G6PD 活性检测在地中海贫血诊断中的临床价值

罗秀霞，沈诚

（1.东莞市人民医院 检验科，广东 东莞 523000；2.东莞市横沥镇人民医院 检验科，广东 东莞 523000）

0 引言

地中海贫血（简称地贫）主要是由于体内珠蛋白合成异常而引起的遗传性溶血性疾病。在临床上由于轻型地贫、静止型地贫的临床表现隐匿，致使本病漏诊率高。因此，为了提高出生人口质量，减少地贫特别是重型地贫儿出生，寻找操作简单、有效的初筛客观指标至关重要。以往临床常应用红细胞参数，如平均红细胞血红蛋白量、平均红细胞体积等对地贫进行初筛，但临床实践发现该指标的诊断效果并未能达到预期理想[1]。葡萄糖-6-磷酸脱氢酶（G6PD）为红细胞进行糖代谢磷酸己糖旁路中的一个关键脱氢酶，其能够在糖代谢中产生NADPH以对红细胞巯基氧化发生保护作用[2]。而当有地贫发生时，机体内珠蛋白生成受到阻碍，未能被匹配到的珠蛋白有剩余可在红细胞内形成不稳定的聚集物，积聚到红细胞膜表面，造成氧化损伤，G6PD含量代偿性升高[3]。另外，G6PD的活性存有一定的胞龄性，在年轻红细胞中的活性相对较高，但是地贫为溶血性贫血的一种，其红细胞寿命短，故年轻红细胞中含有G6PD的活性较高[4]。由此可见，地贫患者中含有的G6PD活性较高。然而，关于G6PD活性检测在地贫诊断及严重程度判断中的应用报道较为少见。为此，本研究开展对照试验，以进一步明确G6PD活性检测在地中海贫血诊断中的临床价值，具体论述如下。

1 资料和方法

1.1 一般资料

选择2019年10月-2020年12月在东莞市横沥镇人民医院行G6PD活性检测的200例受检者，根据其健康状况或疾病类型分为健康体检组（n=20）、地贫组（n=138）、缺铁贫血组（n=42）。健康体检组中有男8例，女12例；年龄18～64岁，平均（45.20±8.24）岁。地贫组中有男46例，女92例；年龄20～60岁，平均（45.96±7.88）岁；病程1～5年，平均（2.89±0.51）年。缺铁贫血组有9例男，33例女；年龄18～65岁，平均（46.01±7.25）岁；病程1～6年，平均（2.82±0.60）年。三组性别、年龄等一般资料比较差异无统计学意义（P>0.05），地贫组与缺铁贫血组的病程比较差异无统计学意义（P>0.05），有可比性。本研究获得医学伦理委员会审批同意。

纳入标准：①地贫组患者均经血常规、地贫基因检测确诊为地贫；②缺铁贫血组患者均经血常规、血清铁蛋白检测确诊为缺铁性贫血；③健康体检组的研究对象血常规、血清铁蛋白检测均无异常；④各组研究对象均未服用影响本研究结果的药物或患有疾病；⑤自愿接受检测，签订了同意书。排除标准：①患有严重心肺肝肾脏器疾病、急性感染性疾病等需立即进行治疗的疾病；②患有G6PD缺乏症。

1.2 G6PD活性检测

（1）样本采集：地贫组、缺铁贫血组患者在进行G6PD活性检测前1天22:00后停止服用药物。抽取三组研究对象的肘静脉血3～5mL存于含有EDTA-K2抗凝试剂的专用管中，充分混匀待检。

（2）检测步骤：将全血样本以3000r/min离心处理5min，抽吸20μL压积红细胞到含有1μL的裂解液中，待红细胞得到溶解后开始检测（要求在0.5h内检测完毕）。应用贝克曼ANL AU5800全自动生化分析仪和G6PDH活性检测试剂盒（天津中成佳益生物科技有限公司），以速率法检测。严格按照试剂盒说明书进行操作，而且每日对检验室进行2次室内质控，确保质量在控。检测结果评定[5]：正常范围1300～3600U/L。若G6PD活性>3600U/L，说明G6PD活性升高，可判为阳性。

1.3 观察指标

①比较地贫组、缺铁贫血组、健康体检组的G6PD活性检测结果；②根据地贫组患者病情严重程度分为静止型地贫（n=30）、轻型地贫（n=103）、中间型地贫（n=5），比较不同病情严重程度的G6PD活性检测结果；③分析G6PD活性测定诊断地贫的临床效能，包括灵敏度和特异性。

1.4 统计学方法

2 结果

2.1 各组G6PD活性检测结果的比较

地贫组的G6PD活性显著高于缺铁贫血组、健康体检组（P<0.05），但健康体检组与缺铁贫血组比较差异无统计学意义（t=1.890，P=0.064>0.05），见表1。

表1 三组G6PD活性检测结果的比较(±s，U/L）

表1 三组G6PD活性检测结果的比较(±s，U/L）

注：与健康体检组比较，①P<0.05；与缺铁贫血组比较，②P<0.05。

2.2 地贫组中不同病情严重程度G6PD活性检测结果的比较

在地贫组中，随着地贫严重程度加重，G6PD活性显著升高，差异有统计学意义（P<0.05），见表2。

表2 地贫组中不同病情严重程度G6PD活性检测结果的比较(±s，U/L）

表2 地贫组中不同病情严重程度G6PD活性检测结果的比较(±s，U/L）

注：与静止型地贫比较，①P<0.05；与轻型地贫比较，②P<0.05。

2.3 ROC曲线分析

将地贫病例设为阳性病例，健康体检人群、缺铁性贫血病例设为阴性病例。经ROC曲线分析显示，当G6PD活性的诊断阈值≥2939.0U/L时，诊断地贫的灵敏度72.50%，特异性71.00%，见表3、图1。

表3 ROC曲线分析结果

图1 G6PD活性对地贫的ROC曲线

3 讨论

地贫在临床中较为常见，主要是由于机体存有的珠蛋白出现基因缺失或发生基因突变，致使珠蛋白肽链生成受阻，造成血红蛋白中的1种或以上珠蛋白分泌不足而引起溶血性疾病。地贫在全球范围内均流行，其中在国内好发于广东、四川、广西等地，严重影响着人口质量[6]。因此，加强地贫早期筛查，对于早期控制患者病情具有积极的作用。

在临床上，地贫的常规筛查方法有血常规检测、血红蛋白电泳检测等，其中血常规检测缺乏特异性和灵敏度，极易漏诊或误诊[7]。而血红蛋白电泳检测也具有一定的局限性，部分α地贫复合β地贫患者的血红蛋白电泳检测结果表现为正常，故应用血红蛋白不能准确诊断出地贫，极易导致漏诊[8]。

G6PD是一种广泛存在于人体的管家基因，其在红细胞系中的表达水平高，特别是在新生红细胞系中的表达显著升高。因此有研究证实[9]，G6PD表达与新生红细胞数量呈正相关，可见G6PD活性与红细胞的胞龄有依赖性，红细胞胞龄愈小，G6PD活性愈高。地贫属于慢性溶血性疾病，当患有地贫时，体内的溶血信号可刺激机体，代偿性增加红细胞的数量，促使G6PD活性升高。本研究结果也显示，地贫组的G6PD活性显著高于缺铁贫血组、健康体检组（P<0.05），但健康体检组与缺铁贫血组比较差异无统计学意义（P>0.05），进一步证实了地贫患者普遍存在G6PD活性升高。研究分析其原因可能是[10-11]：①G6PD是红细胞胞龄依赖性酶，上文已对此作解释；②G6PD是协助葡萄糖进行新陈代谢的脱氢酶，该酶分泌不足可引起还原型辅酶Ⅱ合成障碍，极易使得血红蛋白氧化，而诱发溶血；③地贫的发生机制是体内珠蛋白合成障碍，未能合成的珠蛋白就会积聚到红细胞膜，引起过氧化受损，机体为了拮抗氧化受损，会不断修复受到损害的红细胞膜蛋白，这就会使得G6PD代偿性升高；④地贫患者的红细胞体积偏小，使得单位体积内的红细胞数量、红细胞膜表面积增多，G6PD分布在红细胞膜，这有可能会引起G6PD活性增加。

在地贫病情严重程度方面，本研究发现，随着地贫严重程度加重，G6PD活性显著升高，组间差异有统计学意义（P<0.05），说明G6PD活性水平与地贫病情严重程度呈正相关，地贫病情越严重，机体代偿性产生的年轻红细胞就越多，其G6PD活性就会显著增加[12]。进一步绘制ROC曲线发现，当G6PD活性的诊断阈值≥2939.0U/L时，诊断地贫的灵敏度72.50%，特异性71.00%，提示G6PD活性诊断地贫有良好的灵敏度和特异性，但其灵敏度、特异性并不是极高，研究认为G6PD活性只可以作为地贫的初筛方法，对提高疾病诊断准确率有一定的辅助作用。

综上所述，地贫患者G6PD活性显著升高，且贫血程度越严重G6PD活性越高，其对于地贫诊断具有良好的灵敏度和特异性，有一定的辅助诊断价值，可以推广应用。