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《中华人民共和国药典》2020年版中防己薄层色谱鉴别研究

2022-06-17曹朴琼陶明宝杨深应顾小迪

云南化工 2022年5期
关键词:防己三氯甲烷薄层

曹朴琼,陶明宝,杨深应,赵 霞,陈 琪,顾小迪

(1.保山市食品药品检验检测中心,云南 保山 678000;2.保山中医药高等专科学校,云南 保山 678000)

防己为防己科粉防己(StephaniatetrandraS.Moore)的干燥根,具有祛风止痛、利水消肿的功效,用于风湿痹痛、水肿脚气、小便不利、湿疹疮毒[1]。其主要化学成分为生物碱类,包括粉防己碱、防己诺林碱、轮环藤酸碱等[2-3]。《中华人民共和国药典》2020年版防己标准中鉴别(2)项下的薄层色谱鉴别以防己诺林碱、粉防己碱为对照,缺乏对照药材对照,同时使用的展开剂中含有易制毒化学物三氯甲烷。三氯甲烷对检测人员具有较大的危害,且受公安部管制,试剂获得比较困难,宜进行优化。本次实验研究是在药典标准上,查阅相关文献[4-8],对防己薄层色谱方法进行优化,增加防己对照药材对照,去除三氯甲烷有毒物质,采用硅胶GF254薄层板直接在紫外光灯(254 nm)下检视,不喷显色剂,简化显色程序,凸显了薄层色谱法准确、快速、廉价、专属性强的特点,为防己薄层色谱鉴别的进一步完善提供参考依据。

1 仪器与试药

1.1 仪器

赛多利斯CP225D电子天平(德国赛多利斯公司),硅胶G薄层板、硅胶GF254薄层板(青岛海洋化工、烟台市化学工业研究所)。

1.2 试药

防己对照药材(批号:121279-201502 )、防己诺林碱对照品(批号:110793-201807)、粉防己碱对照品(批号:110711-201609),均购自中国食品药品检定研究院;防己样品,均来自云南省药品评价抽检专项(样品A,产地江西,批号:190901;样品B,产地江西,批号:190901;样品C,产地江西,批号:20120703;样品D,产地浙江,批号:180303;样品E,产地江西吉安,批号:190701;样品F,产地河南,批号:2103002;样品G,产地江西,批号:20190601;样品H,产地安徽,批号:190401);甲醇、乙醇、乙酸乙酯等试剂,均为分析纯(天津市风船化学试剂科技有限公司),水为纯化水。

2 方法与结果

2.1 《中华人民共和国药典》2020年版一部方法

《中华人民共和国药典》2020年版一部[1]防己【鉴别】(2):取本品粉末 1 g,加乙醇 15 mL,加热回流 1 h,放冷,滤过,滤液蒸干,残渣加乙醇 5 mL 使溶解,作为供试品溶液。另取粉防己碱对照品、防已诺林碱对照品,加三氯甲烷分别制成 1 mg/mL 的混合溶液,作为对照品溶液。照薄层色谱法(通则0502)试验,吸取上述两种溶液各 5 μL,分别点于同一硅胶G薄层板上,以三氯甲烷-丙酮-甲醇-5%浓氨试液(体积比6∶1∶1∶0.1)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以稀碘化铋钾试液,置日光下检视。薄层色谱图见图1。

1.粉防己碱、防己诺林碱混合对照;3~6.供试品:A、B、C、D

2.2 改进方法

取本品粉末 1 g,加2%盐酸甲醇溶液 15 mL,加热回流 1 h,放冷,滤过,滤液蒸干,残渣加乙醇 5 mL 使溶解,作为供试品溶液。另取防己对照药材 1 g,同法制成对照药材溶液。再取粉防己碱对照品、防已诺林碱对照品,加乙醇分别制成 1 mg/mL的混合溶液,作为对照品溶液。照薄层色谱法(通则0502)试验,吸取上述两种溶液各 5 μL,分别点于同一硅胶GF254薄层板上,以乙酸乙酯-丙酮-甲醇-5%浓氨试液(体积比7∶1∶0.7∶0.3)为展开剂,展开,取出,晾干,置紫外灯(254 nm)下检视。薄层色谱图见图2。

1. 粉防己碱、防己诺林碱混合对照; 2. 防己对照药材; 3~10. 供试品:A、B、C、D、E、F、G、H。

2.3 方法学考察

对薄层色谱鉴别方法进行耐用性考察。考察不同温度、湿度和不同薄层板等影响因素,确保方法的可靠性。

2.3.1 不同温度的考察

取薄层板点样,分别在 4 ℃(a)和室温 26 ℃(b)下展开显色检视,结果见图3。结果表明,在室温 26 ℃ 条件下展开较好。

2.3.2 不同湿度的考察

取供试品与对照药材、混合对照品溶液,按“2.2”项下方法,在室温条件下,分别在环境湿度相对湿度为43%(c)、75%(d)的条件下分别展开,结果如图3。结果表明,不同湿度条件下,各斑点分离度均满足要求。

2.3.3 不同品牌的薄层板考察

取本品,分别在硅胶GF254薄层板(青岛海洋化工)(e)与硅胶GF254薄层板(烟台市化学工业研究所)(f)的薄层板点样,展开,结果见图3。结果表明,不同薄层板上主斑点均能较好分离,但青岛海洋化工薄层板上各主斑点更清晰,优选青岛海洋化工硅胶GF254薄层板。

a.4 ℃;b.26 ℃;c.相对湿度为43%;d.相对湿度为75%;e.硅胶GF254薄板层(青岛海洋化工);f.硅胶GF254薄板层(烟台市化学工业研究所)。

2.4 供试品色谱图

吸取供试品溶液和对照药材溶液、混合对照品溶液各 5 μL,按“2.2”项下方法点于同一青岛硅胶GF254薄层板上,结果见图2。结果表明,此方法分离度好,较原标准中显色斑点多,可用于防己鉴别。

3 讨论

3.1 提取溶剂考察

考察了甲醇、乙醇、2%盐酸甲醇[1],发现防己对照药材用甲醇、乙醇提取液,斑点颜色较浅;用2%盐酸甲醇提取液,斑点颜色较深。故选择2%盐酸甲醇作为提取溶剂。

3.2 提取方法考察

以2%盐酸甲醇为提取溶剂,考察回流 1 h、回流 30 min、超声 1 h、超声 30 min,发现4种提取方法对防己诺林碱和粉防己碱没有显著差异,但其余2个斑点在回流 1 h 条件下斑点更清晰,故选择加热回流 1 h 作为提取方法。

3.3 点样量考察

分别对 3 μL、4 μL、5 μL、6 μL、7 μL 点样量进行了考察,结果表明,4 μL 和 5 μL 点样量斑点较清晰,6 μL、7 μL 存在不同程度的拖尾, 故采用 5 μL 为点样量。

3.4 展开剂及薄层板的考察

结合参考文献[4-8],考察了展开剂——三氯甲烷-丙酮-甲醇-5%氨水(体积比6∶1∶1∶0.1)系统、正丁醇-丙酮-甲醇-5%氨水(体积比6∶1∶1∶0.1)系统、乙酸乙酯-丙酮-甲醇-5%氨水(体积比7∶1∶0.7∶0.3)系统,薄层板——硅胶G和硅胶GF254。结果表明,三氯甲烷系统检视斑点较少,正丁醇系统拖尾,乙酸乙酯系统斑点数最多,也最明显,且分离度好 。试验中发现,5%氨水对斑点的Rf值影响较大,故考察了氨水的不同浓度及用量,结果发现:用乙酸乙酯-丙酮-甲醇-5%氨水(体积比7∶1∶0.7∶0.3)时,分离效果最好。考察了硅胶G板展开后喷显色剂和硅胶GF254板直接看荧光,发现:硅胶G板除粉防己碱和防己诺林碱斑点比较明显外,其余斑点显色不清楚,而GF254板能呈现较好的4个斑点,故选择硅胶GF254板,置紫外光灯(254 nm)下检视。

3.5 药典方法和改进后方法的对比

药典方法只用粉防己碱和防己诺林碱作为对照,无对照药材对照,不能全面反映药材质量。改进后方法增加了对照药材对照,供试品在与对照药材色谱相应位置上,能展现较明显的4个斑点,显示出更多鉴别信息;在展开剂组分方面,药典法展开剂中含有毒性较大的易制毒化学品三氯甲烷,本试验把三氯甲烷换为乙酸乙酯,毒性较低且还能展现更多的化学成分,混合对照品的溶剂三氯甲烷也换成毒性较小的乙醇,在日常检验过程中降低对实验人员的危害。

4 结论

该方法专属性强,分离度好,检视简便,可为防己质量标准提高完善提供参考。

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