HPLC 法测定小儿氨酚黄那敏颗粒的溶出度

2022-04-26李春阳朱银宏冯雪萍张海波

广州化工 2022年7期

李春阳, 朱银宏, 冯雪萍, 程倩, 张海波

小儿氨酚黄那敏颗粒是一种复方制剂, 其处方为对乙酰氨基酚125 g、马来酸氯苯那敏0.5 g、人工牛黄5 g 及适量辅料,临床上常用于治疗儿童普通感冒和流行性感冒, 因疗效显著,市场占有率较大[1-2]。现行标准与意见稿中仅规定用紫外分光光度法控制对乙酰氨基酚的含量, 专属性不强, 且未对其溶出度进行控制, 溶出度是评价药物质量的重要指标之一, 在一定程度上可预测药物在体内的溶出和吸收行为[3-6]。目前对于小儿氨酚黄那敏颗粒的报道多集中在含量测定方面[7-10], 未对其体外溶出行为研究控制。本文采用高效液相色谱法建立其主要成分对乙酰氨基酚溶出度的测定方法, 并进行了方法学验证,对不同厂家样品的溶出度进行测定, 为该产品的质量控制提供参考。

1 仪器与试药

1.1 仪器

1260 型高效液相色谱仪, 美国安捷伦公司; XSR205 型分析天平, 瑞士梅特勒-托利多公司; RC806D 型溶出度测定仪,天津市天大天发科技有限公司。

1.2 试药

对乙酰氨基酚对照品(批号10008 - 201610, 含量为99.9%), 中国食品药品检定研究院; 乙腈(色谱级); 水为纯化水; 其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 含量测定方法的建立

2.1.1 色谱条件与系统适用性

采用Waters Xbridge C18(4.6 mm×250 mm, 5 μm)色谱柱;流动相: A(0.2% 磷酸水)-B(乙腈)(梯度洗脱0 ～10 min,10%B; 10.5 ～15 min, 35%B; 15.5 ～22 min, 10%B); 流速:1.0 mL·min-1; 检测波长: 244 nm; 柱温: 30 ℃; 进样量:10 μL。在该色谱条件下进样分析, 结果对乙酰氨基酚与样品中其他成分分离度良好, 理论板数按对乙酰氨基酚色谱峰计算不低于10000。

2.1.2 对照品溶液制备

取对乙酰氨基酚对照品25 mg, 精密称定, 置100 mL 量瓶中, 加稀释剂适量(以溶出介质为稀释剂), 溶解后用稀释剂定容至刻度, 摇匀; 精密移取上述溶液2 mL, 置50 mL 量瓶中,用稀释剂定容至刻度, 摇匀, 即得。

2.1.3 供试品溶液制备

取本品, 按《中国药典》2020 年版通则0931 第二法, 以稀盐酸24 mL 加水至1000 mL 为溶出介质, 转速为50 r·min-1,温度为37 ℃, 依法操作, 30 min 时取溶液适量, 滤过, 精密量取续滤液2 mL, 置25 mL 量瓶中, 加稀释剂稀释至刻度, 摇匀。

2.1.4 阴性样品溶液的制备

称取按处方配制的辅料和其他成分适量, 用稀释剂制成不含对乙酰氨基酚的空白溶液, 按2.1 项下方法进样测定, 结果显示在对乙酰氨基酚色谱峰位置上未出现色谱峰, 说明其他成分不干扰对乙酰氨基酚的溶出度测定。对照品溶液、样品溶液、阴性样品溶液高效液相色谱图见图1。

图1 HPLC 色谱图Fig.1 HPLC chromatograms

2.1.5 线性关系考察

精密称取乙酰氨基酚对照品适量, 用稀释剂制成浓度为101.10 μg·mL-1的对照品储备溶液。精密量取上述溶液1、1.5、 2、 2.5、 3 mL, 分别置25 mL 量瓶中, 加稀释剂稀释至刻度, 摇匀。精密吸取10 μL, 按2.1 项下色谱条件进行测定,以对乙酰氨基酚质量浓度(μg·mL-1)为横坐标, 峰面积积分值为纵坐标计算回归方程, 得对乙酰氨基酚的回归方程为Y=78.635X-0.2698(r = 0.9999) 线性关系良好, 线性范围为4.04 ～12.13 μg·mL-1。

2.1.6 精密度试验

精密吸取浓度为10.08μg·mL-1的对乙酰氨基酚溶液, 按2.1 项下色谱条件重复进样5 次, 记录对乙酰氨基酚峰面积,RSD 为0.10%, 符合精密度要求。

2.1.7 稳定性试验

取供试品溶液依法在放置0、 2、 4、 6、 8、 12 h 后按2.1项下色谱条件进样测定, 结果RSD 为0.27%, 说明供试品溶液在12 h 内稳定。

2.1.8 重复性试验

制备6 份供试品溶液, 按2.1 项下色谱条件下分别进样测定, 计算平均溶出度分别为100.65%、 100.98%、 100.87%、99.64%、 100.10%、 101.37%, RSD 为0.63%, 说明该方法重复性良好。

2.1.9 回收率试验

按处方量制备除对乙酰氨基酚外的阴性样品, 按100%浓度分别加入对乙酰氨基酚对照品, 平行制备6 份, 按供试品溶液制备方法制备, 按照上述色谱条件, 分别精密吸取10 μL 进样测定, 记录色谱图, 计算平均加样回收率, 结果见表1。

表1 溶出度的回收率测定结果(n=6)Table 1 The results of recovery for dissolution(n=6)

2.2 溶出度测定

2.2.1 转法的选择

篮法和桨法是目前最常用的溶出度测定方法。目前市售的小儿氨酚黄那敏颗粒有1、 2、 3、 6 g 等包装规格, 另外本品处方中含有部分中药成分, 在溶出度的测定过程中有黏附转篮筛网的风险, 根据上述因素, 综合考虑最终选择桨法。

2.2.2 转速与取样时间的选择

溶出转速的筛选批次为19102801 的小儿氨酚那敏颗粒, 按照《中国药典》2020 版四部溶出度与释放度测定法第二法, 以稀盐酸24 mL 加水至1000 mL 为溶出介质, 分别比较50、 75 r·min-1两种转速, 依法操作, 分别于20、 30、 45、 60 min 时精密量取溶液10 mL 滤过, 精密量取滤液2 mL, 置25 mL 量瓶中, 加稀释剂稀释至刻度, 摇匀。按2.1 项下色谱方法测定溶出度, 结果表明, 取样时间为30 min 时, 两种转速的溶出度均达到90%以上。 50 r·min-1比75 r·min-1的实验条件更温和, 区分力更强, 更趋近人体胃肠蠕动的实际情况, 因此最终选择转速为50 r·min-1, 取样时间为30 min。

2.2.3 溶出介质选择

考察4 种溶出介质测定溶出度, 分别为盐酸溶液(24 mL 稀盐酸溶液用水稀释至1000 mL)、水、 pH 4.5 的磷酸盐缓冲液、pH 6.8 的磷酸盐缓冲液, 按照《中国药典》2020 版四部溶出度与释放度测定法第二法, 溶出介质体积1000 mL, 转速50 r·min-1, 温度37 ℃, 取样时间30 min, 依法操作, 按2.1 项下色谱方法测定溶出度。结果表明对乙酰氨基在不同介质中溶出度无明显差异, 同时参照《中国药典》收载收载对乙酰氨基酚片剂、胶囊剂、颗粒剂的溶出度测定, 最终选择盐酸溶液(24 mL 稀盐酸溶液用水稀释至1000 mL)为溶出介质。

2.2.4 样品测定

取4 批不同厂家样品, 每批6 袋, 照2.2 项下溶出度测定方法操作, 按照2.1 项下色谱条件进样测定, 计算每包样品的溶出度及每批样品的平均溶出度。结果表明样品在30 min 时溶出度均已超过标示量的95%, 见表2。

表2 不同批次的样品中对乙酰氨基酚溶出度测定结果Table 2 The dissolution results of paracetamol in different batches of drugs

3 讨论

3.1 波长选择

取对乙酰氨基酚对照品适量, 精密称定, 以溶出介质为稀释剂, 制成浓度为10 μg·mL-1的溶液, 对其进行全波长扫描,发现对乙酰氨基酚在244 nm 波长处有最大吸收, 与文献相同[11-13], 选择检测波长为244 nm。

3.2 流动相选择

考察了0.05 moL·L-1磷酸二氢钾缓冲液-甲醇、水-甲醇、水-乙腈、 0.2%磷酸水-乙腈(梯度洗脱)等色谱条件条件,结果以0.2%磷酸水-乙腈为流动相(梯度洗脱)条件下色谱峰分离度较好, 进一步比较0.2%磷酸水-乙腈不同梯度洗脱条件, 结果以正文中流动相条件对目标峰的出峰时间、峰形、分离度等均达到最佳状态。