萨能奶山羊同期发情与定时输精方法探究

2022-04-15陆晓雨孙国正范宇伟吴兴龙李相运

中国畜牧杂志 2022年4期

张静，陆晓雨，孙国正，范宇伟，吴兴龙，李相运*

（1.河北农业大学动物科技学院，河北保定 071000；2.上海牧齐牧业科技有限公司，上海 201514）

萨能奶山羊产奶量高、抗病能力强，是当今世界上乳用奶山羊的代表品种，但奶山羊,发情具有明显的季节性，利用同期发情技术调整奶山羊的自然发情周期，能够提高繁殖效率，为实现全年供奶提供技术支持。目前常见的奶山羊同期发情方法有孕酮栓（12～15 d）+马绒毛膜促性腺激素（eCG）法、短期孕酮栓（5～6 d）+PGF2+eCG 法或短期孕酮栓（5～6 d）+PGF2+GnRH法等程序，并在撤栓后36～42 h 输精2 次。不同的方案与输精时间对不同季节、不同胎次、不同生理时期的萨能奶山羊的繁殖效果不同，不能满足市场对全年供奶的需求。此外，阴道黏液的变化反映雌性的生殖状态，将黏液状态作为判断发情、排卵的辅助指标能够更快、更便捷地确定最佳输精时间，提高受胎率。因此，为探究适合萨能奶山羊的最佳同期发情与定时输精方法，本实验采用孕酮栓+eCG 的方法对过渡时期（7 月）以及繁殖季节（11 月）的母羊进行同期发情处理，结合黏液状态，探究适合萨能奶山羊的同期发情与定时输精方案，提高受胎率，简化配种工作，为萨能奶山羊的高效繁殖提供技术支持。

1 材料与方法

1.1 实验动物和场地实验地点位于甘肃省庆阳市环县萨能奶山羊羊场。实验时间分别为2019 年11 月繁殖季节和2020 年7 月过渡时期2个阶段。试验分为5 组，A 组为1 100 只繁殖季节的青年萨能奶山羊，B、C 组分别为过渡时期的245 只青年羊和259 只经产母羊，D、E 组分别为泌乳后期停止挤奶的母羊125 只和46 只。试验母羊在2～5 岁，体重30 kg 以上，膘情中等，无生殖道疾病。母羊全部舍饲，每天定时饲喂2 次燕麦草和苜蓿草，自由饮水和舔食矿物盐砖。

1.2 同期发情实验母羊通过埋置阴道海绵栓（含45 mg氟孕酮，上海牧齐牧业科技有限公司）进行同期发情处理，埋栓当天记为0 d，于15 d 撤栓，同时每只母羊肌肉注射马绒毛膜促性腺激素（eCG）330 IU（1000 IU/瓶，宁波三生生物科技有限公司）。

1.3 定时输精为减小季节对精液的影响，采集萨能种公羊的新鲜精液后对原精活力进行评估，选择活力/密度>0.7 的种公羊精液，使用30℃预热的伊利脱脂牛奶作为稀释剂将精液稀释5～10 倍（稀释后精液活力>0.5，精子密度>4×10/mL），置于30℃恒温水浴锅内备用。A～D 组母羊均在撤栓后40 h 和48 h 输精2 次；E 组母羊在撤栓后48 h 和56 h 输精2 次。输精方法为子宫颈口内输精。输精时，试验羊倒立保定，用温生理盐水清洗并擦拭外阴部，通过开膣器打开阴道，使用头灯观察并定位子宫颈口，利用羊专用输精器（保定正木生物科技有限公司）吸取0.3 mL 精液，并缓慢注入子宫颈口内。若有黏液遮挡子宫颈口，则使用黏液管吸取干净以免影响输精。过渡期的D、E 两组母羊在放栓时每只羊注射2 mL 苯甲酸雌二醇注射液（四川省泰信动物药业有限公司）。

1.4 黏液检查输精时详细记录每只母羊阴道黏液的外观状态，包括黏液量、粘稠度以及颜色。

1.5 妊娠检查输精后40 d 由1 名固定人员使用B 超检测仪（DP-30Vet，深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司）经腹壁对受配母羊进行妊娠检查，统计每组母羊的受胎率。受胎率=妊娠母羊数/受配母羊数×100%。

1.6 统计分析利用 Excel 软件整理数据，用SPSS 19.0 进行数据分析，各组奶山羊受胎率之间的显著性检验采用卡方检验，<0.05 为差异显著。

2 结果

2.1 同期发情方案对各组山羊同期效果的影响撤栓后40 h 对试验母羊进行试情，发情结果如表1 所示，繁殖季节的A 组母羊同期发情效果最好，过渡时期的B、C组母羊发情较好，但D、E 组泌乳母羊的发情效果一般，这说明本实验的同期方案虽对不同时期的母羊均可行，但青年羊和断奶经产母羊的同期效果更好。

表1 各组奶山羊同期发情效果统计表

2.2 同期方案与输精时间对不同季节和生理状态奶山羊受胎率的影响由表2 可知，A 组繁殖季节青年羊的受胎率为85.9%，高于相同处理的过渡时期B、C、D 组（<0.05）。B 组青年羊受配245 只，妊娠166 只，受胎率为67.8%；C 组经产母羊受配259 只，妊娠159 只，受胎率为61.4%，不同胎次间受胎率差异不显著。D 组泌乳母羊受配200 只，妊娠94 只，受胎率为47.0%；E组泌乳母羊受配69 只，妊娠35 只，受胎率为50.7%。D、E 组不同输精时间的泌乳母羊受胎率差异不显著。

表2 同期发情与定时授精方案对萨能奶山羊受胎率的影响

2.3 输精时阴道黏液状态与受胎率高低的相关性过渡时期奶山羊在输精时的黏液状态与受胎率的对比情况如表3 所示，撤栓后40 h，经产母羊的黏液为大量透明清亮黏液，青年羊黏液量比经产羊少且呈拉丝状，泌乳母羊呈少量半透明拉丝状。撤栓后48 h，经产母羊黏液量开始减少并出现拉丝状，青年羊的黏液变化较小呈浑浊拉丝状，泌乳母羊的黏液开始变得浑浊和粘稠。撤栓后56 h，泌乳母羊的黏液呈粘稠状。结果显示，在撤栓后相同输精时间内，经产母羊的黏液最清亮，发情阶段最早，受胎率较低，青年羊的黏液较粘稠且呈拉丝状，受胎率较高。泌乳母羊黏液虽然很浓稠，但受胎率较断奶母羊低。

表3 过渡时期萨能奶山羊输精时的黏液状态与受胎率高低的比较

3 讨论

3.1 不同季节对萨能奶山羊受胎率的影响奶山羊属于短日照发情动物，在自然条件下，非繁殖季节以及过渡时期的发情率和受胎率均低于繁殖季节。本试验分别在繁殖季节和过渡时期对萨能奶山羊进行了同期发情与定时输精处理。在处理方案与输精时间一致的条件下，A 组繁殖时期的青年羊获得85.9%的受胎率。同时在过渡时期的B 组青年羊和C 组经产母羊中获得了较高的受胎率，D、E 组泌乳后期的母羊也获得了近50%的受胎率。这说明本实验的同期发情和定时输精方法适合在繁殖季节以及过渡时期的萨能奶山羊中推广应用。后期将继续在繁殖季节探究本试验的同期方案对经产羊以及泌乳后期母羊受胎率的影响。

3.2 不同胎次对萨能奶山羊受胎率的影响本试验分别在繁殖季节和过渡时期使用孕酮栓+eCG 的方法对萨能奶山羊进行同期发情和人工输精，评估胎次与受胎率之间的关系。结果表明，撤栓后40 h 和48 h 输精两次，繁殖季节的青年奶山羊获得了很高的受胎率；同时过渡时期的青年羊和经产母羊也获得了不错的受胎率，且青年羊的受胎率略高于经产母羊。这些数据表明本试验方案能够使不同胎次的萨能奶山羊均获得不错的受胎率，而输精时间更接近青年羊的排卵时间。关于排卵时间的文献中指出，使用孕酮栓+hCG 同期发情的母羊从注射hCG 到排卵，青年羊比经产母羊早约5～10 h。这均与本试验的结论一致。对文登奶山羊使用孕酮栓+eCG 的方法进行同期发情和人工输精，第1 胎（青年羊）的受胎率（81.8% VS 57.1%）也显著高于第2 胎（经产母羊）。推断本试验的同期方案也存在青年羊排卵早于经产羊的现象。因此，使用孕酮栓+eCG 对萨能奶山羊进行同期处理并在撤栓后40 h 和48 h 输精，青年羊和经产羊均获得较好的受胎率，若适当推迟经产羊的输精时间6～8 h，有望获得更高的受胎率，后期将继续设计试验进行验证。

3.3 不同输精时间对奶山羊受胎率的影响 D、E 2 组母羊的输精时间相差8 h，输精较晚的E 组母羊受胎率略高，但二者差异不显著。结果说明将输精时间推迟到撤栓后48 h 和56 h，受胎率未受影响。大多数关于山羊定时输精的文献报道中，输精时间都在撤栓后36～42 h 之间。而使用孕酮栓+eCG 法同期发情处理的母羊，在撤栓后54～56 h 内进行单次阴道输精，获得了较高的受胎率，这与本试验结果一致。此外，使用孕酮栓+eCG的方法对努比亚山羊进行同期发情处理，约65% 的母羊在撤栓后25～48 h 内发情，27%的母羊在49～72 h 内发情，而大部分母羊在撤栓后56 h 左右到达发情末期并输精，这些均与E 组母羊的输精时间一致。因此，将萨能奶山羊的输精时间推迟至撤栓后48 h 和56 h，既能包含更多的排卵母羊以提高受胎率，又能使输精时间相对自由，避免出现白天撤栓，晚间输精的问题。

3.4 雌二醇对泌乳母羊受胎率的影响雌二醇是一种甾体雌激素，具有很强的性激素作用。在放栓期间对D、E 2 组泌乳奶山羊注射2 mL 雌二醇并获得了近50%的受胎率，猜测雌二醇起到了促进发情的效果。有研究在繁殖季节对奶山羊注射6 mg 苯甲酸雌二醇，能够提高羊群的发情同期性与受胎率。而在埋栓当天给肉牛注射2 mg 雌二醇，并于7 d 后撤栓，发情比例与受胎率也均显著升高。这与本试验结果类似。猜测在埋栓期间注射雌二醇能够对排卵起到促进作用，提高发情的同期性和排卵率。另外，对同期发情的奶牛注射苯甲酸雌二醇12 h 后，增加了LH 的峰值和持续时间，起到了促排的作用。因此，为缩短空怀时间，实现全年产羔，对于泌乳后期的母羊可以在现有同期发情方案的基础上，配合雌二醇的使用，促进泌乳母羊的干奶及发情，提高妊娠率。

3.5 输精时的黏液状态与受胎率阴道黏液变化可反映雌性的生殖状态，与排卵和最佳输精时间密切相关。反复经直肠超声检测排卵时间的工作在生产实践中不便执行。因此，通过对阴道黏液状态的直接观察能更简单地判断排卵并确定最佳输精时间。阴道黏液的变化主要由发情旺盛时期的大量、透明，随后变为半透明拉丝状，再变为发情中后期的混浊和浓稠。本实验对过渡时期4 组母羊黏液分泌情况的统计发现，在撤栓后相同的时间输精时，青年羊的黏液呈现拉丝状，发情阶段晚于经产母羊，获得了较高的受胎率，即本实验的输精时间更接近青年羊的排卵时间。有类似的研究表明，在黏液较多且有拉丝状的时候输精，妊娠率获得提高，这与本试验结果一致。在小反刍动物中，卵泡破裂之前卵泡的直径通常会减少，而宫颈黏液从透明状到半透明拉丝状的时候卵巢上有更大的有腔卵泡，说明大多数排卵发生在黏液由半透明变浑浊的阶段。因此，宫颈黏液检查的简便性使其成为确定人工授精最佳时间的一种非常有用的方法，在黏液开始变浑浊的时期输精能够增加精子遇到卵子的概率，获得更高的受胎率。