MTHFR C677T位点基因多态性与子痫前期易感性、严重程度及母婴结局关系

王可欣

四川省绵阳市中心医院(621000)

子痫前期是一种妊娠并发症，临床表现为新发高血压和蛋白尿，可能出现其他严重并发症甚至危及母婴生命[1]。有研究[2]发现，高同型半胱氨酸血症与子痫前期存在密切联系，而通过补充叶酸能够影响机体同型半胱氨酸代谢。5,10-亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)作为叶酸代谢通路中的关键酶基因，其突变可影响机体同型半胱氨酸以及叶酸水平，继而引起高同型半胱氨酸血症，最终影响子痫前期发病[3]。本研究分析MTHFR C677T位点基因多态性与子痫前期易感性、严重程度及母婴结局的关系，以期为子痫前期发病风险预测及指导优生提供参考依据。

1 资料与方法

1.1 研究对象

回顾性收集2018年12月-2020年3月于本院检查并住院分娩的子痫前期孕妇临床资料为子痫前期组，均符合子痫前期诊断标准[4]，且收缩压≥140mmHg或舒张压≥90mmHg，且尿蛋白≥0.3g/24h为子痫前期。若同时有明显血常规及生化指标异常，有明显子痫前期症状，为重度子痫前期，反之为轻度子痫前期。纳入标准：①明确诊断为子痫前期；②无妊娠前高血压病史。排除标准：①合并妊娠前冠心病、糖尿病、肝肾疾病等常见病史；②排除严重心脑血管疾病；③多胎妊娠。同期产前检查并住院分娩的健康孕妇为对照组。纳入标准：①妊娠期间血压正常，无蛋白尿；②无产科并发症；③分娩健康足月新生儿。本研究经本院伦理委员会审批，孕妇签署知情同意书。

1.2 检测方法

取孕妇空腹静脉血，采用 DNA 提取纯化试剂盒 (QuantStudio，湖南圣湘生物科技股份有限公司) 抽提基因组DNA。实时荧光定量 PCR技术对MTHFR 基 因 C677T位点进行基因分型，通过Taqman探针法测定单核苷酸多态性(SNP)位点等位基因型，Taqman探针由美国Invitrogen公司合成，探针所在位置探针序列：GAAAAGCTGGGTGATGATGAAATCG[G/A]GTGGGGGAGACAGCTTGTCCTTCAA，引物序列为：F：5‘-GGAAGGTGCAAGATCAGAGC-3’，R：5‘-CTGGGAAGAACTCAGCGAAC-3’，PCR总反应体系10μl，包括DNA模板1μl，2×Taqman Universal MasterMix 5μl，20×Taqman探针0.5μl，ddH2O 3.5μl，PCR反应程序为，95℃预变性10min，95℃变性15s，60℃延伸1min，20个循环；95℃变性15s，60℃延伸90s，30个循环。反应完成后，使用ABI 7900型荧光定量 PCR仪(西安金磁纳米生物技术有限公司)读取荧光值，并利用软件分析基因分型结果。

1.3 统计学分析

2 结果

2.1 一般情况

子痫前期组104例，年龄(28.9±3.4)岁(19～45)岁，孕周(37.7±2.0)周(32～40)周，初产妇76例、经产妇28例；轻度83例(轻度组)，重度21例(重度组)。对照组88例，年龄(29.0±3.5)岁(20～46)岁，孕周(38.3±2.2)周(36～42)周，初产妇64例、经产妇24例。两组年龄、孕周、产次比较无差异(P>0.05)。

2.2 MTHFR C677T位点不同基因型实时荧光定量 PCR结果

MTHFR C677T位点荧光定量 PCR曲线图见图1。

A：CC基因型 B：TT基因型 C：CT基因型

2.3 Hardy-Weinberg遗传平衡检验

子痫前期组和对照组MTHFR C677T位点基因型分布符合Hardy-Weinberg遗传平衡定律(χ2=0.263，P=0.877>0.05)，证明所选样本人群具有良好的群体代表性。

2.4 两组MTHFR C677T基因型及等位基因分布

子痫前期组MTHFR C677T位点TT基因型频率和T等位基因频率高于对照组(P<0.05)，CC基因型频率和C等位基因频率低于对照组(P<0.05)，CT基因型频率与对照组比较无差异(P>0.05)。见表1。

表1 两组MTHFR C677T基因型及等位基因分布[例(%)]

2.5 MTHFR C677T位点基因多态性与子痫前期易感性关系

MTHFR C677T位点基因多态性与子痫前期易感性有关(P<0.05)，TT基因型孕妇子痫前期易感性比CT+CC基因型孕妇增加3.51倍(OR=3.506，95% CI：1.501～8.194)。见表2。

表2 MTHFR C677T位点基因多态性与子痫前期易感性关系

2.6 不同严重程度子痫前期孕妇MTHFR C677T基因型及等位基因分布

子痫前期孕妇中，轻度组和重度组MTHFR C677T位点基因型频率和基因频率比较无差异(P>0.05)。见表3。

表3 不同程度子痫前期孕妇MTHFR C677T基因型及等位基因分布[例(%)]

2.7 MTHFR C677T位点基因多态性与子痫前期严重程度关系

MTHFR C677T位点基因多态性与子痫前期严重程度无关(P>0.05)，见表4。

2.8 MTHFR C677T位点基因多态性与子痫前期孕妇母婴结局关系

MTHFR C677T位点不同基因型孕妇，其剖宫产、早产、产后出血、胎盘早剥发生率以及新生儿体质量、新生儿Apgar评分和新生儿窒息、宫内窘迫发生率比较无差异(P>0.05)。见表5。

表4 MTHFR C677T位点基因多态性与子痫前期严重程度关系[例(%)]

表5 MTHFR C677T位点基因多态性与子痫前期孕妇母婴结局的关系[例(%)]

3 讨论

子痫前期以妊娠20周后新发高血压和尿蛋白为主要特征，发生率为2%～9.4%[5]。发病机制尚不明确，内皮细胞激活和损伤学说是一直以来的研究热点，具体体现为血浆同型半胱氨酸水平上升，进而对血管内皮细胞造成直接或者间接损伤[6]。潘婕等[7]报道，子痫前期孕妇血清同型半胱氨酸水平明显高于正常孕妇，且重度子痫前期孕妇高于轻度子痫前期孕妇。MTHFR基因位于染色体1p36.3上，可催化5,10-甲基四氢叶酸还原为5-甲基四氢叶酸，进而参与同型半胱氨酸的再甲基化过程。如MTHFR基因发生突变，其胞嘧啶碱基(C)突变为胸腺嘧啶(T)，基因编码的氨基酸缬氨酸就会替代丙氨酸，从而降低MTHFR基因的稳定性和活性，使高半胱氨酸转化为蛋氨酸过程催化作用下降，影响同型半胱氨酸正常代谢，体内同型半胱氨酸水平升高[8-9]。MTHFR是影响同型半胱氨酸代谢的关键酶，其C677T位点中等位基因C突变为T是引起高同型半胱氨酸血症的主要原因之一[10]。高同型半胱氨酸一方面能够促进氧自由基生成和低密度脂蛋白氧化，激活血小板黏附和聚集，从而损伤血管内皮细胞，最终导致血管内皮损伤和功能异常；另一方面还能够刺激血管平滑肌细胞增生，促使机体凝血和纤溶系统失衡，导致机体处于血栓前状态，最终诱发子痫前期[11]。有研究[12]显示，MTHFR C677T位点基因型TT和CT+TT为妊娠期高血压疾病的危险基因型，该位点基因多态性会增加孕妇患妊娠期高血压疾病的风险。Azimi-Nezhad等[13]也指明，MTHFR C677T( C > T)基因多态性与伊朗妇女子痫前期的发生有关。

本研究发现，子痫前期组MTHFR C677T位点TT基因型频率和T等位基因频率均高于对照组，CC基因型频率和C等位基因频率低于对照组。表明子痫前期孕妇MTHFR C677T位点存在C突变为T，孕妇携带MTHFR C677T位点的TT基因型和T等位基因更容易发生子痫前期，MTHFR C677T位点基因多态性分布可能是子痫前期易感性的危险因素。与国内外报道[14-15]吻合。本研究通过分析MTHFR C677T位点基因多态性与子痫前期易感性的关系发现，相比于CT+CC基因型孕妇，TT基因型孕妇子痫前期易感性增加3.51倍，表明MTHFR C677T位点TT基因型携带者是子痫前期易感的高风险人群。此外，本研究中，不同严重程度子痫前期孕妇MTHFR C677T位点基因型频率和基因频率比较无差异，MTHFR C677T位点不同基因型对应的孕妇剖宫产、早产、产后出血、胎盘早剥发生率以及新生儿体质量、新生儿Apgar评分和新生儿窒息、宫内窘迫发生率比较无差异。表明MTHFR C677T位点基因多态性与子痫前期严重程度及母婴结局无关。而金海红等[16]认为MTHFR基因多态性与妊娠高血压患者不良母婴结局有关，本研究结果与其不同。可能因本研究样本量有限，未能发现MTHFR C677T位点基因多态性与子痫前期严重程度及母婴结局的内在关联，有待后续深入研究。但本研究仍可为今后开展遗传筛查和指导优生优育等工作提供论据支持，提示临床上孕妇遗传筛查需增加MTHFR基因突变检测，筛查出MTHFR基因突变孕妇，需严格按照医嘱服用叶酸及施以相应防治措施，减少畸形胎儿出生。

综上所述，MTHFR C677T位点基因多态性与子痫前期易感性有关，但与子痫前期严重程度及母婴结局无关。临床需要对MTHFR C677T位点TT基因型患者加强管理，以改善妊娠预后。