液质联用技术在改善睡眠类非法添加检验工作中的应用

王晔

关键词：液质联用   非法添加  改善睡眠类保健品

【中图分类号】 R338.63 【文献标识码】 A       【文章编号】2107-2306（2022）06--02

Key words： UPLC-MS-MS  Illegally added drugs  Improving sleep health foods

随着我国保健食品医药经济在内的健康产业的快速发展，满足了人们追求高质量生活的需求，但同时也带来了一系列的食品安全问题[1]。诸如保健食品中非法添加化学成分的造假行为以达到短期内收到立竿见影的效果，从而迅速占领市场收获了经济效益，却损害了人民群众的身心健康，严重的甚至威胁生命。为了有效打击这些非法添加行为，液质联用技术的引入，先准确定性，排除假阳性的可能，如样品中确定含有非法添加的化學成分再逐一定量计算，为食药监管部门的严格监管提供了有力保障[2，3]。

改善睡眠类保健食品以其独特的效果和较小的副作用为广大失眠患者接受，可是一些不法分子在改善睡眠类保健食品中非法添加镇静催眠类化学药物，以达到快速治疗失眠的效果，从而吸引患者购买，但是此类化学药物会造成严重的不良反应，甚至会造成自杀性倾向，由于具有耐药性和依赖性，大多列为国家二类精神药品。本文主要建立了比较常见添加的10种苯并二氮杂卓类镇静催眠类化学药物液质联用检测方法[4]。

1 材料与方法

1.1材料与仪器

对照品采购均来源于SIGMA公司，样品从市场购买改善睡眠类保健品，乙腈及甲酸均为色谱纯，水为经Millipore超纯水器净化而得的超纯水。Waters Xevo TQ-S 三重四极杆质谱仪，ESI电离源，Waters Acquity RTM 超高效液相色谱仪。

1.2 实验方法

1.2.1  样品提取及前处理 对于固体试样取一次口服剂量的样品研细，加50ml甲醇，称重，超声处理30min，取出，放冷至室温，用甲醇补重，过滤，取1ml溶液至10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，作为供试品溶液。对于液体试样取一次口服量减压浓缩至近干，转移至具塞三角瓶中，其于同固体试样操作。

1.2.2 标准品溶液的配制 分别精密称取咪达唑仑、艾司唑仑、阿普唑仑、三唑仑、氯氮卓、硝西泮、奥沙西泮、劳拉西泮、地西泮、氯硝西泮10种标准品10mg置100ml量瓶中用甲醇溶解稀释制成各浓度均为0.1mg/ml的标准品储备液，标准品用甲醇单独溶解稀释制成浓度为0.1mg/ml的标准品储备液。分别取上述标准品储备液适量用甲醇稀释至浓度为0.1ug/ml的混标溶液，其中氯硝西泮为负离子检测模式单独另配。

1.2.3 色谱条件 色谱柱为ACQUITY UPLC BEH C18（2.1mm×50 mm，1.7 μm）;柱温：30 ℃;流动相：乙腈为流动相A，0.5%甲酸溶液为流动相B，按下表梯度洗脱，流速：0.3 ml/min。负离子模式等度洗脱乙腈-0.5%甲酸溶液（30：70）

1.2.4 质谱条件  离子源为ESI源，毛细管电压3Kv，离子源温度150 ℃;脱溶剂气流为800L/h;脱溶剂气流温度为500 ℃;锥孔气流为150 L/h。正离子方式检测（ESI+）：咪达唑仑、艾司唑仑、阿普唑仑、三唑仑、氯氮卓、硝西泮、奥沙西泮、劳拉西泮、地西泮。负离子方式检测（ESI-）：氯硝西泮

1.2.5 样品测定 在正离子检测模式与负离子检测模式下分别取供试品溶液和对照品溶液各1ul注如入液质联用仪，按上述测定条件进行测定分析。

2 结果与分析

2.1 色谱条件的优化 （总离子图）

2.3 检出限

本实验选用10种混合标准品溶液适量，加甲醇逐步稀释，按上述液质联用条件进行测定，以S/N=3，计算各化学成分的检测限，检出限均小于1ng，达到标准检测要求。

2.4 方法专属性

实验表明，在阴性样品中加入适量对照品，按上述样品提取方式处理，配成上述对照品溶液的浓度，结果发现，阴性样品基质无干扰，在有基质共存情况下仍可筛查出上述10种非法添加成分。

2.5样品测定结果

该方法主要是用来对保健食品中是否非法添加了化学药品作定性分析，如供试品色谱图中检出的某离子色谱峰保留时间与混合标准品溶液中某化学成分相一致，则取该化学成分的准分子离子进行二级质谱全扫描验证，若供试品的保留时间和特征碎片离子均与标准品相同，则判断该供试品中含有此化学成分[5，6]。

3 讨论

上述实验中地西泮和阿普唑仑两种成分在总离子图中保留时间接近难以分开，但其质量数不同，在各离子图中可以得到很好的区分，这是液-质-质联用技术的优势。本方法主要是快速初筛保健品中有无添加上述10种化学成分，如检出上述某一种或几种成分，再用灵敏度高、信号强的离子对做定量分析以計算出准确添加的化学成分含量。

参考文献：

[1]谢志洁，雷毅，罗卓雅等.健康产品中非法添加化学成分快速筛查方法理论与实践[M].广州：华南理工大学出版社，2011.

[2]王贞媛，李丹，文红梅，等.LC-MS/MS法快速筛选保健食品中非法添加的18种止咳平喘化学成分[J] .中华中医学刊，2012，30（1）：172-175.

[3]黎银波，孟庆玉，钟庆元，等.UPLC-MS/MS法快速检测减肥类保健食品中7种违法添加的药物[J] .中南药学，2012，10（10）：752-756

[4]国家食品药品监督管理局药品检验补充方法和检验项目批准件 批准件编号2009024.安神类中成药[Z].2009-12-04

[5]Wang J，Chen B，Yao S，Analysis of six synthetic adulterants in herbal weight-reducing dietary supplements by LC electrospray ionization-MS[J]. Food Addit Contam， 2008，25（7）：822-830

[6]Liang Q，Qu J，Luo G，et al.Rapid and reliable determination of illegal adulterant in herbal medicines and dietary supplements by LC/MS/MS[J].J Pharm Biomed Anal，2006，40（2）：305-311