FISH技术在乳腺癌HER-2基因检测中的应用价值分析

费炳友

【摘 要】目的：分析探究FISH技术在乳腺癌HER-2基因检测中的应用价值。方法：在2018年8月至2021年8月期间选择42例乳腺癌患者展开回顾性分析，以上42例患者采集的标本均接受FISH技术和IHC技术对其HER-2基因进行相应的检测，并比较不同检测技术的阳性符合率，观察经FISH技术对17号染色体多体发生的检测情况。结果：经不同检测技术检测其结果一致性相对较高（Kappa=0.544，P<0.05）。经IHC技术检测与经FISH技术检测在17号染色体多体发生率上无显著差异（P>0.05）。结论：在乳腺癌HER-2基因检测中无论是运用FISH技术还是IHC技术进行检测均具有较高的检出率，而其中导致两种检测技术结果出现偏差的因素在于17号染色体多体的发生率，临床中对于乳腺癌HER-2基因扩增检测可应用FISH技术进行操作，值得推广应用。

【关键词】FISH技术；乳腺癌HER-2基因；IHC技术；17号染色体

Analysis of the application value of FISH technology in breast cancer HER-2 gene detection

FEI Bingyou

Huai an Maternal and Child Health Care Hospital， Huaian， Jiangsu 223002， China

【Abstract】Objective：To explore the application value of FISH technology in HER-2 gene detection in breast cancer.Methods：42 breast cancer patients from August 2018 to August 2021were selected for retrospective analysis. All samples collected from the 42 patients were tested for their HER-2 gene by FISH and IHC and compared the positive compliance rate of different testing techniques to observe the detection of chromosome 17 by FISH.Results：Theconsistencyof different detection techniques was relatively high （Kappa=0.544，P<0.05）. There was no significant difference between the incidence of polysome on chromosome 17， as detected by IHC technology， and as detected by FISH technology（P> 0.05）.Conclusion：In the detection of HER-2 gene in breast cancer， both FISH technology and IHC technology have higher detection rate，and the factors leading to the deviation is the incidence of polysomy onchromosome 17. In clinical practice， the HER-2 gene amplification test of breast cancer can be operated by FISH technology， which is worthy of popularization and application.

【Key？Words】FISH technology； Breast cancer HER-2 gene； IHC technology； Chromosome 17

乳腺癌（Breast cancer）是临床中极为常见的恶性肿瘤之一，与宫颈癌并称为粉红杀手，具有极高的发病率和死亡率，近年来呈现出不断增长的趋势[1]。现阶段我国对于此类恶性肿瘤的主要研究重点在于原癌基因HER-2，大量的研究和实验发现乳腺癌患者中大约有20%～30%的患者其HER-2基因呈现为过表达情况，而HER-2基因也与患者预后、风险评估、内分泌治疗、化疗以及生物靶向治疗等有着密切的联系[2]。本文针对FISH技术在乳腺癌HER-2基因检测中的应用价值进行分析和观察，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

在2018年8月至2021年8月选择42例乳腺癌患者展开回顾性分析，其中男性1例，女性41例，年龄37岁～70岁，平均年龄（53.53±5.66）岁，其中浸润性小叶癌4例、浸润性导管癌38例。

纳入标准：符合乳腺癌临床诊断标准并经HE染色确诊者。

排除标准：合并心脏、肝肾等严重功能障碍者；拒绝参与本次研究者；临床资料不完整者；参与研究前接受辅助化疗者。

1.2 方法

采集本次研究所需标本，通过粗针穿刺活检或者手术切除进行获取，将其划分为两份，分别实施FISH技术和IHC技术进行相应的检测。

在进行FISH技术检测过程中，首先将标本切片选择二甲苯进行脱蜡操作直到其水化，而后将其放置在室温下分别使用100%、85%、70%的乙醇实施梯度脱水操作，每次脱水时间为2min，完成后將其放置在去离子水中实施浸泡操作，时间为30min，浸泡结束后在50℃之下将其放置在30%酸性亚硫酸钠溶液中，时间为30 min，并选择2×SSC缓冲液对切片实施洗片操作，反复2次洗片后将其放置在37℃的蛋白酶K溶液中进行浸泡，时间为4min～10min，然后再次实施洗片操作，再将其在室温下放置在0.1mol/L的盐酸中，时间为5min～10min；浸泡后再次进行洗片操作，而后分别在零下20℃的70%、85%、100%的乙醇中进行脱水操作，每次时间为2min；将其放置在室温下的丙酮中2min进而放置在空气中将其自然风干，完成后使用56℃对其实施烤片操作，时间为5min，并滴加10μL的探针混合液在上面，将温度转变为73℃静置5min达到变性之后，将切片放置在原位杂交仪中实施杂交操作，在42℃的湿盒中进行杂交，经过14hmin～18h，而后依次选择2×SSC、0.3%以及NP-40的洗涤液实施洗片操作，使得多于的探针全部洗掉，而后将其放置在室温的阴暗处进行干燥，并滴加10μL的DAPI显色液实施复染操作，最后盖玻片后可运用荧光显微镜进行仔细的观察[3]。

在进行IHC技术检测过程中，首先将标本切片进行脱蜡操作直到其水化，将其放置在枸橼酸钠缓冲液中进行微波加热操作，反复2次，每次时间均为5 min，而后对抗原进行修复，直到切片自然冷却与室温相同后选择PBS缓冲液对切片实施洗片操作，反复3次，并滴加工作浓度的一抗并将其放置在预热湿盒中，温度为37℃，时间为1 h，实施洗片操作；而后滴加辣根过氧化物酶标记的二抗，温度为37℃，孵化时间为30min，实施洗片操作；再次滴加100μLDAB显色液，而后使用自来水对切片进行冲洗，而后选择苏木素实施复染操作，并封片，将其放置在显微镜下仔细观察。

1.3 观察指标

比较不同检测技术的阳性符合率，观察经FISH技术对17号染色体多体发生的检测情况。

1.4 统计学分析

采用SPSS 24.0统计学软件进行数据分析。计数资料采用（%）表示，進行χ2检验，计量资料采用（χ±s）表示，进行t检验，P<0.05为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 不同检测方式检测结果比较

当IHC技术检测结果显示+++、++、+/0分别为6、32、4例的情况下，FISH技术检测结果与其的阳性符合率为83.33%（5/6）、93.75%（30/32）、25.00%（1/4），两种检测方式结果一致性相对较高（Kappa=0.544，P<0.05），见表1。

2.2 FISH技术在17号染色体多体发生的检测符合率

经IHC技术检测结果显示HER-2+++、++的患者中存在17号染色体多体发生的占比为15.79%（6/38），+/0患者中17号染色体多体发生的占比为25.00%（1/4）；经FISH技术检测结果显示以上42例患者中17号染色体多体发生占比为16.67%（7/42），对比无显著差异（2χ=0.016，P=0.903，P>0.05）。

3 讨论

乳腺癌对于患者生命安全和身心健康均会造成极大的威胁和影响，而其中HER-2基因属于原位基因，在临床中也被称之为C-erbB基因，通过大量的研究和实验证实其与乳腺癌的发病、疾病进展以及预后有着不可分割的联系，通过对HER-2基因扩张表达进行检测能为此类疾病治疗、预估预后提供重要的参考依据。现阶段对于HER-2基因检测方式最为常见的以FISH技术和IHC技术为主，IHC技术主要原理是以组织为基础的一种蛋白检测方式，由于HER-2基因扩增的情况下其肿瘤细胞也存在着极为显著的膜着色的情况，继而可提高检测符合率，其具有操作便捷、重复性高且检测费用较低的特点，然而蛋白极易在标本处理和固定过程中受到损害导致检测结果出现偏差，可见其存在一定的局限性[4]。而FISH技术是当前最新的一种分子细胞遗传学技术，目前被广泛应用于病毒感染分析、动植物基因组结构研究以及染色体精细结构变异等相关研究中，其原理是将组织作为研究基础，在石蜡包埋的组织块下通过检测基因拷贝数对患者HER-2基因水平进行判断，其具有极高的检验准确率，可有效规避绿色荧光对结果的干扰，因此也被作为HER-2基因扩增检测的金标准。根据本次研究结果深入分析可见，FISH技术具有极高的检测准确率，在临床的实际应用中，可将IHC技术作为早期筛查，对于HER-2基因高表达的患者可接受FISH技术进行相关的检测。

综上所述，在乳腺癌HER-2基因检测中无论是运用FISH技术还是IHC技术进行检测均具有较高的检出率，而其中导致两种检测技术结果出现偏差的因素在于17号染色体多体的发生率，临床中对于乳腺癌HER-2基因扩增检测可应用FISH技术进行操作，值得推广应用。

参考文献

[1] 鞠薇薇.FISH技术在乳腺癌HER-2基因检测中的应用价值评估[J].中国现代药物应用，2020，14（8）：237-238.

[2] 陈辉，汪小霞，沈勤，等.FISH检测在乳腺癌的非典型扩增和不确定病例中的应用价值[J].临床与实验病理学杂志，2019，35（1）：95-97.

[3] 刘继英，陈明光，韩明其，等.免疫组织化学法双色银染原位杂交与荧光原位杂交技术检测乳腺癌HER-2基因状态的应用[J].河北医学，2020，26（12）：1991-1995.

[4] 彭燕，郑细闰，刘红英，等.微滴式数字PCR与IHC联合FISH对乳腺癌新辅助化疗前后HER-2检测的分析[J].临床与实验病理学杂志，2021，37（1）：81-83.