牛病毒性腹泻病毒在新疆褐牛不同饲养阶段的感染情况调查

努尔赛力克·努素甫，阿斯哈提·哈山，王海军，陈荣贵*

（1.新源县农业农村局，新疆 新源县 835800；2.新疆伊犁州动物疾病控制与诊断中心）

牛病毒性腹泻病（Bovine viral diarrhea，BVD）是由牛病毒性腹泻病毒（Bovine viral diarrhea virus，BVDV）引起的一种重要的牛传染性疾病，临床上发病率高，传染性强，一般以发热、白细胞减少、口腔等消化道黏膜糜烂、坏死和腹泻为主要症状[1]。BVDV不仅可感染牛，也能感染山羊、绵羊、鹿等反当动物。同时也是生物制品血清、冻精的主要污染源。该病呈世界性区域分布，给全球畜牧业造成了巨大的经济损失[2]。中华人民共和国农业部发布第96号公告（2008年），将BVD定为三类疫病，世界动物卫生组织（OIE）也将该病列为法定报告的动物疫病及国际动物胚胎交流病原名录三类疫病。

新疆牛存栏数一直居全国前列，不同地区也存在BVDV 感染。王龙[3]对新疆16 个不同牛场1 171份牛血清进行抗原和抗体检测，结果表明，BVDV 抗体阳性率高达90.0%～98.5%，抗原阳性率为1.5%。王青青[4]对新疆南疆地区的14 个规模化奶牛场采集的1 555 份血清样品进行检测，结果显示，BVDV平均抗体阳性率为84.48%，抗原阳性率为0.78%，可见BVDV 在新疆地区的感染率非常高。目前关于新疆伊犁哈萨克自治州褐牛BVDV感染的报道较少，为了解BVDV在伊犁哈萨克自治州褐牛规模化养殖场不同饲养阶段的感染情况，我们进行了BVDV抗原和抗体检测，以为该病的疫苗免疫和净化提供科学依据。

1 材料与方法

1.1 试验材料

1.1.1 血清样品

在新疆伊犁哈萨克自治州某褐牛场针对哺乳期犊牛（0～3月龄）、断奶期犊牛（4～6月龄）、育成牛（6～12月龄）、育肥牛（12～18月龄）、妊娠母牛和哺乳母牛分别采集2份血液样品，一份分离血清，另一份加入肝素抗凝，-20 ℃保存备用。

1.1.2 实验设备

微量移液器、伯乐酶标仪、高速冷冻离心机（Thermo 公司）、PCR仪（Thermo 公司）、恒温生化培养箱、生物安全柜、琼脂糖凝胶电泳仪和伯乐凝胶成像系统（北京六一仪器厂）等。

1.1.3 主要试剂

牛病毒性腹泻病毒抗体检测试剂盒、牛病毒性腹泻病毒抗原检测试剂盒，均购自IDEXX公司。

1.2 试验方法

1.2.1 抗原和抗体ELISA检测

采用ELISA方法检测BVDV抗体和抗原，具体步骤按照牛病毒性腹泻病毒抗体/抗原检测试剂盒说明书进行检测。检测前将试剂盒从4 ℃冰箱中取出恢复至室温。

1.2.2 结果判定

BVDV抗体ELISA结果判定：当P-N ≥0.150且NC≤0.25时，检测结果有效。腹泻病毒抗体是否存在由S/P值决定：S/P ＜0.20，BVDV抗体阴性；0.2 ＜S/P ≤0.3，BVDV抗体可疑；S/P ≥0.30，BVDV抗体阳性。

阴性对照和阳性对照平均值计算公式：

式中：NC为阴性对照OD值的平均值；PC为阳性对照OD值的平均值；P-N为PC与NC之差。

BVDV抗原ELISA结果判定：被检样品OD值-阴性对照OD值≤0.300，判定为抗原阴性；＞0.300，判定为抗原阳性。

1.2.3 数据分析

对所有检测数据用Excel软件进行汇总分析。

2 结果与分析

2.1 血清抗体检测结果

由表1可知，6个不同饲养阶段牛群血清中和试验检测的BVDV阳性率分别为85.0%、38.7%、85.2%、87.0%、82.5%和89.8%，其中断奶期犊牛（4～6月龄）抗体阳性率最低，哺乳母牛抗体阳性率最高。621份样品中，总抗体阳性率为80.2%。牛BVDV抗体阳性率所反映的是牛以往感染BVDV的情况以及母源抗体或疫苗免疫状况，说明80.2%的牛具备抵抗BVDV感染的能力。通过血清学检测BVDV抗体阳性率，对伊犁地区褐牛牛病毒性腹泻的防治有一定的参考价值。

表1 不同饲养阶段褐牛牛病毒性腹泻病毒抗体检测结果

2.2 抗原检测结果

表2 不同饲养阶段褐牛牛病毒性腹泻病毒抗原检测结果

6个不同饲养阶段牛群的样品抗原检测的阳性率分别为0%、0%、0%、0.8%、0%和0.9%。在育肥牛和哺乳母牛牛群中各检测出1头抗原阳性牛，可能为持续感染牛（persistentlyinfected，PI），并在2周后对这2头阳性牛进行复检，检测结果仍为阳性，因此，判定这2头阳性牛为PI牛，建议牛场进行隔离清除。

3 结论与讨论

BVD一直以来都是威胁牛群健康的重要传染性疾病之一，会对牛群生育力、呼吸系统、消化系统、产奶量等产生严重的影响，进而影响中国畜牧业的快速发展。根据欧洲国家的BVD防控经验，我们应在以下方面做好相关工作：（1）快速识别和剔除持续感染牛；（2）密切监测牛场的BVD感染状况；（3）严格限制妊娠动物移动；（4）严格落实养殖场生物安全措施，高效保护易感动物。在牛养殖密度高的地区，BVD只能通过预防与接种疫苗相结合来控制。在以往的BVD流行病学调查中，主要调查整个养殖场牛血清的阳性率，很少报道和分析不同饲养阶段牛的血清阳性率。本研究调查发现，3～6月龄断奶犊牛血清抗体阳性率为38.7%，远低于平均抗体阳性率（80.2%），感染风险最高，其他饲养阶段血清阳性率都在80%以上，推测3～6月龄犊牛血清抗体阳性率较低的主要原因可能是母源抗体消减导致。因此，建议在进行疫苗免疫时，重点对3～6月龄断奶犊牛进行免疫防控。

依据BVDV血清抗体阳性率超过80%的牛场判定为高风险牛场的标准[5]，本研究中该牛场总抗体阳性率为80.2%，超过80%，因此，有可能存在PI牛。通过进一步进行PI牛的筛查，检测筛查到2头PI牛。随着诊断技术的发展，运用ELISA方法检测BVDV抗原和抗BVDV特异性抗体的技术在不断改进，使得低成本实现大规模筛选成为可能。通过病毒学筛查，可以识别并消除持续感染的动物，从而达到对牛场BVDV的净化。