化妆品中金黄色葡萄球菌能力验证结果分析与讨论

胡同静 严婷 刘敏 易云蕾

【摘要】目的：通过参加外部组织的能力验证达到考核内部技术人员微生物检测能力，增强实验室综合竞争力。方法：2021年，本实验室参加了由大连中食国实检测技术有限公司组织和负责实施的《CFAPA-1203化妆品中金黄色葡萄球菌的测定验证计划》。检测依据为《化妆品安全技术规范》（2015年版）。结果：样品169的鉴定结果为金黄色葡萄球菌阴性;样品421的鉴定结果为金黄色葡萄球菌阴性;样品579的鉴定结果为金黄色葡萄球菌阳性。结论：本次能力验证活动的3个样品检验均取得令人满意的结果，同时达到了实验室内部质控、人员考核、水平验证的预期目的，也为应对日常检测工作积累了宝贵的经验。

【关键词】能力验证;金黄色葡萄球菌;化妆品;微生物检验

【DOI编码】10.3969/j.issn.1674-4977.2022.03.019

Analysis and Discussion on the Validation Results of Staphylococcus Aureus in Cosmetics

HU Tong-jing，YAN Ting，LIU Min，YI Yun-lei

（Nanjing Product Quality Supervision and Inspection Institute，Nanjing 210019，China）

Abstract：Objective：through participating in the ability verification of external organizations，the laboratory achieves the expectation of assessing the microbial detection ability of internal technicians and enhancing the comprehensive competitiveness of the laboratory. Methods：in 2021，our laboratory participated in the cfapa-1203 determination and validation plan for Staphylococcus aureus in cosmetics organized and implemented by Dalian ZhongshiGuoshi Detection Technology Co.，Ltd. The test basis is the Technical specification for safety of cosmetics（2015 Edition）. Results：the identification result of sample 169 was negative for Staphylococcus aureus;the identification result of sample 421 was negative for Staphylococcus aureus;the identification result of sample 579 was positive for Staphylococcus aureus. Conclusion：the three results of this capability verification activity have achieved satisfactory results，achieved the expected purpose of laboratory internal quality control，personnel assessment and level verification，and accumulated valuable experience for daily testing.

Key words：capability verification;Staphylococcus aureus;cosmetics;microbiological examination

金黄色葡萄球菌是自然界中广泛存在的致病菌。革兰氏阳性球菌，是微球菌科葡萄球菌属的一个下属种[1]，当空气中氧分含量降低时易产生肠毒素，可能引起食物中毒的症状[2]。金黄色葡萄球菌也是常见的病原菌，可能引起化脓性炎症。如果人發生感染，病原菌进入血液可造成肺炎、心包炎等内脏器官感染，严重的可引起败血症、脓毒血症等全身感染[3]。

人们日常生活离不开化妆品，而化妆品又常与人体皮肤接触，如果化妆品中检出不明微生物，则存在引发皮肤发炎、过敏的风险。部分化妆品本身含水量高、营养丰富，容易发生微生物污染。被微生物污染的化妆品不仅会引起产品质量下降造成经济损失，也可能会对消费者的健康造成威胁。《化妆品安全技术规范》（2015年版）中明确规定：化妆品中不得检出金黄色葡萄球菌[4]。对化妆品中微生物的检测是保障化妆品卫生安全的一个重要环节[5]。

能力验证是一个实验室技术能力的重要考核指标，与现场评审考核共同构成了能力评价体系[6-7]。通过能力验证可以加强本实验室的微生物检测能力，提高检验人员的业务水平，也是实验室内部质量控制的重要补充[8]。2021年，本实验室参加了由大连中食国实检测技术有限公司组织和负责实施的《CFAPA-1203化妆品中金黄色葡萄球菌的测定验证计划》，通过对结果的评价考核本实验室微生物检测能力和检验人员业务能力，完成内部质控。

1材料与方法

能力验证等同于日常检测工作，每一步操作都应该在严格遵循能力验证作业指导书和相应国标要求的基础上，结合本实验室质量手册、内部SOP要求以及实验人员相关工作经验，仔细把控每一步操作细节来完成本次能力验证，以期达到满意结果和内部质量控制的要求。

1.1检测依据

本次能力验证全部依据《化妆品安全技术规范》（2015年版）中给出的金黄色葡萄球菌检验方法，结合本次《CFAPA- 1203化妆品中金黄色葡萄球菌的测定能力验证计划参试指导书》进行。

1.2检测材料

1.2.1培养基及试剂

试验中使用SCDLP液体培养基、甘露醇发酵培养基、Baird-Parker平板、营养肉汤培养基均购自北京陆桥微生物制剂有限公司;科马嘉金黄色葡萄球菌显色琼脂购自法国科马嘉，以上均按产品标签配制后使用;冻干血浆、血琼脂平板均购自北京陆桥技术股份有限公司，按照使用说明直接使用成品;革兰氏阳性菌GP鉴定卡（法国梅里埃生物公司）。

1.2.2标准菌株

按照国标要求，试验中使用金黄色葡萄球菌ATCC6538 作为阳性对照，表皮葡萄球菌CMCC（B）26069作为阴性对照。

1.2.3仪器设备

电子天平（上海衡际科学仪器有限公司）;生化培养箱（上海博讯实业有限公司医疗设备厂）;vitek2全自动微生物鉴定系统（法国梅里埃生物公司）。

1.3待测样品

待测样品为真空包装，均保存在西林瓶内冷链运输至实验室，共3件样品，样品编号分别为：样品169、样品421、样品579，由大连中食国实检测技术有限公司提供。

1.4检测过程

1.4.1样品处理

取出待测样品，在无菌条件下开启样品西林瓶，然后立即加入4 mL无菌生理盐水进行溶解。待瓶内样品溶解后，将其吸出再放入无菌瓶中，接着反复用余下的生理盐水清洗西林瓶内壁，回收清洗液放入上述无菌瓶中，最后得到生理盐水稀释液共计40 mL，此溶液为待测样品原液。用无菌吸管吸取10 mL待测原液加入到90 mL灭菌生理盐水中混匀，制成作业指导书要求的1：10检液。

1.4.2增菌培养

使用无菌移液管吸取1：10稀释的检液10 mL接种到90 mL 灭菌SCDLP液体培养基中，置于（36±1）℃培养（24±2）h进行增菌培养。

1.4.3分离培养

从上述增菌培养液中挑取培养物，通过划线法接种到Baird-Parker平板培养基或血琼脂平板上，置于（36±1）℃培养48 h后观察并描述菌落形态。

1.4.4鉴定试验

挑取单个可疑菌落接种到血琼脂平板上，置于（36±1）℃培养（24±2）h。挑取分纯后的菌落，分别进行染色镜检、甘露醇发酵试验、血浆凝固酶试验，对其进行筛选验证。

1）染色镜检：挑取分纯后的菌落涂片，进行革兰氏染色后镜检。金黄色葡萄球菌为典型的革兰氏阳性菌株，一般情况下其形态应排列成葡萄状，无芽抱、无荚膜，菌体相对较小，直径约为0.5～1 μm。

2）甘露醇发酵试验：挑取分纯后的菌落接种到甘露醇发酵培养基上，在培养基液面上加入高度约2～3 mm的灭菌液体石蜡。置于（36±1）℃培养（24±2）h后，一般情况下金黄色葡萄球菌应能发酵甘露醇产酸，出现变黄的现象。

3）血浆凝固酶试验：根据冻干血浆使用说明先用0.5 mL生理盐水溶解均匀，加入新鲜的可疑菌营养肉汤培养物0.5 mL，混匀，（36±1）℃恒温箱培养，每半小时观察一次，6h之内出现凝块则判定为阳性结果。同时将已知血浆凝固酶阳性、阴性菌株的肉汤培养物及肉汤培养基视作阳性对照、阴性对照和空白对照。

2能力验证结果

若在上述选择培养基出现符合形态的菌落生长，后经过革兰氏染色镜检证明为革兰氏阳性葡萄球菌，同时能发酵甘露醇产酸、血浆凝固酶试验阳性，可报告为检出金黄色葡萄球菌。本次能力验证试验的结果见表1、表2、表3。

3討论与分析

本次能力验证主要依据《化妆品安全技术规范》（2015年版）中的金黄色葡萄球菌检验方法，结合本次《CFAPA-1203化妆品中金黄色葡萄球菌的测定能力验证计划》参试指导书进行增菌培养、划线分离以及后续鉴定等检测步骤，最终给出了样品169阴性、样品421阴性、样品579阳性的结果。随后大连中食国实检测技术有限公司给出的能力验证结果评价均为满意。

本次能力验证本质为金黄色葡萄球菌定性试验，故在本次试验过程中，参考如GB 4789.10—2016《食品安全国家标准食品微生物学检验金黄色葡萄球菌检验》等标准信息，结合实验员经验，使用科马嘉金黄色葡萄球菌显色培养基作为补充验证的依据，有效避免了添加在样品内的干扰菌对试验结果的影响，优化了检测流程，加快了实验进程。在本次试验过程中，使用了成品血琼脂培养基、冻干血浆试剂等商业化成品培养基。成品培养基的出现方便了日常检测工作，把实验人员从繁琐的试剂配置工作中解放出来。专业化生物制剂公司生产的产品大多是有质量保证的，但仍需要按照实验室内部的培养基比对试验验证合格后方可投入使用。

在微生物检测工作中，每个环节的把控都关系到检测工作的质量，因此，对各个工作环节始终都要做好质量控制工作，而能力验证就是质量控制的重要一环。定期参加能力验证并通过考核也有助于提升客户对实验室出具准确可靠检测结果的信心，有利于实验室的发展。

4结论

本次能力验证活动的3个结果均取得了满意的结果，同时达到了实验室内部质控、人员考核、水平验证的预期目的，也为应对日常检测工作积累了宝贵的经验。

【参考文献】

[1]R·E·布坎南、N·E·吉本斯.伯杰细菌鉴定手册[M].北京：科学出版社，1984.

[2]蒋原.食源性病原微生物检测技术图谱[M].北京：科学出版社，2019.

[3]向春艳.化妆品中金黄色葡萄球菌检测能力验证方法与结果分析[J].检验检疫学刊，2020，30（2）：17-20.

[4]化妆品安全技术规范（2015年版）[S].

[5]王小燕.微生物检验在化妆品检验中的应用[J].生物化工，2019，5⑵：167-168.

[6]合格评定能力验证的通用要求：GB/T27043—2012[S].

[7]能力验证提供者认可准则：CNAS-CL03[S].

[8]舒鹃娟，张伟冲，袁峰，等.食品微生物的检测能力验证[J].上海预防医学，2014，26（3）：154-157.