不同加工方法对雪峰山天麻主要成分含量的影响研究

◎ 范炜平，陈妮妮，伍贤进，方 伟,3

（1.怀化学院 生物与食品工程学院，湖南 怀化 418008；2.山地生态食品精深加工湖南省普通高等学校重点实验室，湖南 怀化 418008；3.民族药用植物资源研究与利用湖南省重点实验室，湖南 怀化 418008）

天麻（Gastrodia elata）为兰科植物天麻的干燥块茎，具有息风止痉、平抑肝阳、祛风通络、神经保护、降血压和抗惊厥等功效[1-2]。天麻主要含天麻素、对羟基苯甲醇、蛋白质、多糖以及微量元素等化学成分。目前对于天麻加工方法多为蒸煮或硫磺熏蒸后干燥或直接干燥。本实验采取4种加工方法进行对比，首先是传统的煮制与蒸制工艺，其操作简单成本低，其中蒸制工艺较其他研究略有不同，是采取蒸汽灭菌锅蒸制。考虑到这2种加工方法都会使天麻与水接触后再进行干燥，所以增加直接杀青干燥方法作对比。此外，本实验还采用一种贵州民间糯米合蒸法。这4种方法较为全面且糯米合蒸法现无人研究，遂将其加入本实验进行研究，与其他几种方法进行比较，以期为雪峰山天麻的综合深加工利用提供参考。

1 材料与方法

1.1 材料和设备

新鲜天麻样品，2019年11月采自湖南省绥宁市，经怀化学院伍贤进教授鉴定为兰科植物天麻G. elata的块茎。101-3A型电热鼓风干燥箱、循环水真空泵、UV-1800紫外分光光度计和中草药粉碎机等。

1.2 天麻预处理

首先将新鲜天麻清洗晾干切片处理，取3 kg左右的天麻进行120 ℃杀青30 min、70 ℃恒温干燥箱烘干至恒重（A组）。取3组3 kg左右的天麻分别放入高压蒸汽灭菌锅蒸40 min（B组）、沸水煮24 min（C组）、放于泡了12 h的8 kg糯米中蒸90 min（D组），70 ℃烘干至恒重后粉碎，过60目筛，得到天麻样品粉末放入干燥器中备用。

1.3 多糖提取实验

每组精密称取3份干燥天麻粉末约0.25 g，放入圆底烧瓶内加150 mL 80%的乙醇混匀，将圆底烧瓶放入恒温水浴锅中进行回流，1 h后取出烧瓶趁热过滤，倒掉废弃滤液，吸取10 mL 80%的热乙醇清洗烧瓶内的残渣3次后再次过滤，将滤纸与残渣一并留在圆底烧瓶内，加入150 mL的蒸馏水再次回流1 h，取出趁热过滤后用10 mL热蒸馏水洗涤烧瓶内残渣4次，丢弃残渣将滤液与洗液合并，放冷后转移至250 mL容量瓶内并定容，摇匀待测。

1.4 蛋白质提取实验

每组精密称取3份干燥天麻粉末约0.1 g，放入干燥研钵中，加几滴磷酸缓冲液均匀研磨至匀浆后转移至平底抽滤瓶中抽滤。抽滤过后再用少许磷酸缓冲液进行冲洗再次抽滤，将滤液取出置于25 mL容量瓶中，用磷酸缓冲液定容，摇匀待测。

1.5 标准曲线绘制

1.5.1 葡萄糖标准曲线绘制

精确吸取标准溶液0 mL、0.l mL、0.2 mL、0.3 mL、0.4 mL、0.5 mL和0.6 mL分别置于7个10 mL具塞刻度试管中，蒸馏水定容至2 mL，摇匀后浸于冰水浴，分别滴加0.2%的蒽酮-硫酸溶液8 mL，摇匀，沸水浴加热10 min，再冰水浴冷却10 min，于582 nm处测定吸光值。以吸光值为纵坐标y，葡萄糖浓度为横坐标x，绘制标准曲线，得回归方程y=3.540 3x+0.039 3，r=0.999 1。

1.5.2 蛋白标准曲线绘制

在试管中分别加入 0.1 mL 0 μg·mL-1、20 μg·mL-1、40 μg·mL-1、60 μg·mL-1、80 μg·mL-1和 100 μg·mL-1的牛血清蛋白标准溶液，然后再避光加入5 mL考马斯亮蓝G-250溶液。充分摇匀后，避光静置2 min，于595 nm处测定吸光值。以吸光值作为纵坐标y，牛血清蛋白浓度作为横坐标x，绘制标准曲线，得出回归方程y=0.005 3x+0.081 4，r=0.999 1。

1.6 天麻多糖与蛋白含量测定

1.6.1 天麻多糖含量测定

精密量取上述1.3方法制得的多糖溶液1 mL，置10 mL具塞干燥试管中（平行3组），加水1 mL，摇匀，冰水浴中缓缓滴加0.2%蒽酮-硫酸各8 mL，混匀，后置于沸水浴中加热10 min，再置于冰水浴中冷却10 min，在582 nm波长处测得吸光值。将吸光值代入1.5.1回归方程，即得所测天麻样品中多糖含量。

1.6.2 天麻蛋白含量测定

精密量取上述1.4方法制得的蛋白溶液1 mL，置10 mL具塞干燥试管中（平行3组），加水1 mL，然后再避光加入5 mL考马斯亮蓝G-250溶液。充分摇匀后，避光静置2 min，于595 nm处测得吸光值。将吸光值代入1.5.2回归方程，即得所测天麻样品中蛋白含量。

1.7 天麻素与对羟基苯甲醇测定

色谱条件：色谱柱为Wondasil C18柱，以乙腈-0.05%磷酸溶液（3∶97）为流动相；检测波长为220 nm；进样体积为5 μL。

标准品制备：取天麻素和对羟基苯甲醇对照品，加乙腈-水（3∶97）混合溶液制成每1 mL含天麻素50 μg、对羟基苯甲醇25 μg的混合溶液。

供试品制备：精密称取天麻粉末约2 g置于具塞锥形瓶中，加入稀乙醇50 mL，称定重量后超声处理（功率120 W，频率40 kHz）30 min，放冷后再次称定重量，用稀乙醇补足减少的重量，抽滤，取续滤液10 mL，置于旋转蒸发仪中浓缩至近干无醇味，残渣用适量乙腈-水（3∶97）混合溶液进行溶解，转移至25 mL容量瓶中，用乙腈-水（3∶97）混合溶液稀释至刻度，摇匀抽滤（0.45 μm微孔滤膜），取滤液。将各样品的滤液用EP管保存并贴好标签。

2 结果与分析

2.1 不同加工方法对天麻多糖与蛋白含量的影响

由表1可知，在多糖含量的测定中，C组的多糖含量最高，其次是A组、B组、D组，且组间两两比较，差异均具有统计学意义，所以就多糖含量来看，煮制法优于其他方法。在蛋白质含量的测定中，A组＞D组＞B组和C组，除B组和C组差异无统计学意义之外（p＞0.05），其余各组间比较，差异均具有统计学意义（p＜0.05），就蛋白质含量这一因素来看，直接杀青干燥法优于其他方法。

表1 不同加工方法对天麻多糖与蛋白含量影响表

2.2 不同加工方法对天麻的天麻素与对羟基苯甲醇含量的影响

根据1.7的色谱条件，记录天麻素和对羟基苯甲醇标准品及各组天麻样品在30 min内的高效液相色谱图（图1）。其中天麻素的出峰时间为12.5 min，对羟基苯甲醇出峰时间为24 min。利用峰面积计算出所测样品中天麻素和对羟基苯甲醇的含量。

由表2可知，从对羟基苯甲醇含量来看，C组最高，A组最低；然而从天麻素含量来看，A组最高，D组最低。其原因可能是由于天麻中的酚类成分，如对羟基苯甲醇，会在一定的温度、湿度和压力条件下发生降解反应，转化形成天麻素，从而使得测定的天麻素含量A组要高于D组，而对羟基苯甲醇含量A组却低于D组[3]。

表2 各组天麻素与对羟基苯甲醇的含量表

3 结论与讨论

本实验4组样品中天麻素和对羟基苯甲醇含量之和均达到《中华人民共和国药典》的标准（即天麻素和对羟基苯甲醇含量之和不小于0.25%）。其中以多糖含量为指标时得出的结论与周碧乾等[4]一致，均为煮制法优于蒸制法。但在以天麻素和对羟基苯甲醇为指标的检测中，周碧乾等[4]实验结果显示蒸制和煮制这两组天麻素含量分别为（4.57±0.65）mg·g-1和（3.45±1.16）mg·g-1，对羟基苯甲醇含量分别为（0.74±0.28）mg·g-1和（1.03±0.82）mg·g-1，可见天麻素和对羟基苯甲醇含量均低于周碧乾等的结果。可能是由于周碧乾等采用的是梯度洗脱且进样量为本实验的两倍，而本实验采用的色谱条件为《中华人民共和国药典》规定条件。

此外本实验采用新加工方法糯米合蒸法，实验结果表明此法除含水量较其他几种方法较少外，在4种成分含量指标上均无优势。但与天麻合蒸的糯米是否具有某种有益的功能也有待研究，可以针对糯米合蒸法设置其他多个指标进行详细研究。经过分析对比，本实验中采用的多糖提取法与陈琛等[5]采用的提取方法类似，得出的多糖含量也与之相近。但王锐等[6]测得的天麻多糖含量为10%～20%，与其相比，本实验多糖含量偏少，推测可能是在第2次回流后过滤环节损失了较多的多糖，以至于最后测定的结果偏低。