程序性死亡受体配体1在乳腺癌组织中的表达及与患者临床特征的关系

徐瑾，周霞，杨玉珍，李世凤，余静

信阳市中心医院1肿瘤外科，2放射治疗科，3肿瘤内科，河南 信阳 464000

乳腺癌是一种发生于乳腺上皮组织且严重影响女性身心健康甚至危及生命的恶性肿瘤，其发病率和病死率在女性恶性肿瘤中均排名靠前[1]。目前乳腺癌常见的治疗方案为手术、放化疗、激素治疗等[2]。尽管相关治疗方法很多，但侵袭性乳腺癌患者的10年远处转移率超过50%，临床治疗效果不能令人满意[3]。研究指出，乳腺癌具有一定的免疫原性，尤其是增殖性乳腺癌的免疫原性较高[4-5]。近年来乳腺癌的免疫治疗发展迅速，通过靶向抑制乳腺癌免疫检查点，能够抑制肿瘤细胞发生免疫逃逸，临床效果较好[6-7]。研究表明，T细胞中程序性死亡受体配体1（programmed cell death 1 ligand 1，PDCD1LG1，也称PD-L1）高表达能够促使T细胞的免疫作用减弱或诱导其凋亡进而引起免疫抑制，使肿瘤细胞发生免疫逃逸[8-9]。另有研究指出，PD-L1表达情况与乳腺癌的病情进展相关[10]。尽管有关PD-L1在乳腺癌中表达情况的研究很多，但是PD-L1表达与患者临床特征（如分化程度、肿瘤分期、肿瘤大小、淋巴结转移等）关系的研究结论不一致，PD-L1高表达与乳腺癌不良结局是否有关仍存在争议[11-12]。本研究探讨PD-L1在乳腺癌中的表达及与患者临床特征的关系，旨在揭示PD-L1表达对乳腺癌发生发展的影响，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选择2018年7月至2019年7月信阳市中心医院收治的乳腺癌患者。纳入标准：①年龄≥18岁；②经病理检查确诊为乳腺癌，根据国际抗癌联盟（Union for International Cancer Control，UICC）及美国癌症联合会（American Joint Committee on Cancer，AJCC）乳腺癌TNM分期标准[13]，临床分期为Ⅰ～Ⅲ期；③根据Bloom-Richardson分级标准[14]，组织学分级为Ⅰ～Ⅲ级；④术前无放疗或化疗史。排除标准：①合并严重免疫系统疾病；②非原发性乳腺癌；③合并其他严重器质性疾病。依据纳入和排除标准，本研究共纳入70例患者，收集70例乳腺癌组织和70例癌旁组织（距乳腺癌病灶3 cm）。本研究经医院伦理委员会审批通过，所有患者均知情同意并签署知情同意书。

1.2 免疫组织化学染色法检测PD-Ll的表达情况

制作乳腺癌组织和癌旁组织切片，切片厚度为2.5 μm，采用免疫组织化学染色法进行染色。将组织切片置于3%H2O2中室温浸泡12 min，采用柠檬酸钠伴高温促进抗原修复，冷却10 min后清洗，使用封闭液封闭乳腺癌和癌旁组织，采用鼠抗人PD-L1单克隆抗体（1∶100稀释）4℃孵育过夜。清洗后37℃孵育二抗30 min。然后采用链霉亲和素-生物素复合物孵育30 min，二氨基联苯胺显色，苏木素复染，然后脱水、封闭切片并观察。

1.3 免疫组织化学染色结果判定

PD-L1阳性表达主要位于细胞质及细胞膜，镜下呈棕褐色。依据阳性细胞比例及染色强度进行半定量分析并计分。染色强度评分：无色为0分，淡黄色为1分，棕黄色为2分，棕褐色为3分。阳性细胞比例评分：＜5%为0分，5%～25%为1分，26%～50%为2分，51%～75%为3分，＞75%为4分。染色强度评分与阳性细胞比例评分乘积≤1分为阴性，反之为阳性[15]。

1.4 统计学方法

采用SPSS 18.0软件对数据进行统计分析，计数资料以例数和率（%）表示，组间比较采用χ2检验；计量资料以均数±标准差（±s）表示，组间比较采用t检验；采用非条件Logistic回归模型进行多因素分析；以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 乳腺癌组织与癌旁组织中PD-L1阳性表达率的比较

乳腺癌组织中PD-L1阳性表达率为25.71%（18/70），明显高于癌旁组织的8.57%（6/70），差异有统计学意义（χ2=7.241，P=0.007）。

2.2 不同临床特征乳腺癌患者乳腺癌组织中PD-L1表达情况的比较

不同年龄、手术方式、乳腺癌家族史、绝经情况乳腺癌患者乳腺癌组织中PD-L1阳性表达率比较，差异均无统计学意义（P＞0.05）。组织学分级为Ⅲ级、TNM分期为Ⅲ期、肿瘤直径＞2 cm、有淋巴结转移乳腺癌患者乳腺癌组织中PD-L1阳性表达率分别高于组织学分级为Ⅰ～Ⅱ级、TNM分期为Ⅰ～Ⅱ期、肿瘤直径≤2 cm、无淋巴结转移的乳腺癌患者，差异均有统计学意义（P＜0.05）。（表1）

表1 不同临床特征乳腺癌患者乳腺癌组织中PD-L1表达情况的比较

2.3 乳腺癌患者乳腺癌组织中PD-L1表达情况影响因素的多因素分析

多因素分析结果显示，组织学分级为Ⅲ级、TNM分期为Ⅲ期、有淋巴结转移均是乳腺癌患者乳腺癌组织中PD-L1阳性表达的独立危险因素（P＜0.05）。（表2）

表2 乳腺癌患者乳腺癌组织中PD-L1表达情况影响因素的多因素分析

3 讨论

乳腺癌是女性发病率最高的恶性肿瘤，其病死率也较高。乳腺癌的发病与遗传因素密切相关[16-17]。乳腺癌的发病年龄主要集中于40～60岁，绝经期前后女性乳腺癌的发病率较高[18-19]。乳腺癌早期通常无明显临床表现，发展至中晚期常出现乳房持续性疼痛和淋巴结转移，对患者的生活质量和心理健康造成不良影响，而化疗对乳腺癌转移的控制效果欠佳，因此深入研究乳腺癌转移的相关机制对控制乳腺癌进展及开发高效新疗法至关重要[20]。研究指出乳腺癌具有免疫原性，T细胞中PD-L1通过抑制T细胞发挥免疫作用或诱导T细胞凋亡，从而引起免疫抑制，肿瘤细胞由于发生免疫逃逸可迅速增殖并发生转移，加速病情进展[21]。PD-L1来自CD28家族，通过在T细胞、自然杀伤（natural killer，NK）细胞表面表达，调节其生长和凋亡[22]。PD-L1高表达可能与乳腺癌转移和进展有关，现阶段PD-L1抑制剂已用于乳腺癌患者的临床治疗中。

本研究结果显示，PD-L1在乳腺癌患者乳腺癌组织中的阳性表达率明显高于癌旁组织（P＜0.01）。正常细胞生长和凋亡处于动态平衡，达到一定的分裂次数就会出现衰老和凋亡，但肿瘤细胞却可以无限制地复制、增殖、分化而不凋亡，主要原因是发生了免疫逃逸，即免疫反应被削弱，使免疫系统不能及时发现肿瘤细胞的异常增殖和分化，从而使肿瘤细胞迅速增殖和转移。PD-L1过表达能够促进免疫细胞凋亡，抑制免疫系统对肿瘤细胞的监视作用，促进肿瘤细胞增殖和分化，因此乳腺癌组织中PD-L1阳性表达率明显高于癌旁组织。

本研究结果显示，组织学分级为Ⅲ级、TNM分期为Ⅲ期、有淋巴结转移乳腺癌患者乳腺癌组织中PD-L1阳性表达率分别高于组织学分级为Ⅰ～Ⅱ级、TNM分期为Ⅰ～Ⅱ期、无淋巴结转移的乳腺癌患者，差异均有统计学意义（P＜0.05）。可能是因为PD-L1过表达使肿瘤细胞失去了免疫系统的调控，从而导致肿瘤细胞迅速增殖和分化，进而促进肿瘤进展和淋巴结转移。本研究中肿瘤直径＞2 cm乳腺癌患者乳腺癌组织中PD-L1阳性表达率高于肿瘤直径≤2 cm的患者，与王立东等[23]的研究结果一致。本研究结果还显示，乳腺癌患者乳腺癌组织中PD-L1阳性表达率与乳腺癌家族史无关，与既往研究显示乳腺癌具有遗传易感性的结论不一致，可能是因为本研究中具有乳腺癌家族史的患者比例较少[24]。多因素分析结果显示，组织学分级为Ⅲ级、TNM分期为Ⅲ期、有淋巴结转移均是乳腺癌患者乳腺癌组织中PD-L1阳性表达的独立危险因素（P＜0.05），与邱志敏[15]的研究结果相似，说明PD-L1表达情况与乳腺癌的发生发展有关。

综上所述，PD-L1在乳腺癌组织中高表达，且与乳腺癌患者的临床特征密切相关。