宫颈癌手术患者FOXF2与凋亡基因表达的相关性及意义

谢加琼 徐蕾 何蔚

宫颈癌是女性最常见的恶性肿瘤性疾病之一，其恶性程度较高、符合手术指征的患者术后复发转移率不低[1,2]。积极寻找宫颈癌患者手术后复发的机制并降低复发转移率是目前临床研究的重点之一。siRNA干扰叉头框转录因子F2(FOXF2)是FOX转录因子家族的重要成员之一，发现其与胚胎及组织发育、上皮间质转化等相关，通过调节细胞极性而维持组织稳态[3,4]，其在不少肿瘤组织中呈低表达并加快肿瘤发生发展。FOXF2与宫颈癌的研究也有部分开展，如细胞研究发现siRNA干扰FOXF2可促进SiHa细胞的体外转移及增殖能力[5]，提示低表达的FOXF2促进宫颈癌进展。本次研究讨论FOXF2与宫颈癌手术预后的关系，旨在为后续宫颈癌患者的预后早期评估及干预等提供新途径。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2017年1月至2019年1月在西南医科大学附属医院和成都医学院第一附属医院接受手术治疗的118例宫颈癌患者的组织标本为宫颈癌组，年龄38～72岁，平均(53.34±15.28)岁。同期100例宫颈息肉患者行息肉切除术并将其宫颈组织标本作为对照组，年龄37～67岁，平均(52.39±12.27)岁。2组患者的性别比、年龄差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。术中所有组织标本冻存于液氮罐中保存，术前告知患者相关事宜并签署知情同意书，研究方案获本院伦理委员会审核批准。

1.2 纳入与排除标准

1.2.1 纳入标准：①宫颈癌病灶组织标本均术后病理证实为原发性宫颈癌；②术前未接受放化疗等保守治疗；③临床资料完整且完成随访。

1.2.2 排除标准：①合并其他原发恶性肿瘤性疾病；②合并严重自身免疫性疾病者；③合并严重心肝肾功能不全者；④妊娠或者哺乳期女性。

1.3 qRT-PCR法测定宫颈组织中FOXF2与凋亡基因表达量 将病灶组织剪碎、碾磨并加入细胞裂解液，提取总RNA。参照逆转录试剂盒说明逆转录为互补cDNA，以U6为内参设计引物、使用SYBR Green Master Mix试剂盒对目标基因引物在PCR仪96微孔板上进行扩增。引物序列如下：U6上游引物5’-CGCGCAACGGAATCCCA-3’，下游引物5’-GTGCAGG

GTCCGAGGT-3’； FOXF2上游引物5’-TCGAAGCTGA

CCTGAAGTG-3’，下游引物5’-TCAAGCTGCTGAGCTG

AG-3’；Caspase-3上游引物5’-CTAGCTAAGCTGAGCG

TGA-3’，下游引物5’-TCGAAGCTGACGTGAGTCGA-3’；Bax上游引物5’-TCGAAGCTAGCTGAGCTGA-3’， 下游引物5’-AGCTGAGCTTAGCGTAG-3’； Bcl-2上游引物5’-ACTGAGCGGATGCGGTAG-3’， 下游引物5’-TCGAATCGAGCTGGAATCG-3’。反应条件：95℃预变性5min→94℃变性30 s→58℃退火30 s，共38个循环。

1.4 预后随访 术后第2天开始对所有入组的宫颈癌患者进行长期随访，具体随访方式包括门诊复诊及电话，随访内容包括B超、肿瘤标志物、宫颈检查等，以2021年1月或者该日期前患者确诊复发转移的时间作为随访终点，记录患者的无病生存率(DFS)。

1.5 临床资料收集 收集所有入组宫颈癌患者的临床资料，包括年龄、月经状态、肿瘤直径、组织学分类、FIGO分期、分化程度、肌层浸润、脉管侵犯、淋巴结转移。

2 结果

2.1 2组组织中FOXF2及凋亡基因表达量比较 宫颈癌组病灶组织中FOXF2、Caspase-3、Bax mRNA的表达量低于对照组正常组织，Bcl-2 mRNA的表达量高于对照组正常组织，差异均有统计学意义(P<0.05)。见表1。

表1 宫颈癌组、对照组组织中FOXF2及凋亡基因表达量比较

2.2 宫颈癌病灶组织中FOXF2及凋亡基因表达量的相关性分析 Pearson检验显示，宫颈癌病灶组织中FOXF2 mRNA表达量与Caspase-3、Bax mRNA的表达量呈正相关(P<0.05)，与Bcl-2 mRNA的表达量呈负相关(P<0.05)。见表2。

表2 FOXF2 mRNA与Caspase-3、Bax及Bcl-2 mRNA表达量的相关性

2.3 宫颈癌患者无病生存率与FOXF2表达的关系 118例宫颈癌患者随访期出现复发转移36例并归于复发转移组，其余82例归于未复发转移组。复发转移组病灶组织中FOXF2 mRNA的表达量为(1.65±0.21)、未复发转移组病灶组织中FOXF2 mRNA的表达量为(1.83±0.24)。复发转移组病灶组织中FOXF2 mRNA的表达量低于未复发转移组，差异有统计学意义(P<0.05)。根据所有宫颈癌患者病灶组织中FOXF2 mRNA表达量的中位数1.69，将其分为高FOXF2组、低FOXF2组各59例。高FOXF2组的中位无病生存时间为38个月、低FOXF2组的中位无病生存时间为32个月。Kplan-Meier生存曲线显示，高FOXF2组患者的无病生存情况优于低FOXF2组患者(P<0.05)。见图1。

图1 FOXF2表达水平与宫颈癌患者无病生存时间的关系

2.4 宫颈癌患者术后复发转移的单因素分析 复发转移组、未复发转移组患者的年龄、月经情况、肿瘤直径、组织学分类的分布差异无统计学意义(P>0.05)；FIGO分期、分化程度、肌层浸润、脉管侵犯、淋巴结转移、FOXF2表达量的分布差异有统计学意义(P>0.05)。见表3。

表3 宫颈癌患者术后复发转移的单因素分析 例

2.5 宫颈癌患者术后复发转移的COX回归分析 以宫颈癌患者术后复发转移情况作为终点事件(0=未复发转移，1=复发转移)，将单因素分析中具有差异的指标包括FIGO分期、分化程度、肌层浸润、脉管侵犯、淋巴结转移、FOXF2表达量纳入COX回归模型进行危险因素分析，结果显示：FIGO分期Ⅲ期、低分化、肌层浸润、脉管侵犯、淋巴结转移、组织中FOXF2表达量低表达是宫颈癌患者术后复发转移的独立危险因素(P<0.05)。见表4。

表4 宫颈癌患者术后复发转移的COX回归分析

3 讨论

宫颈癌侵袭性较强，研究显示存在盆腔转移的宫颈癌患者术后复发率高达70%[6,7]。FOXF2属于间质特异性转录因子，在泌尿道、消化道、呼吸道等器官高表达并参与细胞外基质合成等多个生命过程，其在多个恶性肿瘤组织中均存在异常表达，如鲁昌坤等[8]的研究发现FOXF2转录因子通过抑制p21Cip1 CDK调控早期胃癌能量代谢；王云检等[9]指出miRNA-182可通过靶向调控FOXF2促进肝细胞癌细胞的侵袭转移。基础研究初步明确FOXF2参与宫颈癌的发生发展[5]，文中检测宫颈癌组织及良性宫颈组织中FOXF2及凋亡基因的表达情况，发现宫颈癌组织中FOXF2表达下调、与既往研究结论吻合；促凋亡基因Caspase-3、Bax表达下调而抗凋亡基因Bcl-2表达上调，这与恶性肿瘤细胞程序性凋亡进程受阻的特点吻合。相关性分析更指出，宫颈癌组织中FOXF2表达量与促凋亡基因表达量呈正相关，与抗凋亡基因表达量呈负相关，提示FOXF2基因表达下调可能通过减轻对凋亡基因的表达调控最终促进肿瘤进展。

宫颈癌患者术后复发转移情况与其最终死亡结局密切相关，在分析术中宫颈癌组织FOXF2表达与患者无病生存情况的关系中发现，FOXF2低表达宫颈癌患者的无病生存时间相对较短，提示FOXF2表达情况与宫颈癌患者的术后复发转移间存在一定关系。宫颈癌患者的术后复发转移是一个复杂的多因素参与的过程，既往关于其复发危险因素的分析已经开展较多，文中再次将包括宫颈癌组织FOXF2表达量在内的临床资料纳入COX回归模型，分析发现：组织中FOXF2表达量低表达、FIGO分期Ⅲ期、低分化、肌层浸润、脉管侵犯、淋巴结转移是宫颈癌患者术后复发转移的独立危险因素。FOXF2表达量对宫颈癌复发转移的影响与王庆伟等[10]的研究结果相似，其认为FOXF1在乳腺癌组织中低表达可能与患者预后有关。关于组织中FOXF2表达量低表达诱导宫颈癌患者术后复发转移的具体机制不明，Liu等[11]的研究指出FOXF2通过Wnt/β-catenin信号通路抑制TGF-β1诱导的人原代子宫内膜基质细胞纤维化。组织中低表达的FOXF2可能也通过上述相似途径影响术后微小残留癌细胞的复发转移并最终左右生存结局。He等[12]的研究显示多种因素可调节FOXF2水平，调节FOXF2水平是治疗肿瘤的理想化方法，关于FOXF2调控在后续宫颈癌治疗及预后改善中的作用研究有待后续研究明确。FIGO分期、低分化、肌层浸润、脉管侵犯、淋巴结转移等临床病理特征对宫颈癌患者术后复发转移的影响已在既往较多研究[13]中被明确，本文结果与其一致。

综上所述，宫颈癌患者术中病灶组织中FOXF2低表达，可能通过影响凋亡基因表达而促进患者术后复发转移。FOXF2基因在后续宫颈癌预后优化中的实践价值有待更多研究明确。