葡萄糖调节蛋白78、可溶性血管内皮生长因子受体1、STOX1在子痫前期患者血清中表达及相关性研究

黄莉莉，黄秀敏，杜 瑜，马玉平

厦门大学附属中山医院1.妇产科；2.药学部，福建 厦门 361004

子痫作为孕妇在围产期的特发性疾病，常会伴随水肿、头痛、恶心、呕吐等临床症状。子痫前期(preeclampsia，PE)会对孕妇器官功能甚至大脑功能造成损伤，同时威胁孕妇以及胎儿的生命健康[1]。有研究显示，我国PE发病率高达10%左右，且呈不断升高趋势[2]。目前，PE的发病机制尚不清楚，临床预防及治疗难度较大[3]。有研究指出，血清中细胞因子水平变化与PE发生、发展密切相关[4]。葡萄糖调节蛋白78(glucose regulated protein 78，GRP78)能够与蛋白质进行折叠甚至组装，从而维持机体内环境稳定[5]。可溶性血管内皮生长因子受体1(soluble fms-like tyrosine kinase-1，sFlt-1)水平出现异常时，能够间接影响到滋养层细胞的增殖，促进疾病的发展[6]。STOX1作为易感基因，能够随着孕周的增长而增长，进而参与到PE的发生、发展之中[7]。本研究旨在探讨GRP78、sFlt-1、STOX1在PE患者血清中的表达及相关性。现报道如下。

1 对象与方法

1.1 研究对象 选取厦门大学附属中山医院自2020年4月至2021年4月收治的77例PE患者为研究对象。纳入标准：符合《妇产科学》[8]中PE诊断标准；孕周≥20周；单胎妊娠；存在高血压、尿蛋白症状；经血压、心电图、24 h尿蛋白等检查确诊；妊娠前无高血压病史。排除标准：恶性肿瘤；合并其他妊娠相关疾病；心肾功能障碍；凝血功能障碍、免疫功能障碍；妊娠前存在糖尿病、高血压史；合并肝炎、结核等传染疾病。根据《妇产科学》[8]中病情严重程度将其分为轻度PE组(n=42)与重度PE组(n=35)。另选取50例同期于我院孕检的健康妊娠女性为健康组。本研究经医院伦理委员会批准。所有孕妇均签署知情同意书。

1.2 研究方法 收集3组研究对象24 h尿液，准确量取后送检，采用全自动生化分析仪及配套试剂盒(利德曼生化股份有限公司)测定24 h尿蛋白定量。严格遵循试剂说明书进行操作。计算并比较3组研究对象的平均动脉压。体检当天，分别采集3组空腹外周静脉血5 ml。常温静置，以3 000 r/min离心10 min，分离上清。采用双抗体酶联免疫吸附法测定血清GRP78、sFlt-1、STOX1水平。设置酶标板为空白孔、标准孔、待测样品孔，每孔内均加入50 μl稀释液，空白孔、标准孔、待测样品孔内依次加入样品稀释液、标准品、待测样片各50 μl，轻晃均匀，酶标板覆膜，室温孵育2 h。弃孔内液体，甩干，清洗反应板。分别加入GRP78、sFlt-1、STOX1检测液，100 μl/孔，覆膜，常温孵育1.0 h，弃液体，甩干、洗涤反应板，加入100 μl/孔底物溶液，遮光显色0.5 h，加入终止液，轻弹酶标板终止反应。酶标仪(型号iMark，Bio-RAD公司)450 nm处测定吸光值。严格遵循试剂说明书进行操作。

2 结果

2.1 3组研究对象一般资料比较 3组研究对象年龄、孕次、孕周、体质量指数(body mass index，BMI)比较，差异均无统计学意义(P>0.05)。轻度PE组、重度PE组24 h尿蛋白定量、平均动脉压均高于健康组，差异均有统计学意义(P<0.05)；重度PE组24h尿蛋白定量、平均动脉压均高于轻度PE组，差异均有统计学意义(P<0.05)。见表1。

表1 3组研究对象一般资料比较

2.2 3组研究对象血清GRP78、sFlt-1、STOX1水平比较 轻度PE组、重度PE组患者GRP78、sFlt-1、STOX1水平均高于健康组，差异均有统计学意义(P<0.05)。重度PE组患者GRP78、sFlt-1、STOX1水平均高于轻度PE组，差异均有统计学意义(P<0.05)。见表2。

表2 3组研究对象血清GRP78、sFlt-1、STOX1水平比较

2.3 血清GRP78、sFlt-1、STOX1与PE发生相关性分析 血清GRP78、sFlt-1、STOX1与PE发生呈正相关性(r=0.671、0.594、0.714，P<0.05)。

2.4 GRP78、sFlt-1、STOX1对PE的诊断价值 与GRP78、sFlt-1、STOX1单项诊断相比，三项联合对PE的诊断价值较高(P<0.05)。见表3。血清GRP78、sFlt-1、STOX1诊断PE的ROC曲线见图1。

图1 血清GRP78、sFlt-1、STOX1诊断PE的ROC曲线

表3 GRP78、sFlt-1、STOX1对PE诊断指标比较

3 讨论

有学者指出，PE的发生发展与免疫调节功能、血管内皮损伤、遗传等因素密切相关[9]。以上原因虽然与PE的发生发展密切相关，但单独任一因素均不能够导致PE的发生，所以,PE的发生发展受多因素共同影响[10-11]。因此，及早有效地对PE病情作出判断，能够为PE的预防以及治疗起到积极作用。有研究发现，GRP78在真核生物内质网膜上以非共价键形式短暂的结合新生多肽，从而促进蛋白质的正确折叠以及装配，并且协助其运送[12-13]。有研究显示，对PE胎盘滋养细胞进行检测，GRP78蛋白在各种子痫中均呈现高表达[14]。GRP78与PE密切相关，可能参与了PE的发生发展。sFlt-1可抑制胎盘生长因子，对滋养层细胞增殖及血管生成产生影响，进而引发妊娠期高血压[15-16]。sFlt-1在机体中能够与血管内皮生长因子相结合，进而阻断血管内皮生长因子的生物学反应，促使胎盘局部出现缺氧的状态，加重PE发展[17]。当STOX1出现异常上升时，会导致细胞间的α-T-链接蛋白表达上调，对滋养细胞进行负性的调节，进而导致胎盘的前置、早剥等情况发生，严重威胁孕妇以及胎儿的身心健康[18-19]。有研究显示，当STOX1蛋白呈现出异常表达时，会在一定程度上抑制细胞的增殖，促进PE进展[20]。

本研究结果显示，轻度PE组、重度PE组患者GRP78、sFlt-1、STOX1水平均高于健康组，差异均有统计学意义(P<0.05)。重度PE组患者GRP78、sFlt-1、STOX1水平均高于轻度PE组，差异均有统计学意义(P<0.05)。这表明，GRP78、sFlt-1、STOX1均与PE病情严重程度相关，推测可能通过影响子宫螺旋动脉重铸，滋养细胞的增殖与分化等机制参与PE病情的发生与发展。本研究结果显示，血清GRP78、sFlt-1、STOX1与PE发生呈正相关性(r=0.671、0.594、0.714，P<0.05)。这表明，GRP78、sFlt-1、STOX1的高水平表达可能严重影响滋养细胞的侵袭，导致螺旋动脉重铸障碍，从而在PE的发生发展中起到作用。此外，与GRP78、sFlt-1、STOX1单项诊断相比，三项联合对PE的预测价值较高(P<0.05)。这表明，PE的发生发展为多因素共同影响，GRP78、sFlt-1、STOX1的高水平表达，通过多方面的机制导致胎盘供血困难，从而引发PE。因此，3个指标联合检测能够避免单个指标检测诊断PE的不足，有望对PE病因学研究及早期干预提供一个全新的平台。

综上所述，血清GRP78、sFlt-1、STOX1在PE中异常表达，并与病情严重程度相关，测定GRP78、sFlt-1、STOX1表达水平可辅助诊断孕妇PE及病情严重程度。