白细胞介素、脂联素基因多态性与乳腺癌发生的关系

许 伟 马梓程 周细华

南通大学附属如皋医院 江苏省如皋市人民医院普通外科，江苏如皋 226500

乳腺癌是临床上常见的恶性肿瘤之一，其患病率占女性恶性肿瘤首位，近年来，我国乳腺癌发病率逐年升高，且呈年轻化趋势[1-2]。乳腺癌发病机制复杂，目前尚未十分明确，但一般认为与遗传、免疫、肥胖等密切相关[3-4]。有报道显示，基因多态性作为个体中最常见的遗传变异，与乳腺癌的发生密切相关[5]。白细胞介素（interleukin，IL）是在白细胞或免疫细胞间相互作用的淋巴因子，参与肿瘤细胞的免疫调节，在肿瘤发生、发展中发挥重要作用[6-7]。脂联素（adiponectin，APN）为脂肪细胞分泌的内源性活性蛋白质，可作为胰岛素增敏激素。有研究显示，APN 与乳腺癌发生密切相关[8-9]。基于此，本研究就IL、APN 基因多态性与乳腺癌发生的相关性展开研究。

1 资料与方法

1.1 一般资料

回顾性分析2018 年1 月至2020 年1 月南通大学附属如皋医院（以下简称“我院”）收治的96 例乳腺癌患者作为乳腺癌组，另随机抽取我院96 名同期体检正常女性的临床资料作为正常对照组。纳入标准：①观察组经穿刺病理活检诊断为乳腺癌；②年龄＞18 岁；③首次确诊乳腺癌；④女性；⑤临床资料完整。排除标准：①炎性乳腺癌；②伴有其他部位恶性肿瘤；③严重心、肝、肾功能性疾病；④妊娠期或哺乳期产妇。本研究经我院医学伦理委员会批准。

1.2 研究方法

统计两组一般资料，检测IL、APN 基因多态性。基因型检测：①核酸提取。清晨空腹抽取患者肘中静脉血5 ml，乙二胺四乙酸二钾抗凝，加入1.5 倍体积的细胞裂解液，3000 r/min 离心1 min，取下层沉淀物，采用DNA 提取试剂盒提取全血基因组DNA。②PCR扩增。采用WP-40 型PCR 扩增仪对提取核酸样本进行扩增，94℃预变性2 min、变性30 s 使双链DNA 模板在热作用下，氢键断裂，形成单链DNA；58℃退火30 s 将引物与DNA 模板结合，形成局部双链；72℃延伸1 min，在DNA 聚合酶作用下，以脱氧核糖核苷三磷酸为原料，从引物的3’端开始从5’→3’端的方向延伸，合成与模板互补的DNA 链。总扩增35 个循环。引物序列见表1。③基因分型。采用Clin-ToF-Ⅰ型飞行时间质谱仪（北京毅新博创生物科技有限公司）对上述基因表型进行分析，得出基因多态性分型结果。

表1 引物序列

1.3 统计学方法

选用SPSS 21.0 软件进行数据分析，计量资料以均数±标准差（）表示，组间比较采用t 检验；计数资料以例数和百分率表示，组间比较采用χ2检验。女性乳腺癌发生的影响因素采用多因素logistic 回归分析。以P ＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 女性乳腺癌发生的单因素分析

两组IL-10 基因启动子区-1082 基因型、IL-16基因rs1556218 基因型、IL-6 基因-572 基因型、IL-8基因-251 基因型、APN 基因-276 基因型比较，差异有统计学意义（P ＜0.05）。见表2。

表2 女性乳腺癌发生的单因素分析

2.2 女性乳腺癌发生的多因素logistic 回归分析

将“2.1”中差异有统计学意义（P ＜0.05）的变量作为自变量，纳入logistic 回归分析模型，进行量化赋值，见表3。结果显示，IL-10 基因启动子区-1082GA 基因型、IL-16 基 因rs1556218TG 基 因 型、IL-6 基 因-572CG 基因型、IL-8 基因-251TA 基因型、APN 基因-276TG 基因型是女性乳腺癌发生的影响因素（P ＜0.05），见表4。

表4 女性乳腺癌发生的多因素logistic 回归分析

3 讨论

乳腺癌作为高发性恶性肿瘤，其发病为遗传、免疫、肥胖等共同作用的结果，目前对于其分子水平发病机制未十分清楚[10-11]。既往有报道指出，细胞色素P450 1A1 基因、胞嘧啶脱氨酶APOBEC3 基因、成纤维细胞生长因子受体2 基因等为乳腺癌的高危易感基因[12-13]。但关于乳腺癌易感性与IL、APN 基因多态性的研究较少，且结果、结论缺乏统一性。IL 作为人体内重要的细胞因子，与免疫、内分泌、炎症反应等密切相关[14-15]。APN 与肥胖密切相关，而目前一般认为肥胖是乳腺癌的重要危险因素之一[16]。

本研究结果显示，IL-10 基因启动子区-1082 GA基因型、IL-16 基因rs1556218 TG 基因型、IL-6 基因-572 CG 基因型、IL-8 基因-251 TA 基因型是乳腺癌发生的影响因素，提示上述IL 基因多态性与乳腺癌的遗传易感性密切相关。张志珊等[17]研究指出，乳腺癌患者IL-6 基因-572 CG 基因型例数明显高于正常对照人群，认为IL-6 基因多态性在乳腺癌发病过程中具有重要作用。董静等[18]研究证实，IL-10 基因启动子区-1082GA 基因型与乳腺癌易感性密切相关。IL-10为抑制因子（由干扰素合成），可抑制Th1 辅助细胞合成γ 干扰素、IL-2、肿瘤坏死因子-α 等，并协同刺激淋巴细胞增殖分化，对免疫系统具有双向调节作用，可对树突状细胞生长、分化进行抑制，下调机体对肿瘤细胞的免疫作用。有研究指出，IL-10 可协助乳腺恶性肿瘤细胞逃脱免疫系统攻击[19-20]。IL-16 是由上皮细胞和淋巴细胞分泌的多肽类细胞因子，可与配体CD4 结合，参与肿瘤的发生、发展。IL-16 可作为锌指蛋白36 的调节趋化因子，促进细胞浸润，有助于乳腺癌细胞内单核巨噬细胞迁移。IL-6 为炎症细胞因子，可参与乳腺肿瘤的免疫反应进程，促进乳腺癌细胞增殖、分化，并对肿瘤内营养血管具有促进作用[21-22]。IL-8 是中性粒细胞产生的趋化因子，在病理状态下，对T 淋巴细胞及嗜碱性粒细胞具有趋化作用，可刺激乳腺癌细胞增殖，加快肿瘤外血管生成，促进肿瘤细胞的发生、转移[23-25]。上述IL 基因多态性可能对IL 的产生、分泌具有一定影响，上调或降低机体免疫功能，而出现乳腺癌遗传易感性。

本研究结果显示，APN 基因-276TG 基因型是乳腺癌发生的影响因素，提示上述APN 基因多态性与乳腺癌的遗传易感性密切相关。宗成国等[26]通过对乳腺癌患者和正常人群的脂联素基因多态性进行比较分析，结果显示脂联素基因多态性与乳腺癌发生具有明显相关性，与本研究相符。乳腺癌为雌激素诱发的恶性肿瘤，对雌激素具有明显依赖性，APN 为脂肪细胞分泌的细胞因子，可调控雌激素-胰岛素水平。报道显示，乳腺癌细胞中存在APN 受体，可与脂联素特异性结合，抑制磷酸腺苷激酶活性，而抑制肿瘤细胞生长。另有报道显示，APN 可抑制内皮细胞增殖、迁移，而减少肿瘤内新血管生成，减缓癌细胞转移[27-28]。

综上所述，女性乳腺癌的发生与IL、APN 基因多态性密切相关，临床应引起足够重视。