桂皮醛牙周缓释制剂制备工艺研究

冯淑萍

（山西省运城市综合检验检测中心，山西 运城 044000）

牙周疾病是由牙周袋内致病微生物引起的局部细菌感染性疾病。牙周可疑致病菌对多种抗菌药物敏感，其用药方法较多，包括漱口、冲洗、系统用药、局部应用缓释和控释药。局部缓释制剂因可减少全身用药不良反应、局部药物浓度高、持续时间长、限制或无系统性摄入等诸多优点，现成为牙周病治疗的主要用药方式[1-3]。

桂皮醛是桂皮的主要活性成分，大量药理研究表明，其具有抗炎、解热镇痛、抗肿瘤、抗菌、降糖、抗肥胖等多种药理活性[4]。桂皮醛在一定药物浓度范围内无毒害作用，实验数据表明桂皮醛有很强的抑制牙周致病菌的能力[5-6]。但桂皮醛进入体内后，能很快被代谢[7]，在口腔部位药物极少，难以达到治疗效果。本文将桂皮醛试制成缓释制剂，注射于口腔患部，使药物直接与患部接触，通过黏膜吸收，发挥其抗炎镇痛之功效。

1 仪器与试药

1.1 仪器

LC-2010 AHT高效液相色谱仪（紫外可见光检测器）；A120P型电子天平（德国Sartorius公司）；DL-720超声仪（浙江象山石浦海天电子仪器厂）；85-2恒温磁力搅拌器（常州丹瑞实验仪器设备有限公司）。

1.2 试药

桂皮醛（中国食品药品检定研究院，批号：110710-201016）；羟丙基纤维素（上海金贸泰化工有限公司）；聚丙烯酸树脂IV（沈阳利德尔化工制剂技术有限公司）；丙二醇（上海玉博生物科技有限公司）；三醋酸甘油酯（宜兴市凯欣化工有限公司）；甲醇为色谱纯；水为蒸馏水。

2 方法与结果

2.1 方法学考察

2.1.1 色谱条件 色谱柱：岛津VP-ODS（250 mm×4.6 mm，5 μm），十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相：乙腈-水（35:75）；检测波长为290 nm；流速：1.0 ml/min；柱温：30 ℃；进样量：10 μl。

2.1.2 对照品溶液的制备 精密称取桂皮醛对照品适量，加甲醇制成每1 ml含桂皮醛80 μg的溶液，作为对照品溶液。

2.1.3 供试品溶液的制备 取生物半透膜，用水洗净，置生理盐水中待用。取直径为1.2 cm的Frank释放池，两池之间放半透膜，在膜的一侧供给室放缓释制剂约0.8 mg，以蒸馏水为溶出介质，另一侧接受池中加入蒸馏水15 ml，于37 ℃保温，并以120 r/min磁力搅拌。分别于24，48，72，96，120 h取出接收池的全部释放介质，并补充新鲜的释放介质。取出的释放介质进样前用0.45 μm微孔滤膜滤过，作为供试品溶液。

2.1.4 线性关系考察 精密吸取对照品溶液1，2，4，8，12，16，20 μl，注入液相色谱仪，测定峰面积，得回归方程y=4 974 429.77x+56 475.05，r=0.9996，表明进样量在0.02～2.4 μg范围内线性关系良好。

2.1.5 精密度试验 取对照品溶液，按2.1.1项下色谱条件，重复进样6次，测定峰面积，RSD为0.3 %（n=6），表明仪器精密度良好。

2.1.6 稳定性试验 取供试品溶液，按2.1.1项下色谱条件分别于0，2，4，8，12，24 h进样，测定峰面积，RSD为1.2 %，表明供试品溶液在24 h内稳定性良好。

2.1.7 重复性试验 精密称取缓释制剂6份，按2.1.3项下方法制备供试品溶液，测定峰面积并计算体外释放率，结果平均体外释放率为94.21 %，RSD为1.6 %（n=6），表明方法重复性较好。

2.1.8 加样回收试验 精密称取已知含量的桂皮醛牙周缓释制剂，精密加入7.5 mg/ml的桂皮醛对照品溶液，按2.1.3项下方法制备供试品溶液，按2.1.1项下色谱条件进样测定，测得平均回收率为99.32 %，RSD为1.2 %（n=9），表明方法回收率较好，结果见表1。

表1 加样回收试验结果

2.2 桂皮醛牙周缓释制剂的制备

参考相关文献[8-11]，筛选生物降解性良好并适于注射给药的缓释物质作为载体材料，结合材料自身性质与牙周缓释制剂的特点进行前期预试验，确定该制剂的配方组合。通过处方筛选与优化，确定桂皮醛牙周缓释制剂的制备工艺：称取适量聚丙烯酸树脂IV和羟丙基纤维素，置干燥烧杯中，加入三醋酸甘油酯，60 ℃下搅拌1 h，使聚丙烯酸树脂IV和羟丙基纤维素溶解，置于室温2 h使其自然溶胀。称取适量桂皮醛，置于干燥烧杯中，加入丙二醇，充分搅拌使其溶解。之后将溶有聚丙烯酸树脂IV和羟丙基纤维素的三醋酸甘油酯与溶有桂皮醛的丙二醇混合，搅拌均匀，制得缓释制剂。

2.3 处方筛选与优化

2.3.1 羟丙基纤维素含量对释放率的影响 制备羟丙基纤维素含量分别为1 %，5 %，10 %，20 %的桂皮醛牙周缓释制剂，考察处方中不同含量羟丙基纤维素对体外释药的影响。分别测定2，12，24，48，72，96，120 h药物的释放量，计算桂皮醛累积释放百分率。结果见表2。

表2 羟丙基纤维素含量对释放率的影响

由表2可见，羟丙基纤维素含量对桂皮醛的累积释放率影响不大，考虑到制剂中其含量过高，将影响主药桂皮醛的溶解，因此选择羟丙基纤维素含量不超过5 %，进行进一步实验。

2.3.2 聚丙烯酸树脂IV含量对释放率的影响 制备聚丙烯酸树脂IV含量不同（1 %，10 %，15 %，20 %）的桂皮醛牙周缓释制剂，考察处方中不同含量聚丙烯酸树脂IV对体外释药的影响。分别测定0.5，2，24，48，72，96，120 h药物的释放量，计算桂皮醛累积释放百分率。结果见表3。

表3 聚丙烯酸树脂IV含量对释放率的影响

由表3可见，聚丙烯酸树脂IV含量为1 %时，释药量在2 h达到80 %，随聚丙烯酸树脂IV含量增大，释药速率减慢，缓释效果更加明显。选择聚丙烯酸树脂IV含量15 %～20 %进行后续研究。

2.3.3 正交试验优选制备工艺 选用L9（34）因素水平表，在单因素试验基础上，结合成分性质及生产实际确定每个因素的适宜范围，以聚丙烯树脂IV含量、羟丙基纤维素含量、桂皮醛含量为试验因素，各因素水平见表4。以桂皮醛累积释放率为指标，考察三醋酸甘油酯相:丙二醇相=2:1（m:m）条件下，各因素水平对释放率的影响，结果见表5～7。

表4 L9（34）正交试验因素水平表

由表5可见，各因素对累积释放率的影响大小顺序为A＞C＞B，即聚丙烯树脂IV的含量影响最明显，其次为桂皮醛载药量与羟丙基纤维素。由方差分析可知，因素A（聚丙烯树脂IV含量）对累积释放率的影响最大，但均无统计学意义。

表5 正交试验结果分析

表6 方差分析结果

根据表7结果，结合体外释放率及缓释性两个考察指标，确定最优制备工艺为A2B2C3，即聚丙烯酸树脂IV、羟丙基纤维素、桂皮醛含量分别为18 %，3 %，3 %，三醋酸甘油酯相:丙二醇相（m:m）为2:1。

表7 累积释放率测定结果

3 讨论

3.1 聚丙烯酸树脂IV在三醋酸甘油酯中溶解较缓慢，有可能造成溶解不充分，因此聚丙烯酸树脂IV比例不宜过高，且粉碎粒度宜小，粉碎时过100目筛，可更好地改进实验效果。

3.2 参考相关文献，对可生物降解并适于注射给药的缓释材料进行优化筛选[8-11]，进行大量前期预试验，确定该缓释制剂的配方组合。并通过大量前期预实验，确定了三醋酸甘油酯相:丙二醇相（m:m）为2:1的最优比例；羟丙基纤维素含量对释药影响不大，其含量过高，将影响主药桂皮醛的溶解，因此正交试验中羟丙基纤维素的浓度不宜太高，选择1 %～5 %；聚丙烯酸树脂IV含量增大，缓释效果更明显，但当聚丙烯酸树脂IV含量达20 %时，制剂黏度较大，考虑到该缓释制剂是灌装于特制注射器中后注入牙周袋内，若黏度过大，制剂不易从注射器中推出，故选择聚丙烯酸树脂IV含量不大于20 %。

3.3 试验优选的制备工艺累积释放率达90 %以上，释药时间较长，符合缓释制剂的特点。且采用该工艺制备的制剂可用注射器注入牙周袋，使药物到达牙周袋的深部, 在牙周袋内可缓慢持久地释放以达到持续有效的治疗效果。该缓释制剂具有可生物降解、易于注射和使用方便等优点，可为下一步临床研究提供试验支撑。