不同消毒方式对义齿模具微生物数量的影响

2022-06-23冯群李婧王蕊李军

医疗装备 2022年11期

冯群，李婧，王蕊，李军

1 北检润和（北京）技术服务有限公司（北京 101111）；2 弘润同创（北京）资产管理有限公司（北京 100010）；3 北京弘海微创科技有限公司（北京 102308）

随着人们生活水平逐步提高，物质选择越发丰富，口腔疾病发病率也随之升高。口腔是众多微生物的栖息地，口腔中的微生物种类繁多。目前，口腔中已发现600多种不同的细菌、真菌、病毒、支原体和衣原体等微生物物种，这些微生物统称为口腔微生物组[1]。微生物是影响人体健康平衡的重要组成部分，细菌、真菌、控制菌是微生物的主要组成种类。（1）细菌：溶血性链球菌，可引起皮肤和皮下组织的化脓性炎症、呼吸道感染，还可通过食品引起猩红热、流行性咽炎的暴发流行。（2）真菌：包含霉菌、酵母菌等，主要会对人体的皮肤系统和内脏系统造成伤害。（3）控制菌：大肠杆菌感染会引起腹泻、腹痛、恶心呕吐、发热等；绿脓杆菌感染会引发坏疽深脓疱病、绿甲综合征、毛囊炎等；金黄色葡萄球菌可引起局部化脓感染，也可引起肺炎、伪膜性肠炎、心包炎等，甚至引发败血症、脓毒症等全身感染[2]。

口腔内存在的微生物多种多样，其对牙齿健康有较大影响，因此牙齿疾病的出现在所难免。牙齿最大的作用是咀嚼食物，当出现疾病时，牙齿无法正常行使咀嚼功能，因此要对牙齿及时修复。牙齿缺损是牙病的一种，治疗需要根据其严重程度，选择不同的治疗方案。其中，安装义齿是治疗牙齿缺损的一种方案，义齿即人们常说的“假牙”。

制作义齿需要模具，义齿模具是通过印模和灌模两个工艺流程制作的。（1）印模：口腔科一般使用硅胶材料进行取模，从而获取患者缺牙区、基牙、基托区的印模[3]，操作步骤是将软化的硅胶材料填入托盘，放入患者口中，让患者进行咬合，等待数分钟后，待硅胶材料硬化后即可得到患者个性化的印模（图1）。（2）灌模：在取到的印模内灌注石膏，石膏凝固后，即可得到患者的牙齿模型（图2），然后根据石膏模型再进行后续的工艺，制作用于替代坏牙的义齿。

图1 印模

图2 灌模后的模型

由此可见，义齿模具是由印模后硅胶模具和灌模后石膏模具两部分组成，且义齿模具的两个部分都会直接或者间接接触患者的口腔，义齿模具上微生物的数量也会直接或间接对患者产生影响，因此控制义齿模具上微生物的数量非常必要。基于此，本研究通过测试微生物的生长情况，验证70 ℃时对义齿模具进行有效消毒的时间，使义齿模具达到消毒级别。

1 试验设计

1.1 样品来源

本次试验样品由北京某口腔医疗科技有限公司提供。

1.2 试验仪器

试验用仪器包括立式压力蒸汽灭菌器（山东博科消毒设备有限公司，型号BKQ-B50 Ⅱ）、洁净工作台（北京东联哈尔仪器制造有限公司，型号DL-CJ-2ND I）、微生物恒温培养箱（山东博科消毒设备有限公司，型号BJPX-250）、霉菌培养箱[山东博科消毒设备有限公司，型号BJPXM250（PC）]、电子天平（METTLER-TOLEDO，型号XSR205DU）。

1.3 消毒方式

义齿模具于开放性的普通环境下制作而成，会附着大量的微生物。为了控制义齿模具中微生物的数量，降低微生物对人体健康的影响，需要选择一种适合的消毒方式对义齿模具进行消毒处理。本研究依次采用化学消毒剂、物理灭菌方法及低温消毒+化学消毒剂3种方式对义齿模具进行消毒。

1.3.1 化学消毒剂

采用75%医用酒精对样品表面进行擦拭消毒，但是75%医用酒精只能对样品表面进行消毒，无法达到穿透效果，样品内部无法消毒，该消毒方式无法达到对义齿模具进行整体消毒的目的。

1.3.2 物理灭菌方法

采用压力蒸汽灭菌器灭菌，设置灭菌器温度为121 ℃，时间为30 min，灭菌结束后，发现在高温状态下，硅胶模具的材质出现软化现象，导致硅胶模具损坏，因此，此方法不适合该样品。

1.3.3 低温消毒+化学消毒剂

由于硅胶材料不能耐受高温，为了达到义齿模具整体消毒的目的，确保消毒效果，最终确定选用低温消毒与化学消毒剂相结合的方式，低温消毒设备为消毒柜，将消毒柜温度固定在70 ℃，通过改变消毒时间，验证不同消毒方式对义齿模具微生物消毒效果的差异。具体消毒方法为：义齿模具制作完成后，先用75%医用酒精对样品外表面进行擦拭消毒，擦拭时间为30 s，然后将擦拭后的样品放置于消毒柜内，启动消毒柜，将消毒柜温度设置为70 ℃，将消毒时间依次设置为20、40、120 min 进行试验。

1.4 检测标准

目前，业界缺少关于义齿模具微生物控制相关的现行有效的检测标准，基于义齿模具的意义及用途，且其符合一次性使用卫生用品的定义[使用一次后即丢弃的、与人体直接或间接接触的、并为达到人体生理卫生或卫生保健（抗菌或抑菌）目的而使用的各种日常生活用品，产品性状可以是固体也可以是液体]，因此本研究参考GB 15979-2002《一次性使用卫生用品卫生标准》[4]对于微生物的要求进行检测，产品种类选择消毒级，微生物指标按该产品种类进行控制。一次性使用卫生用品微生物指标（消毒级）见表1。

表1 一次性使用卫生用品微生物指标（消毒级）

1.5 样品的选择

依据GB 15979-2002附录B《产品的微生物检测方法》规定，每次应至少抽取3个最小销售包装用于检测使用，因印模的硅胶模具和灌模的石膏模具为一套样品，所以每次试验选取3套模具作为试验样品。

1.6 样品的处理

将样品在规定的消毒灭菌方式下处理后，在100级净化条件下，用无菌方法打开消毒灭菌后的样品，从3套样品中随机取样，称取共计（10±1）g 样品，剪碎后加入200 ml 灭菌0.9%氯化钠注射液中，充分混匀，得到一个0.9%氯化钠注射液样液，用于其他项目的检测。

1.7 微生物试验过程

1.7.1 细菌菌落总数检测

取已灭菌的一次性平皿5个，将处理过的0.9%氯化钠注射液样液分别接种到平皿内，每个平皿接种1 ml 0.9%氯化钠注射液样液，分别在5个平皿内倾注营养琼脂培养基15～20 ml，混合均匀，待培养基凝固后翻转平皿置于35 ℃生化培养箱中培养48 h，按照以下公式计算平板上的菌落数：

其中，X1为细菌菌落总数（单位cfu/g），A为5块营养琼脂培养基平板上的细菌菌落总数，K为稀释度。

1.7.2 大肠菌群检测

取0.9%氯化钠注射液样液5 ml 接种到50 ml 乳糖胆盐发酵管内，置于35 ℃生化培养箱中培养24 h，如不产酸也不产气，则为大肠菌群阴性；如产酸产气，需对乳糖胆盐发酵管内样液进行分离提纯，取疑似菌落进行革兰染色，同时将疑似的菌落接种到新的乳糖胆盐发酵管内，观察并确定结果。

1.7.3 绿脓杆菌检测

取0.9%氯化钠注射液样液5 ml 接种到50 ml SCDLP（增菌培养基）培养液中，充分混匀，置于35 ℃生化培养箱中培养24 h，若培养液中有黄绿色或蓝绿色菌膜生长，需对菌液进行分离提纯，取可疑菌落进行革兰染色，若镜检为革兰阴性菌，需进一步对可疑菌落进行鉴定，鉴定试验包括氧化酶试验、绿脓菌素试验、硝酸盐还原产气试验、明胶液化试验、42 ℃生长试验。

1.7.4 金黄色葡萄球菌检测

取0.9%氯化钠注射液样液5 ml 接种到50 ml SCDLP（增菌培养基）培养液中，充分混匀，置于35 ℃生化培养箱中培养24 h，对菌液进行分离提纯，挑取可疑菌落进行革兰染色，若镜检为革兰阳性球菌，需进一步对可疑菌落进行鉴定，鉴定试验包括甘露醇发酵试验、血浆凝固酶试验。

1.7.5 溶血性链球菌检测

取0.9%氯化钠注射液样液5 ml 加入50 ml 葡萄糖肉汤中，置于35 ℃生化培养箱中培养24 h，对菌液进行分离提纯，挑取可疑菌落进行革兰染色，如镜检为革兰阳性菌，需进一步对可疑菌落进行鉴定，鉴定试验包括链激酶试验、杆菌肽敏感试验。

1.7.6 真菌菌落总数检测

取已灭菌的一次性平皿5个，将0.9%氯化钠注射液样液分别接种到平皿内，每个平皿接种1 ml 0.9%氯化钠注射液样液，分别在5个平皿内倾注沙氏琼脂培养基15～20 ml，混合均匀，待培养基凝固后翻转平皿置于25 ℃霉菌培养箱中培养7 d，分别于第3、5、7天观察并根据以下公式计算平板上的菌落数，如果发现菌落蔓延，以前一次的菌落计数为准：