五苓散对大鼠膀胱逼尿肌失代偿期的肌条修复的实验研究

武德能?金星

摘要：目的：通过盐酸坦洛新给予BOO造模大鼠，观察盐酸坦洛新对大鼠膀胱逼尿肌失代偿期的肌条影响。方法：雄性SD大鼠60只分成5组，即试验组（盐酸坦洛新缓释片）、模型组、空白组。用激素法将试验组与模型组造模膀胱梗阻失代偿期后并灌药，观察大鼠逼尿肌条中NGF、bFGF的OD值，探讨盐酸坦洛新是否改善BOO后膀胱逼尿肌功能的生理及病理改变。结果： 试验组较模型组NGF的OD值降低，P<0.05，有统计学意义，试验组较模型组bFGF的OD值增加，P<0.05，有统计学意义。结论：盐酸坦洛新对膀胱梗阻引起的逼尿肌失代偿期的肌条损伤后有修复与功能恢复机制。

关键词：盐酸坦洛新;膀胱出口梗阻;NGF;bFGF

【中图分类号】 R283 【文献标识码】 A      【文章编号】2107-2306（2022）08--02

随着社会的进步、医学诊疗水平的提高，我国老年人日趋增多，BPH将成为影响我国老年男性健康的最重要的疾病之一。BPH可导致膀胱出口梗阻（BOO），而梗阻时间较长引起逼尿肌失代偿，也就是逼尿肌肌条萎缩并变薄，伸缩功能下降所致，逼尿肌收缩功能严重受损后影响膀胱排尿功能，导致膀胱残余尿增多。将使BPH的BOO症状进一步加重。因此本文对盐酸坦洛新对失代偿期大鼠的逼尿肌肌条的效应进行研究，现报告如下：

一、研究方法：

1.1 实验动物：动物清洁级雄性SD大鼠60只，鼠龄10～12周，体重200～240g，由桂林医学院实验动物中心提供。

1.2 造模方法：有关文献[1]激素法造模：SD大鼠60只适应性喂养7d，编号称质量，腹腔注射0.2%的戊巴比妥钠（1mL/kg） 麻醉，仰卧位固定，碘酒、75%酒精消毒。阴囊正中部选为手术切口，长约1-2cm，挤压出一侧睾丸，逐层分离睾丸，于睾丸头部结扎血管及脂方组织后切除睾丸。确认无出血后将脂肪组织及附睾送回阴囊内。同法切除对侧睾丸，逐层缝合。空白组（假手术组）随机分出15只，操作同前，但不结扎血管、不摘除睾丸。术后青霉素一次5万单位抗感染。术后观察饲养一周。除空白组以外大鼠在每天皮下注射丙酸睾酮0.005g/kg，连续给药20d。

1.3 造模评价：随机取3只假手术组和3只模型组SD大鼠检测模型成功与否，颈动脉放血处死动物，仔细分离各叶前列腺，用滤纸吸干，置平皿中加盖，电子天平称重，计算前列腺指数 （prostateindex，PI）。之后均取膀胱组织行HE染色，检测膀胱梗阻失代偿期模型[2]成功与否。若不成功，调整药量，一周后再次评价。

前列腺指数（PI）=前列腺质量（mg）/大鼠体质量（g）

1.4 实验分组及给药方法：确定膀胱梗阻失代偿期造模成功后，按照随机分组的原则将造模后的大鼠分成5组，即试验组（盐酸坦洛新缓释片）、模型组、空白组。

参考动物实验学[3]有关内容计算出SD大鼠一天灌胃剂量，模型组及空白组等量生理盐水灌胃。

按体表面积直接计算法：大鼠灌胃量=成年人药物剂量g/kg×成年人体重（70kg）/大鼠体重（200g）×人/大鼠体表折算剂量比值（0.018）

1.5标本提取与指标测定：灌胃治疗28天后称重、取血液并将大鼠断颈处死解体，血清室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心;切割膀胱后，称取重量。均取膀胱右侧壁顶部尿肌肌条，加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或匀浆器将标本匀浆充分，离心20分钟左右。（2000-3000转/分）。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。

ELISA试剂盒测定方法：应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中NGF及bFGF水平。用纯化的抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入NGF、bFGF抗原、抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的指标呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。

1.6 统计方法：所有统计用SPSS统计软件处理，实验数据以x±s表示，两两比较用t检验。采用SPSSl9.0统计学软件单因数方差分析，P<0.05为差异有统计学意义。

1.7数据分析：分析三组离体逼尿肌肌条OD值统计结果差异，三组膀胱逼尿肌肌条中NGF、bFGF的含量浓度有无差异，

二.实验结果

三、讨论：

随着医疗技术的提高，我国老年化日趋严峻，且老年男性健康也是越来越关注的问题，其中BPH是老年男性最重要的疾病之一。BPH所致BOO，是由前列腺腺体增生与及膀胱逼尿肌功能受损等因素引起，前列腺增生的临床症状是由前列腺和膀胱间复杂的相互作用而引起的，主要表现为膀胱刺激症状和梗阻症状以及梗阻的并发症[6]，梗阻症状有排尿踌躇、排尿费力、排尿时间延长、尿线变细、尿流无力、间断性排尿、终末余沥、尿潴留及充盈性尿失禁，逼尿肌收缩功能受损是产生上述症状的主要原因。目前认为[16]膀胱出口部分梗阻后引起膀胱逼尿肌功能改变分两个阶段：（1）代偿期：为早期症状，此期膀胱逼尿肌肥厚，收缩力增强，造成临床上尿频、尿急等症状;（2）失代偿期：因长时间的梗阻可导致膀胱逼尿肌功能受损，进入失代偿期，此期膀胱张力下降，逼尿肌收缩力减弱，临床上可出现尿潴留、上尿路积水等症状。失代偿期逼尿肌发生离心性肥厚，纤维成分增多致膀胱逼尿肌功能下降，收缩力下降，顺应性改变，导致膀胱残余尿增多，肾功能因此而不同程度受损，即使解除梗阻术后膀胱逼尿肌功能恢復率仅68.9%[17]。BPH通过BOO引起逼尿肌失代偿，逼尿肌萎缩变薄，收缩力下降所致。值得注意的是BPH者常引起膀胱壁肥厚，但其逼尿肌收缩功能却下降[18]。而导致尿肌收缩功能受损，完整的逼尿肌功能是指整个膀胱逼尿肌协同一致，快速而有力的收缩，是排空膀胱的基础。尿肌收缩功能受损影响膀胱排空功能，导致残余尿增多。将使BPH的排尿困难症状进一步加重。

膀胱梗阻属祖国医学“癃闭”的范畴，对于癃闭的病因病机，《内经》中多有论述，《素问·灵兰秘典论》：“膀胱者，川都之官，津液藏焉，气化则能出矣。膀胱的生理功能为贮藏尿液，气化功能正常则能排出尿液。癃闭的基本病机为膀胱与三焦的气化失常。因此，膀胱气化功能发生紊乱，则可出现如《素问·宣明五气篇》所记载“膀胱不利为癃，不约为遗溺”。五苓散乃仲景方，见于《伤寒论》，是临床上的治疗太阳蓄水证的代表方。具有渗湿利水、温阳化气的作用，是治疗因膀胱气化失司，引起小便不利诸证的良方。国内外对五苓散的药理研究颇多，贾氏[12]认为五苓散是临床治疗水湿内停的常用方。根据多年临床实践，证明此方既能利水，又能布津，具有双相调节作用。郑氏等经试验发现[13]，五苓散含药血清可增强正常家兔离体泌尿系平滑肌的张力和活动力。另有资料证明，某些中药配伍使用可产生协同作用，如五苓散的利尿作用，较其任何单味药的作用都强[14]。日本学者原中琉璃子等认为[15]，中药利尿的效果不亚于西药利尿剂。

五苓散作为主治“太阳经腑同病之蓄水证”的经方，历经数代而不衰，充分说明其疗效的肯定，方含茯苓、猪苓、白术、泽泻、桂枝五味，具有渗湿利水、温阳化气的作用，是治疗因膀胱气化失司，引起小便不利诸证的良方。方中猪苓、茯苓淡渗，通膀胱而利水;泽泻甘淡性寒，直达膀胱，利水渗湿，泄膀胱之水，使小便通利，正如吴谦《医宗金鉴·删补名医方论》中云：“泽泻得二苓下降，利水之功倍，小便利而水不蓄矣”;白术健脾气而运化水湿，脾气运而九窍通，有温阳化气行水之功;桂枝助膀胱气化而通利小便;诸药配合，则膀胱利，水湿去。

中医药在国内临床治疗BPH应用很普遍，中医药在改善BPH症状、提高生活质量等方面均具有优势，中药的天然药物特性使不良反應也明显少于西药;中药开发成本的低廉也决定了中医药治疗BPH的价格优势。

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