Musashi 1、VEGF-A表达与结肠癌组织中MVD表达的关系

郭 帅

结肠癌是临床上较为常见消化系统恶性肿瘤之一，目前随着人们饮食机构的改变，长期、大量的高蛋白摄入，导致我国结肠癌的发病率越来越高[1]。临床上的观察研究发现，肿瘤调控相关蛋白的改变，对结肠癌的病情进展过程起着一定的作用[2]。Musashi 1蛋白作为一种肿瘤干细胞调控因子，对维持癌细胞核DNA的分裂速度，增加癌细胞的自我增殖效能起作用，最终促进恶性肿瘤细胞的异常发生过程[3]；血管内皮细胞生长因子-A(VEGF-A)是血管内皮调控相关因子，其可以通过诱导新生肿瘤血管的形成，来帮助提高肿瘤病灶组织的血流灌注水平，促进结肠癌的病情进展[4]。有很多研究对VEGF在结肠癌患者中的表达情况进行分析发现，VEGF蛋白的表达阳性率在结肠癌患者中会明显上升[5]，但关于的Musashi 1分析缺不足。为了揭示Musashi 1、VEGF-A的表达与结肠癌患者的病情关系，本次研究收集了我院病理科在2018年1月～2020年1月期间的88例结肠癌组织，对Musashi 1、VEGF-A的表达情况进行探讨，并报告如下。

1 材料与方法

1.1 对象

选取2018年1月～2020年1月我院病理科收集的88例结肠癌组织标本及符合要求的44例癌旁组织标本。

1.2 相关标准

诊断标准：符合中华医学会制定的关于结肠癌的诊断标准[6]。纳入标准：①所有患者均在我院接受手术，经病理学检查证实病情；②结肠癌患者无放化疗、免疫学治疗史；③纳入标本患者的年龄、性别、病理学结果等资料完整；④癌旁组织为距离肿瘤边缘5 cm以内的正常结肠组织；⑤本研究符合《赫尔辛基宣言》中的医学伦理要求标准。排除标准：①其他部位肿瘤；②合并肠道结核等其他类型的结肠器质性病变；③资料缺失，无法进行统计分析。

88例结肠癌患者的基线资料情况，男性49例、女性39例；年龄38～79岁，平均(57.0±11.4)岁；依据TNM分期标准：Ⅰ期20例、Ⅱ期33例、Ⅲ期28例、Ⅳ期7例；肿瘤最大径≥5 cm 51例、<5 cm 37例；肿瘤组织学分化：低分化30例、中分化33例、高分化25例；发生淋巴结转移50例；肿瘤浸润深度达到T1～T2 43例、T3～T4 45例。

1.3 方法

1.3.1 免疫组化染色 采用免疫组化进行Musashi 1、VEGF-A蛋白的检测：采用石蜡切片，3%H2O2孵育20 min，然后采用蛋白封闭后，加入一抗(由罗氏公司生产，浓度为：1∶500)5 ml，在37℃下孵育2 h后，加入生物素荧光标记的二抗(由南京碧云天生物公司生产，浓度为：1∶2000)3 ml，在37℃下孵育20～30 min后，磷酸盐缓冲液清洗3次，每次5 min，加入HRP辣根酶标记链霉卵白素(由武汉生之源生物公司生产，试剂盒批号为：20178496)，HRP-DAB底物显色试剂盒 (PA110)显色，自来水冲洗，复染，封片。

1.3.2 免疫组化染色结果判断 两种蛋白的阳性染色分为呈黄色、棕黄色及褐色表达，①依据染色的程度分为：未染色0分、淡黄色1分、棕黄色2分、褐色、黑色3分；②根据染色的细胞占比结果：≤10%1分、11%～50%2分、51%～75%3分、75%4分。结果判定：两项得分之积<3分为阴性、≥3分为阳性。

1.3.3 MVD的计数方法 对MVD表达情况的判定主要依据CD34标记染色情况，而CD34阳性着色分为单个或成簇状黄色及棕黄色表达，依据阳性着色数量进行等级划分，每张切片在40倍光镜下选择血管最多的区域，在400倍光镜下选取3个视野进行计数：MVD阳性计数<10个为(-)、MVD阳性计数11～25个为(+)、MVD阳性计数26～50个(++)、MVD阳性计数>50个(+++)。

1.4 统计学分析

2 结果

2.1 结肠癌组织与癌旁组织中Musashi 1、VEGF-A阳性率比较

结肠癌组织中Musashi 1蛋白、VEGF-A阳性率(70.45%、64.77%)，均高于癌旁组织的40.91%、36.36%(P<0.05),见表1。

表1 Musashi 1蛋白、VEGF-A阳性率比较(例，%)

2.2 Musashi 1蛋白、VEGF-A阳性率表达在不同病理学特征结肠癌中的差异比较

Musashi 1蛋白在不同TNM分期、不同浸润深度、不同淋巴结转移情况的组织中表达差异具有统计学意义(P<0.05)；VEGF-A在不同TNM分期的结肠癌组织中表达差异具有统计学意义(P<0.05) ；见表2、表3。

表2 Musashi 1蛋白在不同病理学特征结肠癌中的表达比较(例，%)

表3 VEGF-A在不同病理学特征结肠癌中的表达比较(例，%)

2.3 结肠癌组织中Musashi 1蛋白、VEGF-A表达与MVD形成的关系

Musashi 1蛋白阳性、VEGF-A阳性表达的结肠癌组织中MVD计数均高于其阴性表达组织(P<0.05)，见表4。

表4 结肠癌组织中Musashi 1蛋白、VEGF-A表达与MVD形成的关系

3 讨论

肠道腺体上皮细胞的异常增殖过程中，由于癌基因的突变及肿瘤基因错配修复能力的下降，癌细胞的发生风险可明显上升[7]。临床上的观察发现，结肠癌患者的5年生存率或者中位生存时间等预后指标均明显恶化，结肠癌患者远期病情进展的风险可显著上升[8,9]。对肿瘤新生血管的调控，可在肿瘤的早期发生或者病情进展过程起到一定的作用。较高的肿瘤血管密度或者肿瘤血管新生速度，能够提高肿瘤细胞的血流及血氧灌注水平，增加了癌细胞的增殖速度。通过对于肿瘤微血管密度生成调控的相关机制研究，能够为临床上结肠癌的免疫靶向治疗或者临床预后评估提供参考。本次研究通过对于结肠癌患者病灶组织中Musashi 1蛋白、VEGF-A蛋白的分析，能够在部分揭示结肠癌临床病情进展的同时，为临床上针对血管受体的免疫靶向治疗提供参考。

Musashi 1蛋白是肿瘤干细胞调控因子，其能够通过诱导结肠腺体上皮细胞的上皮间质转换，最终促进肿瘤细胞对于肠道肌层的浸润。基础方面的机制研究还认为，Musashi 1蛋白还能够提高结肠纤体上皮细胞的粘附能力，加剧癌细胞的异常增殖[10,11]；VEGF-A是一种血管内皮调控生成因子，不仅具有提高肿瘤血管内皮细胞的修复能力，还可以增加血管内皮细胞的迁移能力，最终增加肿瘤病灶组织的血流灌注[12-14]。多数研究者探讨了VEGF不同受体亚型在结肠癌患者病情进展过程中的作用，认为VEGF蛋白的高表达能够促进结肠癌患者临床病理特征的进展[15-17]，但对于Musashi 1蛋白的分析研究不足。

本次研究发现在结肠癌患者病灶组织中，Musashi 1蛋白、VEGF-A蛋白的表达阳性率可明显上升，高于结肠癌旁组织，统计学差异显著，推测Musashi 1蛋白、VEGF-A蛋白的高表达能够在结肠癌的病情进展过程中发挥作用。之所以存在较高的Musashi 1蛋白、VEGF-A蛋白表达，主要由于结肠腺体细胞的异常浸润，能够显著激活肿瘤细胞的病理生理途径，提高了癌细胞内信号通路的激活程度，最终促进了Musashi 1蛋白、VEGF-A蛋白的合成释放。有其他研究者也认为，在结肠癌患者病灶组织中，Musashi 1蛋白的表达阳性率可超过45%以上，在具有肝脏转移的患者中，Musashi 1蛋白的表达阳性率可随着转移病灶的扩散而显著上升[18-20]。在不同的临床病理特征的患者中，能够发现在临床分期较晚、浸润深度较深或者发生了淋巴结转移的患者中，Musashi 1蛋白的表达阳性率较高，这表明Musashi 1蛋白的高表达能够显著促进结肠癌患者临床病理特征的进展。这主要由于Musashi 1蛋白能够维持癌细胞干性特征，促进肿瘤细胞伪足的形成，最终促进了癌细胞对于淋巴结及周围正常组织的浸润；在不同的临床分期患者中，VEGF-A蛋白的表达阳性率也明显上升，表明VEGF-A蛋白同样能够显著影响到肿瘤细胞的临床病情的进展。这主要由于VEGF-A能够影响到癌细胞血管分支吻合程度，提高了血管分支的形成速度，加剧了肿瘤细胞的浸润和扩散。MVD是评估肿瘤血管形成风险的指标，过度的MVD上升能够加剧肿瘤患者复发和转移的风险，本次研究中在 Musashi 1、VEGF-A蛋白阳性表达的患者中，MVD计数可明显上升，提示了Musashi 1、VEGF-A能够显著影响到肿瘤血管的形成过程。

综上所述，结肠癌组织中Musashi 1蛋白阳性、VEGF-A表达增强明显增加，同时Musashi 1、VEGF-A的表达与肿瘤发展、微血管形成有一定的关系。