三聚氰胺前处理优化的检测方法

钱成林 吴思 郑旭涛 董成虎 陈权翠

摘 要：本文主要阐述了乳及乳制品中三聚氰胺前处理的方法，在《原料乳与乳制品中三聚氰胺检测方法》（GB/T 22388—2008）的基礎之上进行优化改进，优化前处理步骤，将先过滤再定容改变为先定容再过滤，加标回收率得到提高，准确性更强。

关键词：乳及乳制品;优化;回收率

An Optimized Detection Method for Melamine Pretreatment

QIAN Chenglin1， WU Si2， ZHENG Xutao2， DONG Chenghu1， CHEN Quancui2*

（1.New Hope Dairy Co.， Ltd.， Food Safety Supervision Department， Chengdu 610000， China; 2.Centre Testing International Group Co.， Ltd.， Yunnan Hua Ce Testing International Co.， Ltd.， Kunming 650000， China）

Abstract： The pretreatment method of melamine in milk and dairy products was introduced. Based on the method of detection of melamine in raw milk and dairy products of GB/T 22388—2008， the pretreatment steps were optimized. The rate of recovery is improved and the accuracy is stronger by changing the first filtration and then the fixed volume into the first fixed volume and then filtering.

Keywords： milk and dairy products; optimize; percent recovery

三聚氰胺（C3H6N6），俗称密胺、蛋白精，IUPAC命名为1，3，5-三嗪-2，4，6-三氨基，是一种三嗪类含氮杂环有机化合物，被用作化工原料。它是白色单斜晶体，几乎无味，微溶于水（3.1 g/L常温），可溶于甲醇、甲醛、乙酸、热乙二醇、甘油及吡啶等，不溶于丙酮、醚类，对身体有害，不可用于食品加工或食品添加物。临床研究发现，三聚氰胺可能会在人体泌尿系统如膀胱和肾脏形成泥沙样结晶或结石[1]。

中国国家食品质量监督检测中心在2008年9月13日指出，三聚氰胺属于化工原料，不允许添加到食品中，故暂未设定像农药般的残留标准限制。除了人为添加外，三聚氰胺类物质还可能从环境、食品包装材料等途径进入到食品，且其含量极低。由于动物源食品基质背景复杂、所需前处理过程烦琐费时，因此开发复杂食品基质中痕量三聚氰胺类物质快速、高灵敏分析检测方法对保障我国食品安全具有重要的意义[2]。2008年10月8日，原卫生部、工业和信息化部、农业部、国家工商行政管理总局和国家质量监督检验检疫总局联合发布公告，制定三聚氰胺在乳与乳制品中的临时管理值。

婴幼儿配方乳粉中三聚氰胺的限量值为1 mg/kg，高于1 mg/kg的产品一律不得销售。液态奶（包括原料乳）、奶粉、其他配方乳粉中三聚氰胺的限量值为2.5 mg/kg，高于2.5 mg/kg的产品一律不得销售。目前使用的检测方法有GB/T 22388—2008原料乳及乳制品中三聚氰胺检测第一法高效液相色谱法[3]和GB/T 22400—2008原料乳中三聚氰胺检测方法[4]，按照检测方法检测结果有所偏低，方法检出限为2.0 mg/kg，加标浓度为2～10 mg/kg，回收率在80%～110%，不能满足《合格评定 化学分析方法确认和认证指南》（GB/T 27417—2017）关于加标回收率的要求，在目前的方法上进行改进，检测结果更加准确可靠。加标回收率都在90%～110%，满足要求[5]。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

牛奶样品，工厂奶罐检测合格牛奶;乙腈（色谱纯，生产批号：148405，德国默克）;柠檬酸（分析纯，生产批号：20140201，重庆川东化工有限公司）;辛烷磺酸钠（分析纯，生产批号：20160602，国药集团化学试剂有限公司）;三氯乙酸（分析纯，生产批号：20130124，广东光华科技股份有限公司）;甲醇（色谱纯，生产批号：1847607，德国默克）;超纯水，实验室自制。

离子对缓冲试剂：使用ME204E电子天平准确称取2.10 g柠檬酸和2.16 g辛烷磺酸钠，加入约980 mL超纯水，调节pH值至3.0，用水定容至1 000 mL。使用0.45 μm水相滤膜过滤后进行使用。

1.2 仪器与设备

安捷伦高效液相色谱仪1260（美国Aligent，紫外检测器VWD，检测波长240 nm，检测温度40 ℃）;ME204E电子天平，精确度0.000 1 g，梅特勒托利多。

1.3 实验方法

1.3.1 操作步骤

使用1 000 mg/L的标准品进行加标至1.25 mg/L、2.50 mg/L、10.00 mg/L。分别18次准确称取（2.000±0.010）g制备好的加标样品至50 mL离心管中，准确移取18 mL浓度为2%的三氯乙酸溶液和5 mL乙腈溶液至每只离心管中，涡旋混匀1 min，超声提取10 min，振荡提10 min，6 000 r/min离心10 min。

用滤纸进行过滤后作为净化液，过滤溶液时间从30 min，缩短到5 min左右。再用3 mL甲醇和5 mL水先后过活化好的阳离子交换柱，将净化液5 mL加5 mL水混匀后过柱，继续用3 mL水和3 mL甲醇先后过柱，加入6 mL 5%氨化甲醇溶液洗脱，将洗脱液置于50 ℃氮吹至干，取出比色管加入1 mL流动相溶液用0.45 μm滤膜过滤到进样瓶中。没有加标的样品依据上述方法进行检测。

1.3.2 进样条件

色谱柱C18（150 mm×4.6 mm×5 μm）;波長：紫外240 nm;柱温：40 ℃;进样体积：20 μL;流速：1 mL/min;洗脱方式：等度洗脱。

2 结果与分析

2.1 标准曲线

依据标准曲线浓度及峰面积结果，绘制标准曲线，线性关系y=ax+b，其中a=82.355，b=-3.195 7，

线性相关系数R2=0.999 7，可以满足≥0.999以上的要求，具体见图1。

2.2 加标回收率

依据回收率标准要求（表1），分别加标至

1.25 mg/L、2.50 mg/L、10.00 mg/L，并进行平行测定6次，加标回收率在95.1%～108.4%，其中加标至1.25 mg/L的样品加标回收率在98.5%～108.4%，加标浓度至2.50 mg/L的样品加标回收率为98.8%～100.9%，加标浓度至10.00 mg/L的样品加标回收率在95.1%～98.5%，都能满足加标回收率在90%～110%的要求。加标回收率见表2。

2.3 精密度

计算1.25 mg/L、2.50 mg/L、10.00 mg/L的加标检测结果，RSD值都低于5%，满足RSD的要求，见表3。

2.4 方法检出限和定量限

按照标准方法进行加标实验，查看安捷伦1260高效液相色谱仪18次检测结果的信噪比，3倍的信噪比作为方法检出限，10倍的信噪比作为方法定量限。由于检测18个检测结果计算的方法检出限和定量限都不一致，采用18次计算结果的平均值作为方法检出限和定量限。方法检出限为0.08 mg/L，方法定量限为0.28 mg/L，见表4。

2.5 优化方法与国标方法对比

优化方法与国标方法对比结果见表5，优化方法检出限更低，定容时间短，加标回收率符合要求。

3 结论

结果表明，更改前处理方法后，过滤定容时间从原来30 min缩短至5 min，定容时间缩短至原来的1/6;加标回收率有明显改善，从80%～110%上升至95.1%～108.4%，改善比较明显，检测准确性提高;精密度实验方面，加标样品检测偏差RSD值在5%以内;方法检出限为0.08 mg/kg，方法定量限为0.28 mg/kg，与原有标准的定量限2.0 mg/kg相比降低显著，低浓度样品更加容易检出。所以更改定容方式后检测结果更加高效、准确、可靠。

参考文献

[1]杨光，丁飞.三聚氰胺的检测方法探讨[J].河南科技，2010（11）：71-72.

[2]李雪刚.动物源食品中三聚氰胺类物质高灵敏检测方法研究[D].武汉：华中农业大学，2012.

[3]中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局.原料乳与乳制品中三聚氰胺检测方法：GB/T 22388—2008[S].北京：中国标准出版社，2008.

[4]中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局，中国国家标准化管理委员会.原料乳中三聚氰胺快速检测 液相色谱法：GB/T 22400—2008[S].北京：中国标准出版社，2008.

[5]中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局，中国国家标准化管理委员会.合格评定 化学分析方法确认和验证指南：GB/T 27417—2017[S].北京：中国标准出版社，2017.

基金项目：乳制品及牛肉制品精深加工关键技术研究与产业化应用示范（2020YFN0153）。

通信作者：陈权翠（1992—），女，云南曲靖人，本科，助理工程师。研究方向：食品安全。E-mail：1249785957@qq.com。