一株凤丹皮内生真菌Fusarium acutatum的次生代谢产物研究

孔垂皓，孙 磊,2，赵 焕，赵宏苏，张培良，吴德玲，黄圣卓，许凤清

(1.安徽中医药大学 中药饮片制造新技术安徽省重点实验室，安徽 合肥 230012；2.浙江康恩贝制药股份有限公司，浙江 杭州 310052；3.中国热带农业科学院热带生物技术研究所，海南 海口 571101)

凤丹皮为芍药科植物凤丹(Paeoniaostii)的干燥根皮，为牡丹皮药材的主要来源[1]。安徽铜陵为>凤丹皮的主要栽培产区，凤凰山所出者以皮厚、木心小、香气足、疗效好而享有道地药材之美誉。凤丹皮为清热凉血、活血化瘀之要药，其富含酚类和蒎烷类的单萜成分[2]。 内生真菌作为植物体内与宿主共生的微生物类群，与宿主协同进化，参与植物生理作用和联合代谢，在维持植物生长发育中起着关键作用。内生真菌能够促进宿主植物生长和抗逆性以及产生与宿主植物相同或相近的代谢产物，是药材形成道地性的关键因子。本实验前期对凤丹皮不同生长期内生真菌多样性研究中，分离并鉴定了9属13种内生真菌[3]，并运用生物发酵工程对Aspergillussp.MBL1612、Aspergillussp和Fusariumoxysporum3株菌株的发酵产物进行化学成分研究[4-6]。现对Fusariumacutatum的次生代谢产物的分离和鉴定工作进行报道。

1 仪器与材料

1.1 仪器与试剂 捷欧路JNM-ECP 600 MHz型核磁共振波谱仪：日本电子株式会社；Agilent 1260 Infinity 2液相色谱系统：美国Agilent公司；SW-CJ-2FD超净工作台：苏州净化设备有限公司；Milli-Q一体式超纯水处理器：美国Merck公司；ZF-1型三用紫外分析仪：上海驰唐电子有限公司；LE104E型万分之一电子天平:瑞士梅特勒-托利多集团；低温冰箱(50 L)：海信集团有限公司；生化培养箱：上海一恒科学仪器有限公司；YMC-Pack ODS-A色谱柱(粒径5 μm，孔径12 nm，长250 mm，宽10.0 mm)：日本株式会社；Sephadex LH-20(50 μm)：美国通用电气公司；反相材料Rp-18(40～75 μm)：日本富士硅化学株式会社；柱色谱硅胶(200～300目)和GF254薄层色谱用硅胶板：青岛海洋化工厂；甲醇、乙腈(色谱纯)：美国TEDIA公司；其他试剂均为分析纯；水为超纯水；显色剂为10%硫酸-乙醇溶液(105 ℃加热显色)。

1.2 菌株来源 新鲜凤丹皮块根于2017年采集于安徽省铜陵市凤凰山铁山村凤丹皮种植基地，经安徽中医药大学方成武教授鉴定为芍药科芍药属PaeoniaostiiT. Hong et J. X. Zhang的新鲜植株。菌株按文献[3]进行分离纯化，由上海生工生物工程有限公司进行分子鉴定，经基因测序对比后鉴定为Fusariumacutatum(GenBank: AY213653)，现保存于安徽中医药大学天然药物化学研究室(样本凭证号m 20)。

1.3 马铃薯葡萄糖琼脂(potato dextrose agar, PDA)培养基 每升培养基中含去皮马铃薯200 g、磷酸二氢钾3 g、蛋白胨1 g、葡萄糖20 g、维生素B 110 mg、硫酸镁1.5 g，最后加入氢氧化钠，调节pH值至5.5～6.0。每300 mL加1.8 g琼脂粉。将PDA培养基放入500 mL锥形瓶中，用铝箔封口，高压灭菌30 min，趁热导入已灭菌的冷却干燥培养皿中，凝固冷却，备用。大米固体培养基：取100 g大米，倒入120 mL超纯水于500 mL锥形瓶中，封口。放入高压蒸汽灭菌锅120 ℃灭菌30 min，备用。

2 实验方法

2.1 固体发酵 将保存于-18 ℃冰箱的斜面培养基的F.acutatum接种于PDA平板，在恒温培养箱中28 ℃培养6 d，待菌种长至约2/3平板，观察菌落形态，挑选无污染且长势良好的平板，用接种环挑取菌落周围新长出的菌丝，接种于多个PDA平板中，培养8 d，待菌种铺满整个平板时，将其用打孔器制成直径约6 mm的圆片，接种于已灭菌的大米培养基，28 ℃的生化培养箱中培养30 d，共计75瓶。

2.2 发酵产物的提取与分离 将内生真菌F.acutatum的发酵产物，依次用1.5倍容积的乙酸乙酯和甲醇浸渍提取3次，每次48 h，过滤，合并滤液，减压浓缩后得到乙酸乙酯部位浸膏约300 g，甲醇部位浸膏88 g。

取乙酸乙酯萃取部位300 g，经硅胶柱色谱(石油醚-乙酸乙酯)进行洗脱，经薄层色谱法(thin layer chromatography, TLC)检识合并得到8个流分E1—E8。取甲醇萃取部位88 g，经硅胶柱色谱(二氯甲烷-甲醇)洗脱，经TLC检识合并得到7个流Fr.1—Fr.7。

将流分E2依次经硅胶柱色谱[V(石油醚)∶V(乙酸乙酯)=9∶1]、Sephadex LH-20柱色谱[V(二氯甲烷)∶V(甲醇)=1∶1]得到化合物7；将流分E3依次经硅胶柱色谱[V(石油醚)∶V(丙酮)=9∶1]、Sephadex LH-20柱色谱[V(二氯甲烷)∶V(甲醇)=1∶1]得到化合物14(14 mg)和15(280 mg)；将流分E4经Sephadex LH-20柱色谱[V(二氯甲烷)∶V(甲醇)=1∶1]洗脱，经TLC检识合并得到4个流分E4.1—E4.4。将流分E4.4重结晶后得到化合物6(31 mg)；将流分E4.3经反相ODS柱色谱[V(甲醇)∶V(水)=40∶ 60→80∶20]洗脱，经TLC检识后将60%洗脱部位经Sephadex LH-20柱色谱[V(二氯甲烷)∶V(甲醇)=1∶1]纯化后得到化合物2(8 mg)，将80%洗脱部位经Sephadex LH-20柱色谱[V(二氯甲烷)∶V(甲醇)=1∶1]得到流分E4.3.1—E4.3.3，再将流分E4.3.1重结晶得到化合物10(12 mg)，将流分E4.3.3经制备液相[V(乙腈)∶V(水)=98∶2，流速3 mL/min，检测波长210 nm，保留时间47.5 min]得到化合物8(9 mg)；取流分E5经Sephadex LH-20柱色谱[V(二氯甲烷)∶V(甲醇)=1∶1]，经TLC检识合并得到4个流分E5.1—E5.4，流分E5.2经硅胶柱色谱[V(石油醚)∶V(丙酮)=9∶1→5∶1]得到2份白色固体，经重结晶后得到化合物4(26 mg)和3(15 mg)；流分E5.4经反相ODS柱色谱[V(甲醇)∶V(水)=30∶70→50∶50]洗脱得到无色晶体，再经制备液相柱色谱[V(甲醇)∶V(水)=35∶65，流速3 mL/min，检测波长280 nm，保留时间28.4 min]得到化合物5(6 mg)；将流分E7依次经硅胶柱色谱[V(二氯甲烷)∶V(甲醇)=19∶1]、Sephadex LH-20柱色谱[V(二氯甲烷)∶V(甲醇)=1∶1]、制备液相[V(乙腈)∶V(水)=90∶10，流速2 mL/min，检测波长210 nm，保留时间32 min]得到化合物9(5 mg)；将流分Fr.2依次经Sephadex LH-20柱色谱[V(二氯甲烷)∶V(甲醇)=1∶1]、反相ODS柱色谱[V(甲醇)∶V(水)=40∶60→85∶15]洗脱，将85%洗脱部位经硅胶柱色谱[V(二氯甲烷)∶V(甲醇)=19∶1]得到化合物11(7 mg)，剩余流分经制备液相[V(乙腈)∶V(水)=85∶15，流速3 mL/min，检测波长210 nm，保留时间14.5 min]得到化合物1(12 mg)；流分Fr.4经Sephadex LH-20(甲醇)柱色谱重结晶后得到化合物13(10 mg)；流分Fr.7甲醇溶解过滤后经Sephadex LH-20(甲醇)柱色谱，重结晶后得到化合物12(58 mg) 。

3 结构鉴定

化合物1为黄色粉末(氯仿)；10%硫酸-乙醇显色为紫红色斑点。ESI-MS:m/z681.2[M+H]+；1H NMR(600 MHz，CDCl3)δ：7.15(1H，d，J=8.5 Hz，H-3′)，6.59(1H，d，J=8.5 Hz，H-2′)，6.48(1H，s，H-4)，5.28(1H，d，J=1.4 Hz，H-5′)，4.37(1H，dd，J=4.0，1.9 Hz，H-5)，3.79(3H，s，H-12)，3.65(3H，s，H-12′)，2.84、2.37(1H each，H-7)，2.16、1.98(1H each，H-6)，2.38(2H，m，H-7′)，2.32(1H，m，H-6′)，2.08(3H，s，Me-3)，1.93(3H，s，Me-5′)，0.93(3H，d，J=6.4 Hz，Me-3′)；13C NMR(150 MHz，CDCl3)δ：159.89(s，C-1)，118.62(s，C-2)，148.55(s，C-3)，108.99(d，C-4)，156.87(s，C-4a)，67.05(d，C-5)，23.13(t，C-6)，24.39(t，C-7)，178.71(s，C-8)，100.52(s，C-9)，187.48(s，C-9a)，104.84(s，C-9b)，83.94(s，C-10)，171.25(s，C-11)，53.60(q，C-12)，21.10(q，Me-3)，161.79(s，C-1′)，110.31(d，C-2′)，139.99(d，C-3′)，114.67(s，C-4′)，155.51(s，C-4′a)，69.49(d，C-5′)，27.86(d，C-6′)，32.81(t，C-7′)，177.73(s，C-8′)，100.23(s，C-9′)，187.82(s，C-9′a)，106.88(s，C-9′b)，82.13(s，C-10′)，170.64(s，C-11′)，53.33(q，C-12′)，17.09(q，Me-3′)。上述数据与文献[7]中报道数据基本一致，故鉴定化合物1为neosartorin。

化合物2为黄色油状物，10%硫酸-乙醇显色为紫红色斑点。ESI-MS：m/z241.2 [M+H]+；1H NMR(600 MHz，CDCl3)δ：5.12(1H，t，J=7.2 Hz，H-10)，2.04(2H，m，H-9)，1.62、1.55(3H each，s，H-12，-15)，1.40(1H，t，J=8.4 Hz，H-8)，1.18(3H，s，H-13)，1.09(3H，s，H-14)，0.97(1H，d，J=6.6 Hz，H-1)；13C NMR(150 MHz，CDCl3)δ：131.62(s，C-11)，124.61(d，C-10)，81.29(s，C-3)，74.88(s，C-7)，54.26(d，C-6)，44.29(d，C-2)，40.51(t，C-8)，40.41(t，C-4)，26.09(q，C-13)，25.73(q，C-12)，24.96(q，C-14)，24.33(t，C-5)，22.69(t，C-9)，17.69(q，C-15)，14.62(q，C-1)。上述数据与文献[8]中报道数据基本一致，故鉴定化合物2为cyclonerodiol。

化合物3为白色粉末(甲醇)；10%硫酸-乙醇显色为紫红色斑点。ESI-MS：m/z654.4[M+H]+；1H NMR(600 MHz，CDCl3)3个N-MeVal片段质子信号δ：4.55(3H，m，H-2)，2.29(3H，m，H-3)，1.06(3H×3，m，H-4a)，0.90(3H×3，m，H-4b)，3.14、3.12、3.11(3H each，s，N-Me)；2个Hiv片段质子信号δ：5.14(2H，m，H-2′)，2.29(2H，m，H-3′)，0.98(3H×4，m，H-4′a,-4′b)；Hmp片段质子信号δ：5.27(1H，d，J=6.6 Hz，H-2″)，2.00(1H，m，H-3″)，1.46、1.19(1H each，m，H-4″)，0.92(3H，m，H-5″)，0.96(3H，d，J=6.0 Hz，Me-3″)；13C NMR(600 MHz，CDCl3)3个N-MeVal片段碳信号δ：170.38(s×3，C-1)，63.36、63.30、63.15(d each，C-2)，28.05、27.98、27.93(d each，C-3)，20.50、20.44、20.44(q each，C-4a)，19.55、19.44、19.33(q each，C-4b)，33.27、33.07、33.07(d each，N-Me)；2个Hiv片段碳信号δ：169.3(s×2，C-1′)，75.92、75.78(d each，C-2′)，30.01(d ×2，C-3′)，18.75、18.73(q each，C-4a′)，18.60(q ×2，C-4b′)；Hmp片段碳信号δ：169.3(s，C-1″)，74.40(d，C-2″)，36.17(d，C-3″)，25.49(t，C-4″)，11.38(q，C-5″)，14.67(q，Me-3″)。上述数据与文献[9]报道数据基本一致，故化合物3鉴定为enniatin H。

化合物4为白色无定型粉末(氯仿)；10%硫酸-乙醇显色为紫红色斑点。ESI-MS：m/z262.1[M+H]+；1H NMR(600 MHz，CDCl3)δ：7.24(4H，m，H-12，-13，-15，-16)，7.17(1H，m，H-14)，5.52(1H，d，J=7.2 Hz，H-3)，4.87(1H，d，J=8.4 Hz，H-6)，3.34(1H，dd，J=15.0,5.4 Hz，H-10a)，2.93(1H，dd，J=15.0,12.0 Hz，H-10b)，2.99(3H，s，Me-4)，1.94(1H，m，H-7)，0.80(3H，d，J=6.6 Hz，H-9)，0.41(3H，d，J=6.6 Hz，H-8)；13C NMR(150 MHz，CDCl3)δ：170.04(s，C-3)，169.78(s，C-2)，136.68(s，C-11)，128.92(d×2，C-12，-16)，128.65(d×2，C-13，-15)，126.89(d，C-14)，75.69(d，C-6)，57.22(d，C-3)，34.83(t，C-10)，32.29(q，Me-4)，29.82(d，C-7)，18.43(q，C-9)，17.45(q，C-8)。上述核磁数据与文献[10]报道数据一致，鉴定该化合物4为(3R,6R)-4-Methyl-6-(1-methylethyl)-3-phenylmethylperhy-dro-1,4-oxazine-2,5-dione。

化合物5为白色针状结晶(甲醇)；10%硫酸-乙醇显色为紫红色斑点。ESI-MS：m/z195.1 [M+H]+；1H NMR(600 MHz，CD3OD)δ：7.38(1H，dd，J=7.2,1.2 Hz，H-4)，6.68(1H，dd，J=7.2 Hz，H-5)，6.60(1H，br s，H-8)，2.36(3H，d，J=1.2 Hz，Me-3)，2.10(3H，br s，Me-7)；13C NMR(150 MHz，CD3OD)δ：169.51(s，C-9)，164.30(s，C-2)，158.60(s，C-6)，143.62(s，C-7)，141.30(d，C-4)，128.08(s，C-3)，120.11(d，C-8)，107.27(d，C-5)，16.72(q，Me-3)，13.60(q，Me-7)。以上数据与文献[11]中gibepyrone D的数据基本一致，故鉴定化合物5为gibepyrone D。

化合物6为白色粉末(氯仿)，10%硫酸-乙醇显色为紫红色斑点。ESI-MS：m/z153.1[M+H]+；1H NMR(600 MHz，CDCl3)δ：7.26(1H，dq，J=6.7，1.3 Hz，H-4)，6.96(1H，d，J=6.7 Hz，H-7)，2.52(3H，s，H-2′)，2.19(3H，d，J=1.3 Hz，Me-3)；13C NMR(150 MHz，CDCl3)δ：191.37(s，C-1′)，161.31(s，C-2)，153.32(s，C-6)，137.98(d，C-4)，131.94(s，C-3)，107.17(d，C-5)，25.83(q，C-2′)，17.49(q，Me-3)。上述数据与文献[12]基本一致，故鉴定化合物6为gibepyrone F。

化合物7为白色针状结晶(甲醇)，10%硫酸-乙醇显色为紫红色斑点。ESI-MS：m/z397.3 [M+H]+；1H NMR(600 MHz，CD3OD)δ：5.57(1H，dd，J=5.6，2.5 Hz，H-7)，5.38(1H，m，H-6)，5.23(1H，dd，J=15.6，7.6 Hz，H-23)，5.20(1H，dd，J=15.6，9.0 Hz，H-22),3.61(1H，m，H-3)，1.04(3H，d，J=6.6 Hz，H-21)，0.95(3H，s，H-19)，0.92(3H，d，J=6.8 Hz，H-28)，0.84(3H，d，J=6.8 Hz，H-27)，0.82(3H，d，J=6.8 Hz，H-26)，0.63(3H，s，H-18)；13C NMR(150 MHz，CD3OD)δ：141.36(s，C-8)，139.80(s，C-5)，135.58(d，C-22)，132.00(d，C-23)，119.61(d，C-6)，116.31(d，C-7)，70.47(d，C-3)，55.76(d，C-14)，54.58(d，C-17)，46.27(d，C-9)，42.85(d，C-13)，42.85(d，C-24)，40.81(t，C-4)，40.43(d，C-20)，39.10(t，C-16)，38.39(t，C-1)，37.05(s，C-10)，33.10(d，C-25)，32.00(t，C-2)，28.30(t，C-12)，23.01(q，C-21)，21.13(t，C-15)，21.11(t，C-11)，19.96(q，C-26)，19.66(q，C-27)，17.62(q，C-28)，16.50(q，C-19)，12.06(q，C-18)。上述核磁数据与文献[13]基本一致，鉴定化合物7为麦角甾醇。

化合物8为白色针状结晶(甲醇)，10%硫酸-乙醇显色为紫红色斑点。ESI-MS：m/z429.3 [M+H]+；1H NMR(600 MHz，CDCl3)δ：6.51(1H，d，J=8.4 Hz，H-7)，6.24(1H，d，J=8.4 Hz，H-6)，5.21(1H，dd，J=15.4，7.8 Hz，H-23)，5.15(1H，dd，J=15.4，9.0 Hz，H-22)，3.94(1H，m，H-3)，1.00(3H，d，J=6.8 Hz，H-21)，0.91(3H，d，J=6.8 Hz，H-28)，0.88(3H，s，H-19)，0.83(3H，d，J=6.8 Hz，H-27)，0.82(3H，d，J=6.8 Hz，H-26)，0.82(3H，s，H-18)；13C NMR(150 MHz，CD3OD)δ：135.43(d，C-6)，135.22(d，C-22)，132.33(d，C-23)，130.77(d，C-7)，82.17(s，C-5)，79.44(s，C-8)，66.49(d，C-3)，56.22(d，C-17)，51.70(d，C-14)，51.11(d，C-9)，44.58(s，C-13)，42.79(d，C-24)，39.73(d，C-20)，39.36(t，C-12)，36.98(t，C-4)，36.95(s，C-10)，34.71(t，C-1)，33.08(d，C-25)，30.13(t，C-2)，28.65(t，C-16)，23.41(t，C-11)，21.13(t，C-15)，20.89(q，C-21)，19.95(q，C-27)，19.65(q，C-26)，18.18(q，C-19)，17.57(q，C-28)，12.88(q，C-18)。上述核磁数据与文献[14]基本一致，鉴定化合物8为ergosterol peroxide。

化合物9为白色针状结晶(甲醇)，10%硫酸-乙醇显色为紫红色斑点。ESI-MS：m/z431.3 [M+H]+；1H NMR(600 MHz，CD3OD)δ：5.23(1H，m，H-7)，5.21(1H，dd，J=15.4，7.4 Hz，H-23)，5.18(1H，dd，J=15.4，8.3 Hz，H-22)，3.94(1H，m，H-3)，3.53(1H，br s，H-6)，1.06(3H，s，H-19)，1.03(3H，d，J=6.8 Hz，H-21)，0.93(3H，d，J=6.8 Hz，H-27)，0.85(3H，s，H-26)，0.83(3H，d，J=6.8 Hz，H-28)，0.64(3H，s，H-18)；13C NMR(150 MHz，CD3OD)δ：139.61(s，C-8)，135.29(d，C-22)，131.29(d，C-23)，119.34(d，C-7)，74.40(s，C-5)，72.03(d，C-6)，65.88(d，C-3)，55.21(d，C-17)，54.07(d，C-14)，42.89(s，C-13)，42.17(d，C-9)，41.90(d，C-24)，40.08(t，C-4)，39.92(t，C-12)，38.86(d，C-20)，36.55(s，C-10)，32.36(t，C-1)，32.36(d，C-25)，31.07(t，C-2)，27.62(t，C-16)，22.49(t，C-15)，21.23(t，C-11)，20.88(q，C-21)，19.65(q，C-27)，19.36(q，C-26)，17.60(q，C-19)，17.18(q，C-28)，11.97(q，C-18)。上述核磁数据与文献[15]基本一致，鉴定化合物9为(20S, 22E, 24R)-麦角甾-7,22-二烯-3β,5α,6β-三醇。

化合物10为白色粉末(氯仿)，10%硫酸-乙醇显色为紫红色斑点。ESI-MS：m/z309.2[M+H]+；1H NMR(600 MHz，CDCl3)δ：7.18(1H，m，H-9)，7.15(1H，m，H-8)，6.49(1H，m，H-7)，6.46(1H，m，H-10)，2.59(2H，t，J=7.4 Hz，H-5)，2.58(2H，t，J=7.4 Hz，H-12)，2.34(2H，t，J=7.5 Hz，H-2)，1.60(6H，m，H-3，-4，-13)，1.32(8H，m，H-14，-15，-16，-17)，0.91(3H，t，J=7.4 Hz，H-18)；13C NMR(150 MHz，CDCl3)δ：200.17(s，C-11)，200.02(s，C-6)，178.26(s，C-1)，138.92(d，C-9)，138.84(d，C-8)，136.05(d，C-10)，135.97(d，C-7)，41.25(t，C-12)，41.07(t，C-5)，33.71(t，C-2)，28.99(t，C-13)，28.97(t，C-4)，28.84(t，C-3)，26.14(t，C-16)，24.61(t，C-14)，23.91(t，C-15)，22.36(t，C-17)，13.95(q，C-18)。以上数据与文献[16]中的数据很相似，唯一不同的是化合物10少了一个甲氧基的碳信号，且1位的羰基碳信号向低场位移了4.1×10-6m，推测原来1位的甲氧基由羟基取代[17]，因此化合物10结构鉴定为(7E,9E)-6,11-dioxononadeca-7,9-dienoic acid。

化合物12为白色固体(甲醇)，10%硫酸-乙醇显色为黑色斑点。ESI-MS：m/z340[M-H]-；1H-NMR(600 MHz，CD3OD)δ：5.11(1H，d，J=3.6 Hz，H-1)，4.48(1H，d，J=7.8 Hz，H-1′)，3.84(1H，br d，J=11.5 Hz)，3.77(2H，m)，3.64(3H，m)，3.34(2H，m)，3.27(3H，m)，3.12(1H，t，J=8.5 Hz，H-3′)；13C NMR(150 MHz，CD3OD)δ：96.85(d，C-1)，92.63(d，C-1′)，76.74(d，C-5)，76.62(d，C-3)，74.94(d，C-5′)，73.53(d，C-3′)，72.50(d，C-4)，71.65(d，C-4′)，70.51(d，C-2)，70.38(d，C-2′)，61.53(d，C-6)，61.42(t，C-6′)。以上数据与文献[19]基本一致，故鉴定化合物12为α-D-吡喃葡萄糖基-(1→1′)-3′-氨基-3′-去氧-β-D-吡喃葡萄糖苷。

化合物13为白色固体(甲醇)，10%硫酸-乙醇显色为黑色斑点。ESI-MS：m/z179.1[M-H]-；1H-NMR(600 MHz，CD3OD)羟基质子信号组δ：6.14(1H，d，J=4.8 Hz)，4.85(1H，t，J=3.0 Hz)，4.70(1H，d，J=5.5 Hz，OH-1)，4.57(1H，d，J=4.8 Hz)，4.39(1H，d，J=6.7 Hz)；4.29(1H，dd，J=6.8，5.6 Hz，H-1)，3.53(1H，ddd，J=11.5，5.4，2.3 Hz，H-6a)，3.49(1H，ddd，J=11.5，2.4，2.2 Hz，H-6b)，3.39、3.36、3.04、2.98(1H each，m，H-3，-4，-2，-5)；13C NMR(150 MHz，CD3OD)δ：92.10(d，C-1)，72.96(d，C-3)，72.24(d，C-2)，71.82(d，C-4)，70.46(d，C-5)，61.10(t，C-6)。以上数据与文献[20]中化合物coyolosa比较，与其单元结构核磁数据基本一致，故鉴定化合物13为α-D-alloypyranose。

化合物14为无色针晶(二氯甲烷)，10%硫酸-乙醇显色为紫红色斑点。ESI-MSm/z:435.4[M+Na]+；1H-NMR(600 MHz，CDCl3)δ：5.32(1H，dt，J=6.1，2.0 Hz)，5.12(1H，dd，J=15.6，9.0 Hz)，4.98(1H，dd，J=15.6，9.0 Hz)，3.51(1H，m)，1.00(3H，s，H-19)，0.89(3H，d，J=6.8 Hz，H-21)，0.78(3H，t，J=7.4 Hz，H-29)，0.84、0.82(3H each，d，J=6.8 Hz，H-26，-27)，0.68(3H，s，H-18)；13C-NMR(150 MHz，CDCl3)δ：37.29(t，C-1)，31.69(t，C-2)，71.90(d，C-3)，42.40(t，C-4)，141.63(s，C-5)，121.87(d，C-6)，31.97(t，C-7)，31.97(t，C-8)，50.02(d，C-9)，36.26(s，C-10)，21.29(t，C-11)，39.76(t，C-12)，42.30(s，C-13)，56.04(d，C-14)，25.47(t，C-15)，28.99(t，C-16)，56.94(d，C-17)，12.23(q，C-18)，19.06(s，C-19)，40.56(d，C-20)，21.29(q，C-21)，138.41(d，C-22)，129.36(d，C-23)，51.36(d，C-24)，29.76(d，C-25)，19.01(q，C-26)，18.83(q，C-27)，24.44(t，C-28)，13.12(q，C-29)。以上数据与文献[21]报道一致，故鉴定化合物14为豆甾醇。

化合物15为无色针晶(二氯甲烷)；10%硫酸-乙醇显色为紫红色斑点。ESI-MSm/z:437.4[M+Na]+。1H-NMR(600 MHz，CDCl3)δ：5.33(1H，dt，J=6.0，1.8 Hz)，3.47(1H，m，H-3)，0.99(3H，s，H-19)，0.91(3H，d，J=6.6 Hz，H-21)，0.83(3H，t，J=7.2 Hz，H-29)，0.84、0.82(3H each，d，J=6.6 Hz，H-26，-27)，0.67(3H，s，H-18)；13C-NMR(150 MHz，CDCl3)δ：140.77(s，C-5)，121.73(d，C-6)，71.63(d，C-3)，56.78(d，C-14)，56.107(d，C-17)，50.15(d，C-9)，45.86(d，C-24)，42.24(s，C-13)，42.32(t，C-4)，39.79(t，C-12)，37.27(t，C-1)，36.52(s，C-10)，36.16(d，C-20)，33.96(t，C-22)，31.92(t，C-2，-7)，31.68(d，C-8)，29.17(d，C-25)，28.26(t，C-16)，26.10(t，C-23)，24.32(t，C-15)，23.08 (t，C-28)，21.09(t，C-11)，19.83(q，C-26)，19.41(q，C-27)，19.05(q，C-19)，18.79(q，C-21)，11.99(q，C-29)，11.87(q，C-18)。以上数据与文献[22]报道一致，故鉴定化合物15为β-谷甾醇。

4 结论

从凤丹皮内生真菌F.acutatum的大米固体发酵物中分离得到15个化合物，主要为甾醇类、α-吡喃酮衍生物、噁嗪二酮衍生物、环肽等。麦角甾醇类成分在抗氧化、抗菌、抗肿瘤、抗补体以及减少心脑血管疾病的发生方面发挥着积极的作用，同时作为一类重要的医药化工原料，用于可的松及激素黄体酮的等甾醇类药物的生产。研究利用大米为培养基培养该菌株，得到的次生代谢物中以麦角甾醇及其衍生物为主，然而早在2005年，Gopalakrishnan等[23]对鹰嘴豆中分离得到的该菌株的液体发酵物中分离得到8-O-methyl-fusarubin,提示其次生代谢产物与培养条件密切相关，后续的研究工作应着重于优选该菌株的培养条件，以期获得结构单一的目标化合物，合理开发利用该菌株。