丹皮酚抑制磷脂酰肌醇激酶通路及血管内皮生长因子增强对卵巢癌细胞放疗敏感性研究

周海梅 赵娟红 张海艳

【关键词】卵巢癌;丹皮酚;放疗敏感性;磷脂酰肌醇激酶通路

【中图分类号】R711.75 【文献标识码】A 【文章编号】2026-5328（2022）03--01

卵巢癌是常见的妇科恶性肿瘤之一，死亡率及转移复发率较高。卵巢癌起病较为隐匿，大多数患者在确诊时已是晚期，此时手术治疗已难以彻底清除病灶，需要采取规范性放化疗。但临床研究[1]显示放化疗易出现耐药性，且接受规范性放化疗后患者仍有60%的复发风险，因此，需要寻求新的高效、耐敏性抗肿瘤药物进行治疗。丹皮酚属于中药牡丹皮的主要活性成分。药理学研究[2]表明，牡丹皮中药用成分具有解热、抗炎、镇痛及中枢抑制等作用。此外丹皮酚还具有较好的抗肿瘤活性。本研究将分析丹皮酚可通过抑制磷脂酰肌醇激酶（PI3K）通路及血管内皮生长因子（VEGF）增强对卵巢癌细胞放疗敏感性的作用与机制，现报告如下。

1材料与方法

1.1细胞及其培养

人卵巢癌细胞株SKOV3由中国科学院上海细胞库提供。培养条件：将SKOV3细胞培养于含10%的胎牛血清、链霉素及青霉素均为1×105U/L的RPMI-1640培养基中，于5% CO2、37 ℃的条件下培养。

1.2主要试剂及仪器

MTT试剂盒、RNA试剂盒及抗β-actin抗体和辣根过氧化物酶标记山羊抗小鼠IgG（H+L）抗体（Sigma公司）、小鼠抗人p-PI3K、PI3K、p-AKT和AKT抗体（Santa Cruz公司）、兔抗人VEGF一抗（Santa Cruz公司）、羊抗兔红外荧光二抗（武汉Boster生物工程有限公司）。

1.3方法

1.3.1分组及干预方法

取对数生长期SKOV3细胞接种于96孔板上，密度为3×108/孔，随机分为空白组、放疗组、放疗+丹皮酚组，每组5个复孔。于80%细胞贴壁生长时，空白组不予任何处理;放疗组予以直线加速器4 Gy X射线照射，源皮距设为80 cm，剂量率设为300 cGy/min;放疗+丹皮酚组予以终浓度30 μmol/L的丹皮酚干预24 h后，再进行4 Gy X射线照射。

1.3.2MTT法检测细胞存活率

分别于培养24、48、72 h时各组细胞每孔加入0.5%的MTT培养液20 μL，继续孵育4 h后，弃去原培养液，将150 μL的二甲基亚砜加入，震荡混匀至液体澄清，测定570 nm处的吸光度（A）值，计算细胞存活率。细胞存活率（%）=干预组A值/空白组A值×100%。

1.4统计学分析

使用SPSS21.0软件分析处理数据，计量资料以x±s表示，多样本计量资料比较以单因素方差分析进行，两两样本比较以LSD-t检验进行。P<0.05表示差异有统计学意义。

2结果

2.1各组细胞存活率比较

各组细胞存活率随时间延长而下降，差异有统计学意义（P<0.01）;与放疗组比较，放疗+丹皮酚组不同时刻存活率更低（P<0.05）。

2.2各组细胞凋亡情况比较

空白组、放疗组及放疗+丹皮酚组的凋亡率分别为（4.25±1.03）%、（19.45±3.24）%、（35.65±5.33）%，3组凋亡率比较，差异有统计学意义（F=55.524，P<0.001）;与空白组比较，放疗组及放疗+丹皮酚组凋亡率更高（t空白组VS放疗组=7.744，P<0.01;t空白组VS放疗组+丹皮酚组=10.018，P<0.01），与放疗组比较，放疗组+丹皮酚组细胞凋亡率更高（t=4.498，P<0.05）。

3讨论

卵巢癌发病率居于妇科恶性肿瘤第二位，美国国家综合癌症网将外科手术后进行化疗或手术风险较高患者直接化疗推荐为晚期卵巢癌的标准治疗方案[3]。但化疗后肿瘤多药耐药及其化疗后的不良反应仍是目前临床治疗上亟需解决的首要问题。癌细胞放疗抵抗的发生可能与多种分子调节机制相关，故了解卵巢癌放疗抵抗的分子机制变化，对于肿瘤放疗的分子靶向治疗研究具有积极意义。

综上所述，本研究丹皮酚对卵巢癌细胞具有较高的放射敏感性，主要机制可能与丹皮酚可抑制PI3K/AKT信号通路激活有关。

参考文献：

[1]  张蓓蕾， 李怡， 吴涛，等. 基于聚多巴胺纳米载体的卵巢癌放化疗协同治疗研究[J]. 现代妇产科进展， 2019， 28（12）：881-886.

[2]  刘阳欣， 赵锋， 康秉涛，等. 丹皮酚药理学研究进展[J]. 陕西中医， 2020， 41（4）：550-552.

[3] 乔恩奇， 陈道宝， 杨红健，等. miR-150基于PI3K/Akt信号通路调控乳腺癌细胞生物学特性的研究[J]. 中国妇幼保健， 2019， 34（16）：3805-3809.

（编辑 胡怀富）

基金项目：山东省医药卫生科技发展计划项目（2019WS143）

作者简介：周海梅，女，本科，副主任医师，赵娟红，女，硕士，副主任医师，研究方向：妇产科疾病诊治。