基质金属蛋白酶-2 在不同病理类型的结直肠息肉患者中的表达及意义

辛辽辽 王一卓

结直肠息肉是一种常见的消化系统疾病，其中腺瘤性息肉（包括管状腺瘤、绒毛管状腺瘤、绒毛状腺瘤等）属于结直肠癌的癌前病变[1-3]。筛查癌前病变有助于预防肿瘤的发生，从而降低肿瘤的发病率和病死率。因此，尽早鉴定息肉的病理类型具有重要意义。目前主要采用粪便潜血试验、结肠镜等方法筛查结直肠息肉，均存在一定的局限性，容易导致误诊和漏诊，且结肠镜是一项侵入性检查。多项研究表明，基因表达在消化系统肿瘤及癌前病变的诊断中具有重要意义[4-6]。研究显示，基质金属蛋白酶-2（MMP-2）在结直肠癌患者中表达水平升高，具有较高的诊断价值[7]。本研究检测了MMP-2 在不同病理类型的结直肠息肉患者中的表达水平，并探讨其在结直肠癌早期诊断中的价值。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选择2017 年3 月至2020 年2 月空军军医大学第一附属医院收治的150 例结直肠息肉患者作为研究对象，包括炎性息肉36 例、增生性息肉33 例、管状腺瘤30 例、绒毛管状腺瘤27 例、绒毛状腺瘤24 例；另选择同期在该院就诊的30 例结直肠癌患者，以及在该院体检的30 名健康者（结肠黏膜正常）纳入研究。纳入标准：（1）年龄18～60 岁；（2）经结肠镜或手术及病理检查诊断各组织类型；（3）受试者自愿参与研究，并签署知情同意书。排除标准：（1）结直肠炎患者；（2）其他消化系统疾病患者；（3）意识障碍或精神疾病患者。各组患者的性别、年龄差异均无统计学意义（P均＞0.05），具有可比性（见表1）。本研究经医院医学伦理委员会批准。

1.2 组织中MMP-2 水平检测

结直肠息肉和结直肠癌患者采用手术切除或结肠镜下活体组织检查的方式获取病变结直肠组织标本，健康体检者采用结肠镜下活体组织检查的方式获取正常结肠组织标本。组织标本离体后，立即用液氮速冻，并保存于－80 ℃的环境备用。使用免疫组织化学试剂盒[购自赛默飞世尔科技（中国）有限公司]检测组织中MMP-2 的表达水平。H-E染色法的具体步骤如下：组织连续切片（厚度为4 μm）后，先浸入两缸二甲苯10 min，再浸入两缸无水乙醇3～5 min，之后进行乙醇梯度脱水；蒸馏水润洗2～3 次，加入碳酸盐缓冲液，煮沸20 min，取出修复盒，自然冷却至室温。滴加一抗（1 ∶200），4 ℃孵育24 h，37 ℃恒温箱复温15 min，PBS 液冲洗3 次，每次3 min；滴加二抗，方法同一抗。使用DAB 液（购自北京梅科万德生物科技有限公司）显色，染色满意后封片。随机选取5 个视野，在高倍显微镜下计数（取均值）。

根据染色强度和阳性细胞所占比例计算各组患者组织中MMP-2 的阳性表达率。染色强度评分标准：未着色计0 分，淡黄色计1 分，棕黄色计2分，棕褐色计3 分。以细胞内出现棕黄色颗粒为阳性细胞，阳性细胞所占比例评分标准：无阳性细胞计0 分，＜25%计1 分，25%～50%（不含）计2 分，50%～75%计3 分，＞75%计4 分。总评分＝染色强度评分×阳性细胞所占比例评分，＜3 分为阴性，≥3 分为阳性[8]。

1.3 血清MMP-2 水平检测

采用ELISA 法检测各组患者血清MMP-2 的表达水平。所有受试者于晨起空腹状态下，抽取肘部静脉血10 mL，以3 000 r/min 的转速离心15 min，分离血清，置于－20 ℃环境待测。使用ELISA 试剂盒（购自上海哈灵生物科技有限公司）检测血清MMP-2 的表达水平，严格按照试剂盒说明书进行操作。

1.4 观察指标

记录各组患者组织中MMP-2 的阳性表达率及血清MMP-2 的表达水平。以病理诊断作为标准，计算血清MMP-2 水平诊断结直肠癌的敏感度、特异度和准确率。

1.5 统计学分析

应用SPSS 21.0 软件进行统计学分析。计数资料以例（%）表示，多组间比较釆用秩和检验，两组间比较采用χ2检验；计量资料以均数±标准差（x±s）表示，多组间比较采用方差分析，两组间比较采用独立样本t检验。采用Pearson 相关系数分析连续性变量的相关性。P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 各组织中MMP-2 的阳性表达率

正常结肠组织、炎性息肉、增生性息肉中MMP-2 表达为阴性。管状腺瘤、绒毛管状腺瘤、绒毛状腺瘤、结直肠癌组织中MMP-2 的阳性表达率比较，差异有统计学意义（F＝46.841，P＜0.05）。管状腺瘤与绒毛管状腺瘤中MMP-2 的阳性表达率差异无统计学意义（χ2＝2.130，P＝0.144），绒毛管状腺瘤与绒毛状腺瘤中MMP-2 的阳性表达率差异无统计学意义（χ2＝0.377，P＝0.539）。绒毛状腺瘤中MMP-2 的阳性表达率高于管状腺瘤，结直肠癌组织中MMP-2 的阳性表达率高于管状腺瘤、绒毛管状腺瘤及绒毛状腺瘤，差异均有统计学意义（P均＜0.05）。见表2。

表2 各组织中MMP-2 的阳性表达率

2.2 不同病理类型的结直肠息肉患者的血清MMP-2 表达水平

结果表明，不同病理类型的结直肠息肉患者的血清MMP-2 表达水平相比较，差异有统计学意义（F＝186.954，P＝0.000）。与健康者比较，炎性息肉、增生性息肉、管状腺瘤、绒毛管状腺瘤、绒毛状腺瘤、结直肠癌患者的血清MMP-2 表达水平均显著升高，差异均有统计学意义（P均＜0.001）。与炎性息肉者比较，绒毛管状腺瘤、绒毛状腺瘤、结直肠癌患者的血清MMP-2 表达水平均明显升高，差异均有统计学意义（P均＜0.001）。与增生性息肉者比较，绒毛管状腺瘤、绒毛状腺瘤、结直肠癌患者的血清MMP-2 表达水平均明显升高，差异均有统计学意义（P均＜0.001）。与管状腺瘤者比较，绒毛管状腺瘤、绒毛状腺瘤、结直肠癌患者的血清MMP-2 表达水平均升高，差异均有统计学意义（P均＜0.05）。结直肠癌患者的血清MMP-2 表达水平高于绒毛管状腺瘤者及绒毛状腺瘤者，差异均有统计学意义（P均＜0.001）。见表3。

表3 不同病理类型的患者血清中MMP-2 的表达水平比较

2.3 血清MMP-2 水平诊断结直肠癌的价值

30 例结直肠癌患者通过结肠镜下活体组织病理检查或手术切除标本病理检查确诊。以病理诊断为标准，血清MMP-2 水平诊断结直肠癌的敏感度为83.33%，特异度为91.11%，准确率为90.00%。见表4。

表4 血清MMP-2 水平诊断结直肠癌的价值/例

3 讨论

结直肠息肉可分为炎性息肉、增生性息肉、腺瘤性息肉等，其与结直肠癌密切相关[9]。近年来，随着人们饮食结构的改变及医疗技术的发展，结直肠息肉的检出率呈逐年增高趋势。准确鉴别结直肠息肉的类型对于预防恶变具有重要意义。以往临床上多采用结肠镜下活体组织检查作为鉴别方法，但因具有侵入性，导致患者依从性较差，无法进行大规模的筛查工作。随着分子遗传学技术的发展，基因筛查技术已被广泛应用于结直肠癌的诊断中，其有助于评估患者的病变情况。

MMP-2 基因是MMP基因家族成员之一，位于16q12.2，包括17 个外显子，其编码蛋白主要降解Ⅳ型胶原，是肿瘤浸润、转移过程中的病理学基础[10]。多项研究表明，肿瘤患者中MMP-2 呈高表达，可诱导新生血管生成及血管内皮细胞迁移，从而促进肿瘤的血管生成、侵袭及转移[11-13]。目前关于该基因在癌前病变中表达情况的报道较少。本研究结果表明，在正常结肠组织、炎性息肉、增生性息肉中MMP-2 表达为阴性；而在腺瘤性息肉、结直肠癌组织中MMP-2 表达为阳性，且随着疾病进展，MMP-2 的阳性表达率呈升高趋势。这与之前的研究报道相符[14-16]。此外，本研究结果还显示，血清MMP-2 水平在正常结肠组织、结直肠息肉、结直肠癌组织中呈升高趋势，且血清MMP-2 水平诊断结直肠癌的敏感度为83.33%，特异度为91.11%，准确率为90.00%。该结果提示血清MMP-2 水平在结直肠癌的早期诊断中具有较高价值。