云南滇黄精药渣中多糖含量的测定

2022-06-19李冬丽

昆明冶金高等专科学校学报 2022年1期

姚波，黄力, 李冬丽

(昆明冶金高等专科学校环境与化工学院，云南昆明 650033)

0 引言

滇黄精(polygonatum kingianum Coll.et Hemsl)为百合科黄精属的多年生草本植物的干燥根茎，具有补气养阴、健脾、润肺、益肾等功能[1]，是一种“药食同源”的珍品，誉有“血气双补之土”之称。产于云南的滇黄精，质量较佳[2]，是云南重要的道地药材。现代药理研究表明其活性成分最主要为黄精多糖，具有抗肿瘤、调节血糖血脂、抗衰老、免疫调节以及抗氧化损伤等作用[3-7]。现在生产中较多采用溶剂水[8]提取黄精多糖，但滇黄精提取多糖后的药渣中仍含有多糖等活性物质，而这些药渣通常作为废弃物遗弃，造成极大的资源浪费。鉴于此，本文首次采用苯酚-硫酸法对云南滇黄精药渣中多糖的含量进行测定评价，以期在解决环境污染问题、实现二次资源利用的同时，为进一步高效利用滇黄精资源提供理论依据。

1 实验器材

1.1 材料

滇黄精药材于2020年购于云南宗顺生物科技有限公司，切片并经 60 ℃ 恒温干燥至恒重。

1.2 试剂

葡萄糖标准品(天津市凤船化学试剂科技有限公司 AR批号：20200408)；95%乙醇(重庆川东化工有限公司AR 批号：20191201)；苯酚(麦克林 AR 批号：20200312)；浓硫酸(西陇科学有限公司 AR 批号：20200116)；实验用水为昆明冶金高等专科学校实验室自制。

1.3 仪器

可见分光光度计(上海元析仪器有限公司 UV—5900)；电子天平(JJ124BC型常州市双杰测试仪器厂)；回流装置；数显恒温水浴锅(上海梅香仪器有限公司 HH—4)；数显鼓风干燥箱(鹤壁华诺电子科技有限公司101—1A)。

2 方法与结果

2.1 滇黄精药渣的获得

将滇黄精药材粉碎，使其过φ0.45 mm 筛；称取过筛后的粉末 5 g，加80%的乙醇 100 mL，置水浴中回流提取 1 h，趁热过滤，残渣用80%的乙醇洗涤3次，过滤；残渣中加水 100 mL 水浴回流 1 h，热过滤，残渣用热水洗涤4次；最后集中所得残渣经 60 ℃ 烘干，得滇黄精药渣，装袋密封备用。

2.2 滇黄精药渣多糖的提取

取上述干燥的滇黄精药渣细粉 0.25 g，精密称定，置圆底烧瓶中，加80%的乙醇 50 mL，置水浴中回流 1 h，趁热过滤，残渣用80%热乙醇洗涤3次，每次洗涤乙醇用量 10 mL,将残渣及滤纸置圆底烧瓶中，加水 50 mL，置水浴中加热回流1 h,趁热过滤，残渣及烧瓶用热水洗涤4次，每次洗涤热水用量 10 mL，合并滤液与洗液，放冷，转移至 250 mL 量瓶中，加水至刻度线，摇匀。再从中取 20 mL，加水定容到 100 mL 容量瓶中，即得。

2.3 标准曲线的绘制

2.3.1 对照品溶液的配置

取经 105 ℃ 干燥至恒重的无水葡萄糖对照品精密称定 0.1 g，于 100 mL 烧杯中加水溶解，定容至 1 000 mL ，置4 ℃冰箱中贮存。

2.3.2 5%苯酚试液的配制

精密称取 80 g 苯酚于 100 mL 烧杯中，加水 20 mL 溶解，转移至 100 mL 棕色容量瓶中定容，置 4 ℃ 冰箱中避光保存。吸取 5 mL 上述80%的苯酚溶液溶于 75 mL 水中，混匀，现配现用。

2.3.3 测定波长的选择

分别精密吸取对照品溶液和多糖样品溶液各 1.00 mL 于具塞刻度试管中，分别精密加入配制的5%苯酚溶液 1.00 mL,快速加入 5.0 mL 浓硫酸溶液，放冷后置于水浴中保温 10 min ，取出，立即置冰水浴中冷却 10 min，放至室温。用可见分光光度计在400～700 nm 波长范围进行测定,结果样品与对照品溶液在 490 nm 处均有相同最大吸收峰,故确定 490 nm 为测定波长。

2.3.4 标准曲线的绘制

精密吸取无水葡萄糖对照品储备液 0 mL,0.2 mL，0.4 mL，0.6 mL，0.8 mL，1.0 mL 置于 25 mL 的具塞试管中，用蒸馏水补至 1.0 mL。向试液中加入5%苯酚溶液 1.0 mL，然后快速加入 5.0 mL 浓硫酸溶液，放冷后置于水浴中保温 10 min，取出，立即置冰水浴中冷却 10 min，放至室温。以相应试剂为空白，参照可见分光光度法在 490 nm 处测吸光度，以吸光度(y)为纵坐标，葡萄糖质量浓度(mg/mL)(x)为横坐标绘制标准曲线，回归方程为：y=7.505 7x+ 0.002 7, (r=0.999 9)，如图1所示，线性关系良好。