PD-L1在乳腺癌中表达及临床意义

张梅芳 吴东恩 胡蕾蕾 陈芷菲

【摘要】目的：探究乳腺癌患者PD-L1表达及临床意义。方法：选择在我院进行乳腺癌筛查的女性患者作为研究对象（时间2017年1月—2019年6月），原位癌15例、浸润癌35例、良性病变15例，对患者进行免疫组织化学染色，比较患者PD-L1阳性表达情况。结果：35例浸润癌患者PD-L1阳性表达率57.14%（20/35），高于15例原位癌患者PD-L1阳性表达率26.67%（4/15），差异显著（P<0.05）。15例良性病变者PD-L1阳性表达率为0.00%，与原位癌、浸润癌患者PD-L1阳性表达率相比较，差异均显著（P<0.05）。原位癌患者3内生存率86.67%（13/15）高于浸润癌患者57.14%（20/35），差异显著（P<0.05）。结论：PD-L1在不同类型乳腺癌中具有差异性的阳性表达，浸润型乳腺癌中阳性表达率较高，可以反映出癌细胞浸润程度，并且对乳腺癌患者治疗、预后起到辅助作用。

【关键词】乳腺癌；PD-L1；阳性表达率

PD-L1 expression in breast cancer and its clinical significance

ZHANG Meifang， WU Dongen， HU Leilei， CHEN Zhifei

Department of Pathology，Maternal and Child Health Hospital of Heyuan City， Heyuan， Guangdong 517000， China

【Abstract】Objective：To explore the expression and clinical significance of PD-L1 in breast cancer patients.Methods：Selected female patients undergoing breast cancer screening in our hospital as the research object （time from January 2017 to June 2019），15 cases of carcinoma in situ，35 cases of invasive carcinoma，and 15 cases of benign lesions.The patients were examined by immunohistochemical staining to compare the positive expression of PD-L1 in patients.Results：The positive expression rate of PD-L1 in 35 patients with invasive carcinoma was 57.14%（20/35），which was higher than 26.67%（4/15）in 15 patients with carcinoma in situ，the difference was significant（P<0.05）.The positive expression rate of PD-L1 in 15 patients with benign lesions was 0.00%，which was significantly different from that in patients with carcinoma in situ and invasive carcinoma，the difference was significant，P<0.05.The survival rate within 3-year in patients with carcinoma in situ was 86.67%（13/15），which was significantly higher than 57.14%（20/35） in patients with invasive carcinoma，the difference was significant（P<0.05）. Conclusion：PD-L1 has differential positive expression in different types of breast cancer.The positive expression rate is higher in invasive breast cancer，which can reflect the degree of cancer cell invasion and play an auxiliary role in the treatment and prognosis of breast cancer patients.

【Key Words】Breast cancer； PD-L1； Positive expression rate

“乳腺癌”多發于外上象限乳房，是由于乳腺上皮细胞增殖失控引起的恶变，在女性恶性肿瘤中发病率最高，病因尚未完全清楚，存在遗传风险。乳腺癌早期症状一般不明显，通常表现为乳房皮肤异常，如橘皮征、酒窝征等，伴随乳头溢液、乳房肿块等，非常容易被患者忽视，耽误疾病治疗[1]。有研究指出[2]，目前临床上在对乳腺癌患者进行治疗时，治疗方案的选择以及预后评估主要依靠乳腺癌分子分型，例如HER-2表达等。原位乳腺癌指的是癌细胞局限在上皮层内，没有对基底膜形成破坏，也没有侵入间质组织、真皮组织，未发生浸润或者远处转移。原位乳腺癌经过手术切除后可获得良好疗效，浸润型乳腺癌多见于40岁以上女性，通常是非特殊型浸润型导管癌，占比70%～80%，其余为浸润型小叶癌[3]。特殊性浸润型乳腺癌包括单纯小管癌、浸润型筛状癌、髓样癌、黏液癌。乳腺癌病因发病机制较为复杂，目前没有发现明确的致病因素，普遍认为遗传、生活方式、环境等因素共同作用是引起乳腺癌的主要原因[4]。浸润型乳腺癌由于癌细胞扩散并向其他部位形成浸润，治疗难度大，治疗效果往往不理想，预后较差。 HER-2等对乳腺癌的分型表达不够准确，在一定程度上会影响乳腺癌临床治疗效果。为此，为了提高乳腺癌整体治疗效果，需要找到一种可以准确分型与鉴别诊断的预测标志物，为乳腺癌临床治疗与预后评估提供更多帮助。PD-L1是一种肿瘤常见分子标志物，与TMB、MMR、MSI-H等有关系，需要在检查点进行免疫反应设计，对杀伤性T细胞进行抑制等，进行免疫反应调节。乳腺癌患者的癌细胞表明会出现PD-L1高表达，在遇到细胞毒性T淋巴细胞表面的PD-1接触时，由于免疫检查点抑制剂的使用解除了免疫系统抑制，对PD-L1进行准确识别，对于乳腺癌鉴别诊断有重要意义。本研究对2017年1月—2019年6月我院进行乳腺癌筛查的女性患者65例进行研究分析，均通过临床综合诊断确诊，探究乳腺癌患者PD-L1表达及临床意义，报道如下。

1.1 一般资料

选择2017年1月—2019年6月期间在我院进行乳腺癌筛查检查的女性患者作为研究对象，病例数65例，患者年龄26～64岁，平均年龄（46.35±2.12）岁。通过综合诊断后确诊：原位癌15例、浸润癌35例、良性病变15例。受检者临床资料完整，精神状况良好，未接受过靶向药物治疗。患者对本次研究知情并自愿参加，积极配合检查，病情稳定。排除妊娠期、哺乳期女性，精神疾病或认知障碍患者。

1.2 方法

对65例乳腺癌筛查检查患者进行PD-L1检测，使用Ventana Bench Mark XT型全自动免疫组化机（瑞士，罗氏）。所用试剂PD-L1（clone sp263）所用试剂PD-L1（clone sp263）。免疫组化染色试剂盒Ultra View Universal DAB Detection Kit（Ventana）购自罗氏诊断产品（上海）有限公司。检测方法为：严格参照全自动免疫组化机操作流程：（1）制作石蜡切片，厚度4～5μm，置于65℃烤片机中60min，粘贴标签后置于机器切片盘上；（2）DAB试剂盒、苏木精、返蓝液、一抗等试剂瓶依次放上检测试剂架前准备运行；（3）进行消化、抗体孵育、复染等染色处理，约4h完成；（4）使用含温和清洁剂的清水对切片进行冲洗，梯度乙醇脱水、二甲苯透明、中性树脂胶封固。

PD-L1阳性表达标准：在显微镜下对切片样本进行多个视野观察，观察显色细胞的比例以及染色深浅。其中显色细胞比例：5%占比以下记为0分，5%～25%占比记为1分，26%～50%占比记为2分，51%～75%占比记为3分，75%以上占比记为4分。染色深浅：未显色记为0分，浅黄色记为1分，棕色记为2分，深褐色记为3分。显色细胞占比得分×染色深浅得分>1，为阳性，反之，为阴性。

1.3 观察指标

比较原位乳腺癌、浸润型乳腺癌、良性病变PD-L1阳性表达率。

1.4 統计学处理

采用SPSS 22.0统计学软件进行数据分析。计数资料采用（%）表示，进行χ2检验，计量资料采用（χ±s）表示，进行t检验，P<0.05为差异具有统计学意义。

浸润型乳腺癌患者PD-L1阳性表达率57.14%，高于原位乳腺癌PD-L1阳性表达率26.67%和良性病变PD-L1阳性表达率0.00%，差异显著（P<0.05）；浸润型乳腺癌与原位乳腺癌PD-L1阳性表达率差异显著（P<0.05），见表1。

3.1 乳腺癌分型及临床治疗

乳腺癌作为女性癌症中发病率第一位的癌症类型，对女性身心健康均造成严重影响，且病死率高，危害大，早期诊断并接受规范治疗，对于病情发展控制以及预后改善有至关重要作用。原位癌与浸润癌均为乳腺癌的常见类型，但是两者的恶性程度不同，治疗方式也存在较大差异，对于原位癌而言，手术切除是目前比较理想的治疗方案，可以根治病灶，延长患者生存时间。而浸润癌由于对其他组织形成浸润，或者发生远端转移，手术切除乳腺的治疗效果有限，容易复发，整体疗效不理想，需要配合放化疗，或者靶向治疗，提高临床治疗效果。所以，对乳腺癌的具体分型与恶性程度进行准确鉴别诊断，对于疾病治疗与评估预后起到很大作用，需要找到一种有效、准确的方法，实现肿瘤标志物检测。

3.2 乳腺癌分型依据及PD-L1阳性表达意义

以往临床上广泛应用HER-2过表达型、LuminalA、LuminalB等进行乳腺癌分子分型，为乳腺癌治疗方案的选择提供依据，并有效评估预后效果。临床实践表明，原位癌患者经过手术切除或者其他联合治疗方案后，普遍可获得理想的治疗效果，但是对于浸润型乳腺癌的临床治疗，整体效果不够理想，且分型较为困难，容易出错。有研究指出，PD-L1作为免疫检查点抑制剂生物标志物，肿瘤细胞表明通常会出现高表达，对肿瘤细胞进行“伪装”，使得免疫系统无法准确识别并杀死肿瘤细胞，从而影响了肿瘤诊疗效果。而浸润型乳腺癌由于发生浸润情况，PD-L1阳性表达率高，为了提高治疗效果，需要使用PD-L1抑制剂，在乳腺癌免疫治疗中具有重要应用，可以将肿瘤细胞对免疫系统的抑制解除，使得免疫系统可以再识别肿瘤细胞，并将其杀死。

3.3 PD-L1在乳腺癌中表达及临床意义既往研究

赵戈昱[5]研究中指出，PD-1、PD-L1和CD47在非特殊型浸润性乳腺癌中具有明显的阳性表达，且有一定相关性。PD-1、PD-L1和CD47在非特殊型浸润性乳腺癌患者的癌组织及癌旁正常组织中出现阳性表达，与患者年龄、肿瘤大小、淋巴结转移、组织学分级以及乳腺癌癌症TNM分期具有相关性，不同类型乳腺癌与病程分期患者，患者PD-1、PD-L1和CD47阳性表达会有所差异。张宁宁[6]研究中表明，乳腺癌的PD-L1阳性表达率高，高于非三阴性乳腺癌，表明PD-L1在不同乳腺癌分型以及病理特征中阳性表达率有差异性，与本研究结果相近。

3.4 PD-L1意义及乳腺癌表达作用

PD-L1阳性表达率高与患者肿瘤细胞分子分型、阳性淋巴结个数与癌症分期具有相关性，可以为浸润性乳腺癌的治疗方案制定与调整，评估预后提供可靠预测标志物。PD-L1生物学意义为：PD-L1与PD-1之间具有相互作用，并利用对抗原呈递的阳性信号传导进行阻断，制定人体免疫监测。在对乳腺癌患者进行PD-L1检测时，需要将制动解除后获得正确表达。PD-L1的病理学意义为：在不同肿瘤类型中PD-L1的表达作用不确定，一般情况下可以对免疫检查点的抑制剂有效提示阳性表达，但是PD-L1阴性表达结果也不会完全将免疫检查点的抑制剂可能进行排除。而乳腺癌患者的临床治疗中，免疫治疗的作用很大，且临床应用广泛，特别是PD-L1单抗，取得理想的成效。一般情况下，对乳腺癌患者进行PD-L1检测，阳性患者可以在阿替利珠单抗与白蛋白紫杉醇联合治疗中获取好的临床疗效。而PD-L1检测结果阴性患者则无法获益。为此，对乳腺癌患者进行PD-L1检测时，不仅可以对患者的疾病患病情况以及病情进展情况进行评估与预测，作为诊断乳腺癌的一项依据与参考标准。而且可以为乳腺癌患者的治疗提供新的方向，阳性表达者进行免疫治疗的效果好于阴性表达者。所以，PD-L1检测在乳腺癌患者的疾病诊断与治疗方案设计中均有一定作用，需要引起重视与注意，应用价值高。

3.5 研究结果

本研究中浸润型乳腺癌PD-L1阳性表达率明显高于原位乳腺癌与良性病变者，原位乳腺癌PD-L1阳性表达率明显高于良性病变者，差异均显著。分析原因为：PD-L1在乳腺癌患者的肿瘤细胞膜中出现阳性表达，也会在淋巴细胞中出现阳性表达、在单核细胞胞质与胞膜中出现阳性表达，可以看到明显的棕黄色颗粒。浸润型乳腺癌的PD-L1的阳性表达率高于原位乳腺癌与良性病变，说明PD-L1的阳性表达率会随着乳腺癌病灶的转移、病情进展而提高。PD-L1的表达可以在肿瘤细胞中和肿瘤浸润的淋巴细胞中，使得乳腺癌患者淋巴细胞免疫功能下降，并影响分泌功能，是乳腺癌疾病进展的重要促进因素之一，参与乳腺癌的发展过程。PD-L1的阳性表达受到乳腺癌的临床分期与组织学分级影响，会出现不同的阳性表达概率。PD-L1可以在淋巴细胞表面与淋巴PD-1进行互相影响，发生作用后对人体肿瘤细胞免疫應答进行削弱，使得肿瘤细胞出现免疫逃逸，从而发生乳腺癌疾病进展，不容易被诊断出来。乳腺癌患者在肿瘤出现后，以及肿瘤进展过程中，均会出现免疫失调问题，普遍存在。而PD-L1作为一种免疫卡控的重要点位，通过与T淋巴细胞表面受体进行结合，对肿瘤患者的免疫抑制应答翻译起到直接诱导，介导了肿瘤细胞的逃逸，引起肿瘤侵袭与转移，并提示乳腺癌患者复发风险级别高，需要引起足够重视。

本研究结果显示：浸润型乳腺癌患者PD-L1阳性表达率57.14%，高于原位乳腺癌PD-L1阳性表达率26.67%和良性病变PD-L1阳性表达率0.00%，差异显著（P<0.05）；浸润型乳腺癌与原位乳腺癌PD-L1阳性表达率差异显著（P<0.05）。说明PD-L1在乳腺癌患者中具有良好表达，较高表达，癌症进展与分级会影响PD-L1阳性表达率，可以作为乳腺癌临床诊断与评估病情进展的重要标准。

综上所述，PD-L1在乳腺癌不同类型与病理特征中表达差异性显著，对于乳腺癌治疗与预后评估有很好的辅助与预测作用。

参考文献

[1] 张佳琪.错配修复缺陷、PD-1和PD-L1在乳腺癌组织中的表达及相关性研究[D].太原：山西医科大学，2021.

[2] 曾道林.乳腺癌原发灶与术后复发转移灶PD-L1表达差异及对预后影响[D].南昌：南昌大学，2020.

[3] 金才权.PD-L1表达和外周血NLR与乳腺癌预后相关性研究[D].延吉：延边大学，2020.

[4] 王心然，张宁宁，吕菲，等.乳腺癌原发灶与转移灶间质浸润免疫细胞PD-L1的表达异质性分析[J].中华病理学杂志，2020，49（5）：430-434.

[5] 赵戈昱.PD-1、PD-L1和CD47在非特殊型浸润性乳腺癌中的表达及相关性研究[D].呼和浩特：内蒙古医科大学，2020.

[6] 张宁宁.乳腺癌间质浸润免疫细胞PD-L1（Ventana SP142）表达的临床病理研究[D].石家庄：河北医科大学，2020.