软枣猕猴桃的茎段芽增殖培养基的筛选

杨小艳，韩世明，郭雪艳，吴 梅，方玉梅，王月霞

（六盘水市师范学院生物科学与技术学院，贵州 六盘水 553004）

软枣猕猴桃（Actinidia arguta）属于猕猴桃科（Actirlidia‐ceae）猕猴桃属（Actinidia）多年生藤本落叶植物，又名软枣子，猴桃梨，藤瓜等。世界上猕猴桃属植物有54 个种，21 个变种，我国就有52 个种。猕猴桃在中国分布广泛，其中软枣猕猴桃是猕猴桃属中在中国分布最广泛的野生果树之一，主要分布在中国的华北、东北、西北及长江流域，尤其以东三省的黑龙江、吉林和辽宁等存量资源最为丰富。中国是世界上软枣猕猴桃的主产区，世界上软枣猕猴桃主要栽培品种有74个，有11 个分布在中国[1-2]。软枣猕猴桃的枝条多攀爬在树枝或者树干上，叶柄呈红色，叶为互生，叶片、叶柄和茎部都没有毛，软枣猕猴桃的花为白色，且花序较小，有淡淡的香气，果实呈绿色或黄绿色，果实为浆果，果实的果皮光滑无斑点，果实柔软多汁、味道鲜美可口，果实像苹果，虽然果实很小但营养丰富，富含维生素C，具有较的高经济价值、营养价值，良好的医疗保健效果[3]受到广大人民群众的青睐。

1 软枣猕猴桃的应用领域及研究概况

软枣猕猴桃的栽种主要分布在中国西北、长江流域、东北和华北等地区，在世界上软枣猕猴桃的主要栽培中，软枣猕猴桃的品种共有74 个，中国先后出现了“魅绿”“丰绿”[4-5]等。2015 年赵芮、赵春莉、安佰义等科学家研究发现软枣猕猴桃芽增殖的最佳培养基为：MS+2.0 mg/L 6-BA+0.2 mg/L IBA，软枣猕猴桃果实成熟收获后贮藏保鲜和生理生化方面的研究较多，加大软枣猕猴桃种质资源系统评价，为软枣猕猴桃种质资源系统评价体系得构成，改善软枣猕猴桃栽培管理方面提供科学的依据。为软枣猕猴桃育种提供优质苗木和有抗性的砧木，可培育出高产、优质的猕猴桃新品种[6-7]。软枣猕猴有丰富的维生素、多糖类、黄酮类、酚类、萜类等多种活性物质，维生素C 含量丰富，软枣猕猴桃中多糖对预防心血管疾病有特殊的治疗效果，果实中的氨基酸不仅具降血脂和血糖的作用，还可提高人体免疫力[8-12]。还可加工成各类果干、零食。经过试验研究得到软枣猕猴桃饮料的最佳配方。谢宗万的《全国中草药汇编》中提到根有活血消肿，清热解毒、祛风利湿等作用，陈藏器的《本草拾遗》果实可以解热去烦、调中理气、生津润燥。因此被称为药用及食疗价值均高于常规水果，还有“人间仙果”的美称[10-14]。

本试验采用六盘水市水城区米箩镇的一年生的软枣猕猴桃带腋芽茎段作为试验材料，以MS 培养基作为基础培养基，在培养基中加入不同浓度的激素6-BA 和IBA 组合，通过植物组织培养可对其进行快速繁殖，在组培室里培养不受生长季节限制，能够大批量繁育种苗，保证了所育苗木的纯度，具有质量高、成本低、占地小等优势。在组织培养脱分化的过程中选择软枣猕猴桃病毒害少的部位进行脱分化，可以获得无病毒植株，用于杂交育种，得到的软枣猕猴桃植株产出的水果口感更佳，经济价值更高。

2 材料与方法

采用一年生软枣猕猴桃带腋芽的嫩茎段作为接种材料，早春季节从母株上采取侧枝，在晴天的中午剪20～30 cm长的枝条，要剪生长强壮、无虫害、无病菌的幼嫩枝条。

3 软枣猕猴桃外植体的消毒

将软枣猕猴桃外植体用水清洗净，剪去叶子和老的茎段。用剪刀将外植体剪切为长度1.5～2.5 cm 的段，用洗洁精浸泡30 min，之后用细流水冲洗2 h。把无菌水、装着滤纸的培养皿、接种工具、升汞、酒精灯、打火机、烧杯、培养基等放入超净工作台，杀菌30 min，杀菌时不开吹风，用75%酒精棉擦洗戴着无菌手套的双手和盛有外植体的容器壁进行消毒，将容器放进超净工作台，用75%的乙醇浸泡30 s，然后用无菌水清洗4 次后，用0.15%的氯化汞溶液浸泡7 min。再用无菌水清洗6～7 次，最后用镊子把接种的外植体放在放有无菌纸的培养皿中，用无菌纸把外植体上的水分吸干，消毒完成。将消毒的外植体每瓶接种2～4 个，接种完成之后编号、记录等，长出芽后，用幼芽转接。

4 培养基中不同浓度的激素组合对芽增殖的影响试验

4.1 诱导芽增殖的组织培养基

试验参考赵芮、赵春莉、安佰义等软枣猕猴桃离体快速繁殖技术[6]和邓践[5]的试验研究，并结合本实验室研究的实际情况进行设置。诱导芽增殖的组织培养基见表1。

表1中所有的培养基pH 为5.8；所用的培养基为MS培养基，MS 培养基加入的蔗糖的含量为30 g/L，R1 到R25 号培养基中加入琼脂7.2 g/L。用蒸馏水配制，贴好标签。配置好的培养基放在121℃下高压蒸汽灭菌锅内灭菌15 min，后移至超净工作台待杀菌冷却，将消毒处理好的腋芽嫩茎切成大小为1.5～2.5 cm，分别转接到上述培养基中，每种培养基5瓶，每瓶接种2～4个外植体。以MS基本培养基作为对照，接种完成后放入培养架培养，培养条件为3 000 lx 光照强度，温度25℃、光周期14 h/10 h（光照/黑暗），定期记录数据，筛选出最佳培养基。

表1 诱导芽增殖的组织培养基Tab.1 The tissue culture medium for inducing bud proliferation

4.2 试验数据处理及相关数据计算公式

5 结果

根据添加的6-BA 和IBA 的含量不同，对软枣猕猴桃带腋芽嫩茎段组织培养诱导芽增殖的生长情况进行观察并记录数据，计算增殖系数，见表2。

根据表2 的数据可以看出R16、R18、R19、R20 号培养基的芽增殖系数高，且呈现先上升后下降的趋势，其中R19 号培养基的芽长势好，芽多，芽较高，叶片正常，芽增殖系数最高为3.95。结合表2 的数据分析筛选出最适合软枣猕猴桃茎段芽增殖培养基为R19 号培养基，也是最适合的培养基配方。

表2 不同质量浓度的6-BA 和IBA 对丛生芽增殖的形成情况Tab.2 The effects of different mass concentrations of 6-BA and IBA on the formation of cluster bud proliferation

6 讨论

应用传统的繁殖培育技术培育软枣猕猴桃，难以在短时间内培育出经济效益高的植株，且受到温度影响。此外，传统的繁殖培育技术培育软枣猕猴桃常会携带的一些病菌，会给猕猴桃产业带来一些灾害。采用外植体培养技术获得的组培苗可以保持母本的优良性状，栽培出的水果口感更佳，经济价值更高。

本实验室采用组织培养技术，用不同浓度的诱导芽增殖培养基，均得到了预期的结果，采用组培技术得到的软枣猕猴桃经济价值更高。在组培室里培养不受生长季节限制，能大批量繁育种苗，保证了所育苗木的纯度，具质量高、成本低、占地小等优势。本试验的成果，可为软枣猕猴桃种质资源系统评价体系的构成，改善软枣猕猴桃栽培管理方面提供科学依据。