4种检测项目对多发性骨髓瘤诊疗价值的研究

魏 娜，王 剑，陆 捷△

华中科技大学同济医学院附属同济医院:1.检验科;2.计算机中心,湖北武汉 430030

多发性骨髓瘤(MM)是恶性浆细胞瘤中最常见的一种类型，以恶性浆细胞在患者骨髓组织中的克隆性增殖、积聚和对相关终末器官的损害为特征[1]，可分泌大量单克隆免疫球蛋白(Ig)或其片段，而正常多克隆Ig分泌、浆细胞的增生受到限制，患者出现贫血、感染、骨质破坏等表现，可累及全身多个系统[2]。该病中老年人群易发，男性患者略多于女性(男女比例约为1.4︰1)，男性患者发病中位年龄69岁，女性患者发病中位年龄71岁，发病率在血液系统肿瘤中仅次于淋巴瘤，目前无法治愈[3-4]。随着新型蛋白酶体抑制剂、新型免疫调节剂、造血干细胞移植、单克隆抗体及嵌合抗原受体T细胞免疫疗法的应用，MM患者生存率明显提高。由于MM发病率逐年增高，临床表现多种多样，故早期诊断对该病的后期治疗、预后具有重要意义。本研究总结了4种检测方法对MM的诊疗价值，现报道如下。

1 资料与方法

1.1一般资料 选取本院2020年6月至2021年6月收治的235例MM患者作为观察组，患者均符合《中国多发性骨髓瘤诊治指南(2020年修订)》[5]诊断标准，并经病理诊断确诊。其中男141例，女94例；年龄35～91岁，平均(60.09±9.34)岁。选取同期80例体检健康者作为对照组，其中男50例、女30例，平均年龄(59.52±8.12)岁。两组在年龄、性别等方面比较，差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。

1.2仪器与试剂 使用美国Beckman公司IMMAGE800特种蛋白分析仪及配套试剂检测IgG、IgA、IgM；血清游离κ和血清游离λ轻链定量采用Roche Cobas8000自动生化分析仪(德国罗氏公司)进行检测，其配套试剂使用The Binding Site Group Ltd产品；血清免疫固定电泳(IFE)、血清蛋白电泳(SPE)的检测使用法国Sebia Hydrasys 2型琼脂糖凝胶电泳分析仪。

1.3方法 采集受检者5 mL静脉血，离心取上清液，采用免疫比浊法检测IgG、IgA、IgM以及血清游离κ轻链和血清游离λ轻链。IFE：将血清标本加样、电泳、固定、洗脱和染色，扫描并分析结果。出现均一、深染的沉淀带即为M带。SPE：使用琼脂糖凝胶电泳法进行检测，获得良好的分离效果后将蛋白分离成清蛋白，α1、α2、β、γ球蛋白和M蛋白，光密度扫描得到各蛋白百分含量。

2 结 果

2.1两种电泳方法M蛋白的检出情况 SPE中M蛋白检出率为89.36%，而IFE中M蛋白检出率为98.3%。见表1。

表1 两种电泳方法M蛋白的检出率比较

2.2MM患者IFE的免疫分型结果 235例MM患者IFE可见M带的有231例，4例非分泌型MM未检出M蛋白。由表2可见，患者的M蛋白以IgG型最多(44.26%)，IgA型和轻链型次之(分别为23.83%和17.45%)，IgM型较少见(1.70%)。本次试验发现5例双克隆型，1例重链型，但未发现IgE型，IgM型M蛋白因检出例数过少，本研究不纳入比较。电泳结果显示，可见条带分布宽且分离良好的M带，见图1。

注：A为IgG-λ型;B为IgM-κ型;C为IgA-κ型;D为IgG-λ型伴IgM-κ型；ELP为对照泳道；标有G、A、M、K、L字母的泳道是分别加用抗IgG、IgA、IgM重链和抗κ、λ轻链抗体的泳道。

表2 235例MM患者的IFE免疫分型结果

2.3Ig定量及游离轻链比值的测定 IgA型、IgG型和游离轻链型MM患者中，血清IgA、IgG和IgM均出现相应变化，与对照者相比，差异均有统计学意义(P<0.05)。在κ型M蛋白的患者中，血清游离κ轻链和κ/λ均高于对照者(P<0.05)；在λ型M蛋白的患者中，血清κ/λ低于对照者(P<0.05)，血清游离λ轻链高于对照者(P<0.05)。见表3。

表3 MM患者和对照者轻链κ、λ水平和血清Ig定量测定

3 讨 论

MM发病年龄呈年轻化趋势，病情进展缓慢，早期大多表现为骨痛、贫血、红细胞沉降率增快等多种不典型临床表现，且骨髓细胞形态学检查很难将其与浆细胞白血病区分开来，Ig的增加也不能将其与诸如巨球蛋白血症等疾病区分开来。相关研究报道，MM患者临床误诊率可达50%[6]。因此，对MM的早期、准确诊断具有非常重要的意义。

SPE属于蛋白质分离最为简便的方式之一，同时也可以获得血清蛋白的整体图谱，对于血清中异常蛋白质(α至γ球蛋白区间出现M条带)的筛选效果十分突出[7]。但是SPE对于M蛋白与α或β区带重合无法检出，通过SPE难以分辨β球蛋白区与γ球蛋白区出现的急性时相反应蛋白或脂蛋白急剧增加时所引起的峰型[8]，需要联合IFE做进一步筛查。另外，在非分泌型MM患者中由于血清中不产生单一的异常Ig，在SPE中未出现M蛋白峰，而轻链型中由于M蛋白含量低，部分蛋白电泳M带也不明显，容易漏诊，此时则需要通过IFE进行确认。

另外，轻链型、不常见型或非分泌型MM患者的血清球蛋白水平并不会增高，需要通过检测Ig的血清蛋白水平进一步明确MM免疫类型[9]，非分泌型MM患者还需要结合病情进行判断，必要时需进行骨髓穿刺确认。

临床上通过IgM型M蛋白检测，检出的淋巴瘤或者巨球蛋白血症患者较多，而MM患者较少。定量检测血清Ig可以更加了解M蛋白的数量及具体类型，但MM患者普遍存在免疫功能障碍，单克隆Ig逐渐成为优势蛋白时，正常Ig水平会降低。只是单单依靠Ig定量检测并不能准确诊断MM，还需要进一步行IFE。

IFE是由抗原-抗体反应与电泳技术相结合的分析技术，结合单克隆抗体的高敏感性、高特异性以及蛋白质电泳的高分辨率分离技术，具有分辨率好、敏感性高、特异性高、可直接判读等优点，是目前主要应用于鉴别M蛋白的方法之一[10]。需要注意的是：某些单克隆蛋白质可能因多聚体形成而导致所有的免疫固定泳道上均出现单克隆片段。这种情况下需准备1% β-巯基乙醇，加25 μL还原剂于75 μL血清中，混匀并放置至少15 min(至多3 h)。

MM患者常常出现单克隆浆细胞异常增生并且分泌大量的单克隆Ig(M蛋白)，同时产生大量过剩的游离轻链，从肿瘤性浆细胞中排到血清中，从而使正常的Ig生成受到抑制[11]。单克隆成分占据绝对优势而正常Ig水平降低是MM的M蛋白特点之一。因此，在日常检测工作中，遇到某一种Ig水平升高而其他Ig水平降低，如IgG定量结果升高而IgA、IgM定量结果降低或低于检测下限时，应及时与临床沟通并建议送检IFE来进一步排查。

Ig定量使用的是免疫比浊法，当抗原过剩时会造成钩状效应，Ig水平并未升高，从而导致部分样本漏检，这时就需要进一步采用IFE筛查。如果标本在起始稀释度条件下抗原过量，应在更高稀释度条件下重新检测，进而得到更加符合电泳模式的结果。

血清游离轻链检测则可以减少电泳技术对不分泌型多发性骨髓瘤(NSMM)的漏检。国外的研究也显示，经过干细胞移植前的MM患者，其血清中的游离轻链比值与早期疾病的进展有关，血清游离轻链水平的降低也可以预测干细胞移植后的良好结局[12]。目前，血清游离轻链κ/λ已成为MM部分缓解或完全缓解的判断标准之一，是预测MM患者预后的独立危险因子[13]。

综上所述，SPE、IFE、血清Ig定量和游离轻链比值对MM的临床诊疗价值较高，可先用Ig定量与SPE实现初步筛查，而后使用IFE技术实现临床诊断及鉴别诊断。在结合型MM中，SPE中M蛋白水平的降低可作为疗效监测指标，而在游离型MM中可将游离轻链的比值应用于监测MM的病情变化，指导临床选择与制订诊疗方案，评估疗效。因此，这4种项目联合检测可以更好地为临床诊断和疗效评估提供参考。