皖南地区MTHFR 和PAI-1 基因多态性分布及与不良妊娠相关性研究*

叶 鸣，方 佳，赵 磊，爱 琳，汪思敏，朱和平

（安徽省芜湖市中医医院，安徽 芜湖 241000）

育龄妇女叶酸缺乏可导致胎儿神经管畸形、胎盘早期剥离、早产等风险。近年来，对叶酸代谢相关基因5，10 - 亚甲基四氢叶酸还原酶（MTHFR）C677T 和MTHFR A1298C的研究较多，根据不同基因型个体化给予叶酸，可有效减少不良妊娠事件［1-2］。血浆纤溶酶原激活物抑制剂-1（PAI-1）是多功能线性糖蛋白，可调节纤溶酶活性，与不明原因流产有相关性［3］。本研究中以皖南地区育龄妇女为研究对象，探讨了MTHFR 和PAI- 1 基因多态性的分布特征，以及与不良妊娠的相关性。现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

纳入标准：汉族；相互无血缘关系；年龄22～45岁，平均（31.00 ± 4.25）岁；要求备孕的妇女或妊娠期（孕周不超过20 周）。本研究经我院医学伦理委员会批准，患者签署知情同意书。

排除标准：糖尿病等基础疾病；异位妊娠；血栓栓塞性疾病及家族遗传史；明确原因流产。

对象选择与分组：选取我院2020年10月至2021年8月收治的育龄妇女196 例，最终纳入122 例。根据既往妊娠史分为正常组（无不良妊娠史）和研究组（有不良妊娠史，包括胚胎停育、自然流产、生化妊娠、畸胎），各61 例。两组研究对象年龄、体质量指数、吸烟史、饮酒史等一般资料比较，差异均无统计学意义（P＞0.05），具有可比性。另选择天津［4］、宁夏［5］、廊坊［6］、贵州［7］已服用叶酸的育龄妇女各150例、383例、922例、236例。

1.2 方法

采集两组对象外周静脉血2～3 mL，取200 μL，加入1 mL 氯化铵，混匀，静置5 min，采用Scilogex D1008E型离心机（广州硕普生物科技有限公司）室温下离心（转速为3000 r/ min）5 min，吸净上层透明红色液体，向富集白细胞的离心管中加入30～50 μL 耀金保（北京华夏时代基因科技发展有限公司），静置30 min；向相应编号的耀金分试剂盒（北京华夏时代基因科技发展有限公司）中加入1.5 μL 处理后的白细胞样本，采用Fluotec 48E 型微量荧光检测仪（西安天隆科技有限公司）检测；运用数字荧光分子杂交技术分析MTHFR C677T（rs1801133）、MTHFR A1298C（rs1801131）、PAI-1（rs1799889）基因分型。

1.3 统计学处理

采用SPSS 18.0统计学软件分析。计数资料以率（%）表示，行χ2检验。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 基因型符合Hardy-Weinberg 平衡定律

MTHFR C677T，MTHFR A1298C，PAI-1 基因分布均符合Hardy - Weinberg 平衡定律（P＞0.05），数据来自同一孟德尔群体。详见表1。

表1 Hardy-Weinberg平衡定律分析［例（%），n=122］Tab.1 Analysis of Hardy-Weinberg equilibrium law［case（%），n=122］

2.2 基因型分布特点

122例皖南地区育龄妇女的MTHFR C677T，MTHFR A1298C，PAI-1基因型分布见表2。皖南地区PAI-1基因多态性与天津、宁夏比较，无显著差异（P=0.40，0.80），详见表3。根据MTHFR C677T 和MTHFR A1298C 基因型将育龄妇女的MTHFR 酶活性分为正常（677CC/1298AA）、低风险（677CT/ 1298AA、677CC/ 1298AC、677CC/ 1298CC）、中风险（677TT/ 1298AA、677TT/1298AC、677CT/ 1298CC、677CT/ 1298AC）、高 风 险（677TT/1298CC）［8］。与廊坊比较，低风险、中风险数有显著差异（P＜0.05）；与贵州比较，正常及中风险数有显著差异（P＜0.05）。详见表4。MTHFR 酶活性正常占比由高到低依次为贵州（24.15%）、皖南地区（8.20%）、廊坊（7.48%）。

表2 皖南地区育龄妇女MTHFR C677T，MTHFR A1298C，PAI-1基因型分布［例（%），n=122］Tab.2 Distribution of MTHFR C677T，MTHFR A1298C and PAI-1 genotypes of childbearing-aged women in Southern Anhui［case（%），n=122］

表3 皖南地区与其他地区育龄妇女PAI-1基因多态性比较［例（%）］Tab.3 Comparison of PAI-1 gene polymorphism of childbearingaged women in Southern Anhui and other regions［case（%）］

表4 皖南地区与其他地区育龄妇女MTHFR酶活性比较［例（%）］Tab.4 Comparison of MTHFR enzyme activity of childbearingaged women in Southern Anhui and other regions［case（%）］

2.3 MTHFR 和PAI-1 基因型与不良妊娠史的相关性

122 例育龄妇女中，61 例既往有不良妊娠史，61 例无不良妊娠史，两组MTHFR C677T CC、TT 基因型比较，正常组CC型较研究组多，研究组TT型较正常组多，有显著差异（P＜0.05）；两组MTHFR C677T C 和T 等位基因分布比较，有显著差异（P＜0.05）。两组PAI - 14G4G、5G5G 基因型比较，正常组5G5G 型较研究组多，研究组4G4G 型较正常组多，有显著差异（P＜0.05）；两组PAI - 14G 和5G 等位基因分布比较，有显著差异（P＜0.05）。MTHFR A1298C AA、AC、CC 基因型两组间无显著差异（P＞0.05）。详见表5。

3 讨论

本研究结果表明，MTHFR 基因C677T 和PAI-1 多态性与不良妊娠有相关性，MTHFR酶活性与廊坊、贵州地区有差异，PAI-1与天津、宁夏地区无差异。

MTHFR 是叶酸代谢的关键作用酶，但人类MTHFR基因呈多态性分布，其中C677T（rs 1801133）和A1298C（rs 1801131）为常见突变位点。基因突变会影响酶的活性，导致叶酸代谢障碍，进而增加胎儿畸形发生率［9-10］。据报道，MTHFR 677TT 基因型妇女在孕前及孕早期未服用叶酸，唇腭裂儿的发生风险将增加5.9 倍；而677TT 纯合子突变会使神经管缺陷儿的发生风险增加2 倍［11］。一项Meta 分析结果显示，MTHFR A1298C 会增加非综合性唇腭裂发生风险［12］。MTHFR 677T 等位基因是发生习惯性流产及胎儿神经管发育缺陷的高危因素，习惯性流产与MTHFR 1298A 突变为C 有关［13］，故C677T与A1298C共同影响MTHFR 酶的活性。育龄妇女MTHFR 677T 型等位基因频率在纬度上呈“南低北高”趋势［11］，叶酸利用风险存在民族差异［14］，故选取北方地区的廊坊和少数民族众多的贵州进行对比，结果与文献［11，14］报道相似。本研究中叶酸利用风险皖南地区优于廊坊，较贵州差。可能是由于南方和北方人群的生活环境不同，存在遗传差异，也可能与本研究中主要选择汉族人群有关。后续需进一步研究MTRR A66G 皖南地区多态性特点，为育龄妇女合理利用叶酸提供科学指导。由表5可知，与正常组相比，研究组育龄妇女的MTHFR 基因C667T位点CC和TT基因型，以及C和T等位基因频率有显著差异（P＜0.05）；MTHFR A1298C 位点AA 和CC 基因型及A 和C 等位基因频率无显著差异（P＞0.05），与文献［8］的报道相似。A1298C 多态性对酶活性的影响小于C677T多态性。

表5 两组研究对象MTHFR和PAI-1基因型频率分布［例（%），n=61）Tab.5 Frequency distribution of MTHFR and PAI-1 genotypes between the two groups［case（%），n=61］

PAI-1为纤溶酶原激活物抑制基因，4G等位基因会升高血浆PAI-1水平，使体内凝血-纤溶系统失去平衡，导致胚胎供血不足，引发自然流产［15］。本研究中，两组育龄女性的PAI-1基因多态性差异显著（P＜0.05），且研究组4G4G高于正常组。宁夏主要分布少数民族，天津与皖南地区PAI-1基因型分布有差异，但基因分布频率无显著差异（P＞0.05），这可能与地区差异、种族差异无关。

综上所述，皖南地区育龄妇女的叶酸利用风险较贵州高，MTHFR C677T和PAI-1基因多态性与不良妊娠有相关性，需在全市育龄妇女中重点推广叶酸的补充，以及进行PAI-1基因筛查，以降低不良妊娠风险。后续将对122例被调查对象进行个体化叶酸用药指导，并全程跟踪调查，监测血压、尿常规、凝血等指标，进行个体化药学服务。