ALDH2基因多态性与海南地区汉族老年人群冠心病发病风险相关性

吴和弟 许丽娃 吉家钗 陈训春 王少津 (海口市人民医院老年病科，海南 海口 570208)

冠心病致残率、致死率均较高，是导致老年人残疾、死亡的主要原因〔1〕。冠心病作为一种多因素疾病，其发生发展与遗传、环境等因素密切相关，探讨冠心病相关易感基因，早预防、早干预是当前基础研究领域之热点。近年研究表明〔2,3〕，乙醛脱氢酶(ALDH)2作为人体内乙醇代谢的关键酶，其基因多态性与空腹血糖受损存在明显相关性，其可能通过影响血糖代谢水平，而影响冠心病的发生发展。还有研究发现，ALDH2基因突变参与了冠状动脉粥样硬化的病理过程，是心血管疾病的危险因素〔4〕，但目前ALDH2在体内的作用机制尚未完全阐明，ALDH2基因多态性与冠心病发病风险的关系尚有争议，且不同人群基因遗传存在地区差异，需要区域性研究分析。本研究拟探讨ALDH2基因多态性与海南地区汉族老年人群冠心病发病风险的相关性。

1 对象与方法

1.1研究对象 2017年1月至2020年12月在海口市人民医院老年病科住院患者800例，其中经冠脉造影检查确诊为冠心病462例(冠心病组)，包括稳定型心绞痛184例，不稳定型心绞痛182例，心肌梗死96例；经冠脉造影检查排除冠心病338例(对照组)。冠心病诊断标准参照1979年世界卫生组织(WHO)诊断标准。纳入标准：①汉族，本地区常住居民；②年龄≥60岁；③接受冠状动脉造影检查。排除标准：①伴严重肝肾功能不全、血液系统疾病者；②恶性肿瘤患者；③自身免疫性疾病者；④伴严重感染性疾病者。本研究经医院伦理委员会批准，研究对象入组前均签署知情同意书。

1.2ALDH2基因多态性检测 收集患者空腹静脉血2 ml，放置于乙二胺四乙酸(EDTA)抗凝管中，然后置于-80℃环境下保存备用。应用DNA提取试剂盒(北京鑫诺美迪基因检测技术有限公司)提取全血基因组DNA，利用紫外分光光度计对DNA浓度进行测定，光密度260/280=1.8～2.0表明样品达标；DNA含量要求：所提取的标本≥50 ng/μl；基因组RNA提取完成后，立即应用ALDH2基因突变检测试剂盒进行检测。目的DNA片段扩增引物：上游引物为5′-GTCAACTGCTATGATGTGTTTGG-3′，下游引物为5′-CCACCAGCAGACCCTCAAG-3′。反应体系50 μl，模板DNA 2 μg，2×Master Mix 25 μl，上下游引物各2 μl。反应条件：94℃预变性3 min后进入循环，94℃变性45 s，然后60℃退火30 s，再以72℃延伸45 s，共进行35个循环，72℃延伸5 min，于4℃下保存。PCR扩增引物在2%琼脂糖凝胶下行电泳处理，应用溴乙啶染色，紫外灯下观察结果。

1.3临床基本资料收集 包括性别、年龄、体重指数、吸烟史、饮酒史、既往病史、冠心病家族史等。并进行常规生化指标检测，包括空腹血糖(FPG)、糖化血红蛋白(HbA1c)、三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)等；生化指标均由海口市人民医院检验科按标准流程完成检测。并对冠心病患者进行Gensini评分。

1.4统计学方法 采用SPSS24.0软件进行t、χ2检验、Logistic回归模型分析。

2 结 果

2.1两组临床特征比较 冠心病组体重指数、吸烟史及高血压、糖尿病、有冠心病家族史的比例均明显高于对照组，且冠心病组糖脂代谢指标FPG、TC、TG、LDL-C水平均明显高于对照组(P<0.01，P<0.001)；两组性别、年龄、饮酒史等资料差异无统计学意义(P>0.05)。见表1。

表1 两组一般临床资料比较

2.2ALDH2基因多态性与海南地区老年人群冠心病发病风险的相关性 所有对象ALDH2基因型包括3种，即纯合野生型(GG型)、纯合突变型(AA型)和杂交突变型(GA)型；且各组ALDH2基因型分布符合Hardy-Weinberg平衡分布(P>0.05)，有着良好群体代表性。冠心病组GG基因型频率明显低于对照组，AA基因型频率明显高于对照组(均P<0.001)；冠心病组G等位基因分布频率明显低于对照组，A等位基因分布频率明显高于对照组(P<0.001)。见表2。

表2 两组ALDH2基因型和等位基因分布频率比较〔n(%)〕

Logistic回归分析显示，海南地区老年人群中ALDH2基因位点AA基因型相比GG基因型患者冠心病发病风险增高(OR=2.213，95%CI：1.125～4.274，P=0.009)；进一步经冠心病相关的危险因素校正后，结果仍显示ALDH2基因AA等位基因携带者相比GG等位基因携带者冠心病发病风险增高(OR=2.587，95%CI：1.269～5.121，P=0.004)。

2.3ALDH2基因多态性与冠心病严重程度的相关性 根据Gensini评分将冠心病患者分为Gensini评分<43分、43分≤Gensini评分<72分、Gensini评分≥72分3个亚组，对ALDH2基因多态性与冠心病严重程度的相关性进行分析，结果显示，各组ALDH2基因型分布差异无统计学意义(P>0.05)。见表3。

表3 ALDH2基因多态性与冠心病严重程度关系〔n(%)〕

3 讨 论

研究表明〔5,6〕，基因多态性在冠状动脉粥样硬化的发生发展过程中发挥着重要作用，研究基因多态性对于早期筛查高危人群有着重要意义。本研究发现，ALDH2基因多态性与海南地区汉族老年人群冠心病发病风险具有相关性，但与疾病严重程度无相关性。ALDH2是酒精代谢的关键酶，还参与着其他醛类的氧化，兼具脱氢酶活性和酯酶活性。近年研究发现〔7〕，ALDH2可能通过氧化解毒醛类等来发挥心肌保护作用。线粒体ALDH2基因突变后，其酶活性显著降低，致使醛解毒作用减弱，导致醛类物质代谢减慢，诱导氧化应激和凋亡信号传导途径，在缺血后损伤过程对心肌产生不利影响〔8〕。

多项研究表明〔9,10〕，ALDH2基因突变是心血管疾病的危险因素。You等〔3〕研究认为，ALDH2能够通过抑制解毒4-羟基壬烯酸(HNE)途径，下调活性氧生成，进而减轻心肌细胞损伤。Adeniji等〔11〕研究表明，ALDH2表达增高可有效抑制动脉粥样硬化损伤，同时对心肌细胞凋亡有抵抗作用。He等〔12〕报道，ALDH2基因与2型糖尿病患者心脑血管并发症密切相关。ALDH2基因突变存在明显种族、地区差异。本研究结果提示，海南地区汉族老年人群中ALDH2基因位点AA基因型相比GG基因型患者冠心病发病风险增大2.213倍，进一步经冠心病相关的危险因素校正后，结果仍显示ALDH2基因AA等位基因携带者相比GG等位基因携带者冠心病发病风险增高。这与本课题组前期报道〔13〕及Liu等〔4〕报道一致。但江玲等〔14〕研究显示，ALDH2基因多态性与冠心病发病风险无关。不同的研究结果可能与种族、地区差异有关。

关于ALDH2基因多态性影响冠心病发病风险的可能机制在于〔15～18〕：①ALDH2基因的A等位基因突变，可影响糖脂代谢及血压异常，进而促进动脉粥样硬化进程；②血液中高乙醛水平不利于心血管功能健康。ALDH2基因发生突变后，其解毒作用减弱，进而使得其心肌保护作用降低；③ALDH2基因突变还可能通过氧化应激、炎症失衡等影响血管内皮功能，而血管内皮功能损伤与动脉粥样硬化有着紧密联系，是导致心血管事件的危险因素。目前，ALDH2在人体的作用机制仍未完全阐明，ALDH2基因多态性在冠心病发病风险中的作用机制仍需通过动物或细胞试验来研究。

本研究结果与江玲等〔14〕报道一致。本研究存在不足，首先样本量较小，其结果难免与真实世界存在偏差；其次未对纳入人群的他汀类药物使用情况加以考虑，难免存在一定的混杂偏倚；再次，纳入对象均为疑似冠心病患者，难免存在选择偏倚。为更好地阐明基因多态性在冠心病发生发展中的作用，仍需更大样本量的多中心研究、更严谨的研究设计来验证，同时还需进一步开展基础实验研究，来阐明ALDH2基因多态性在冠心病发病中的作用机制。

综上，本研究发现，ALDH2基因多态性与海南地区汉族老年人群冠心病的发病风险有关，ALDH2基因位点AA基因型相比GG基因型患者冠心病发病风险增大，但ALDH2基因多态性与冠心病严重程度无相关性。