液相色谱-质谱法同时测定水果和蔬菜中28种农药的残留量

李 倩，王朝杰

(1 浙江锐翱检测技术服务有限公司，浙江 杭州 311300；2 临安区产品质量监测中心，浙江 杭州 311300)

我国蔬菜生产中广泛使用多种农药，过量的农药残留在蔬菜和水果中，随着我们的饮食进入到人体中，导致人体腹泻性疾病等，对人体健康极为不利[1-2]。由于使用的农药种类繁多，单独检测耗费大量的人力物力，效率低。因此，建立一种适用于多种基质，能够同时检测多种农药残留的方法非常必要。传统的气相色谱法(GC)、液相色谱法(HPLC)、气相色谱-质谱联用法 (GC-MS)等检测方法，检测的精准性和全面性有限、覆盖的农药数量较少，且操作过程繁琐、有机溶剂使用量较大，成本较高[3-6]，且很多农药不适合用气相色谱分析。本试验参考国家标准《水果和蔬菜中450种农药及相关化学品残留量的测定 液相色谱-串联质谱法》(GB/T20769-2008)上的检测方法并进行了优化，根据国内外残留限量的要求，建立了蔬菜中28种农药的高效液相色谱-串联质谱 (LC-MS)同时检测的高通量方法，实现了短时间内批量样品的多种类农残准确定性定量检测。

1 实 验

1.1 仪器与试剂

1.1.1 实验仪器

LA-259安捷伦三重串联四级杆液质联用仪；Heating Bath B-100旋转蒸发仪；KQ5200DE超声波清洗机；HR2168制样搅拌机；HC-3108离心机；布奇匀浆机；睿科全自动氮吹仪；水浴锅。

1.1.2 实验试剂

甲醇(色谱纯)、乙腈(色谱纯)、氯化钠(分析纯)、超纯水、甲苯(优级纯)、无水硫酸钠(分析纯)、农药及相关化学品有证标准溶液：100 μg/mL，1 mL；基质混合标准工作溶液：农药及相关化学品基质混合标准工作溶液是用空白样品基质溶液配成不同浓度的基质混合标准工作溶液，用于做标准工作曲线，现配现用。

1.1.3 耗材

微孔过滤膜(尼龙)、安谱氨基固相萃取柱。

1.2 样品预处理

1.2.1 试样提取

称取20 g试样于80 mL离心管中，加入40 mL乙腈，用匀浆机15000 r/min匀浆提取1 min，加入5 g氯化钠，再匀浆提取1 min，在3800 r/min 离心5 min，取上清液20 mL (相当于10 g试样量)，在40 ℃水浴中旋转浓缩至约1 mL，待净化。

1.2.2 净化

在氨基柱中加入约 2 cm 高无水硫酸钠，并放入下接鸡心瓶的固定架上。加样前先用4 mL乙腈+甲苯(3+1)预洗柱，当液面到达硫酸钠的顶部时，迅速将样品浓缩液转移至净化柱上，并更换新接收瓶接收。再每次用2 mL乙腈+甲苯(3+1) 洗涤三次，并将洗涤液移入柱中。在柱上加上50 mL贮液器，用25 mL乙腈+甲苯(3+1)洗脱农药及相关化学品，合并于鸡心瓶中，并在 40 ℃水浴中旋转浓缩至约0.5 mL。将浓缩液置于氮气吹干仪上吹干，迅速加入1 mL的乙腈+水(3+2)，混匀，经0. 2 μm滤膜过滤后进行液相色谱-串联质谱测定。

1.3 色谱条件的选择

(1)色谱柱：ZORBAX SB-C18，3.5 μm，100 mm×2.1 mm(内径)；

(2)流动相及梯度洗脱条件见表1 和表2。

表1 正离子扫描色谱条件流动相及梯度洗脱条件

表2 负离子扫描色谱条件流动相及梯度洗脱条件

柱温：40 ℃；流速：200 μL/min；进样量：10 μL；离子源：AJS ESI；扫描方式：正离子扫描；检测方式：MRM；电喷雾电压：4000 V；流速：10 L/min；干燥气温度：250 ℃；鞘气温度：250 ℃；鞘气流速：11 L/min。

2 结果与讨论

2.1 待测农药的质谱图及相关参数

经过反复试验并参考有关文献，得到28种农药的最佳质谱条件，结果详见图1～图3，表3～表5。

图1 A组19种农药混标的总离子流图

表3 A组19种农药混标的质谱参数

图2 B组7种农药混标的总离子流图

图3 C组2种农药混标的总离子流图

表5 C组2种农药混标的质谱参数

2.2 各农残组分的线性方程与检出限

在进行液相色谱-质谱检测农药残留量方法的线性关系、检出限实验中，由于存在基质效应，会影响化合物定量分析的准确度及重现性，故采用空白基质，配置不同浓度的混合标液进行测定，以各农药的峰面积对质量浓度绘制工作曲线，得到线性回归方程及相关系数。以3倍的信噪比(S/N)对应的空白样品添加的质量浓度作为方法的检出限(LOD)，结果见表6。

表6 各农残组分的线性方程与检出限结果表

2.3 方法的精密度与回收率

本实验室对未检出的阴性样品橙子进行三个浓度的加标实验，每个浓度6次平行，模拟加标回收试验，测定结果见表7。

表7 各农残组分的精密度和回收率结果

续表4

如表7所示，在橙子阴性样品中添加三个浓度的农药进行加标回收试验，测得加标回收率在60%～120%之间，实测数据的最大相对标准偏差RSD<15%。结果表明此方法具有良好的精密度和准确度，能够满足农药残留检测的要求[7]。

3 结 论

农药具有除草、防治病虫害、提高作物产量等作用，但是农药的不规范使用，会使农产品存在农药残留超标的风险，对人体和环境造成危害[8]。本文参考国家标准《水果和蔬菜中450种农药及相关化学品残留量的测定 液相色谱-串联质谱法》[9](GB/T20769-2008)上的检测方法并进行了优化，根据国内外残留限量的要求，建立了蔬菜中28种农药的高效液相色谱-串联质谱 (LC-MS)同时检测的方法，能够完成短时间内批量样品的多种类农残准确定性定量检测。经实验证明该方法分离度强、灵敏度高且选择性好，可以对复杂基质中的痕量物质进行检测分析，对未来农药残留检测分析中具有重要的作用。