粒的良好稀释剂，并有矫味及黏合作用；糊精为白色或微带黄色的细腻粉末，不溶于醇，微溶于水，能溶于沸水成黏胶状溶液，黏性强，并呈弱酸性[8]。在颗粒的成型试验中，醇沉后上清液浓缩成稠膏，加入可溶性淀粉与糊精(1∶1)为赋形剂制粒，在赋形剂与稠膏比大于3时易于制粒，颗粒成型性好，简化了清膏干燥、粉碎的工序，可节约资源与人工，提高生产效率。