复方鹿骨健骨颗粒的制备及药效学研究

郭静茹

摘要：目的：探究复方鹿骨健骨颗粒的制备及药效学研究察。方法：选择冷凝回流法提取黄精、梅花鹿骨超微粉，通过吸湿性、流动性、颗粒成粒率、溶化性等确定最佳制备工艺，并分析药效学。 结果：复方鹿骨健骨颗粒剂的制剂工艺为浸膏粉：乳糖=1：3，20%乙醇制软材，80目和12目筛进行筛选，烘干2h即得;小鼠血清相关生化指标显示，给药组中小鼠血清中钙离子（Ca2+）、叉头型基因P3（FOXP3）、骨钙素（OCN）、小鼠降钙素（CT）、雌二醇（E2）和小鼠羟辅氨酸（Hyp）的表达量明显升高（p<0.05）。WB检测结果显示，与模型组相比较，给予CDBE治疗后小鼠股骨中P16和P67 phox相关因子的蛋白的表达水平明显降低（p<0.05）。HE染色观察到小鼠左侧股骨骨小梁丰度增加明显，更加宽厚，并且连接较为紧密。结论：本研究中制备的复方鹿骨健骨颗粒剂工艺稳定可行，能够为工业化生产提供依据和指导，对改善骨质疏松症有不错的疗效。

关键词：复方鹿骨健骨颗粒;药效学;制备

【中图分类号】 R282 【文献标识码】 A      【文章编号】2107-2306（2022）05--01

1.资料与方法

1.1一般资料：

选择60只3月龄的雌性ICR小鼠，体重24～27 g，卫生许可证号SCXK（吉）-2019-0015。将所有小鼠随机分为4组（n=10），分别为模型组（Model）、阳性药组（Positive）、CDBE组（CDBE）以及空白对照组（Control）。梅花鹿骨（安国肖氏康源饮品有限公司）;黄精（安国市保康中药饮片加工有限公司）;BCA蛋白浓度测定试剂盒（上海碧云天生物技术有限公司）;钙离子（Ca2+）ELISA试剂盒（江西海联生物科技有限公司）、叉头型基因P3（FOXP3）ELISA试剂盒（江西海联生物科技有限公司）;骨钙素（OCN）ELISA试剂盒（江西海联生物科技有限公司）;降钙素（CT）ELISA试剂盒（江西海联生物科技有限公司）;雌二醇（E2）ELISA试剂盒（江西海联生物科技有限公司）;羟脯胺酸（HyP）ELISA试剂盒（江西海联生物科技有限公司）。

1.2方法

按干燥鹿骨超微粉：黄精=1：2的比例精密称取原料，加15倍体积蒸馏水，浸泡2 h后经水浴提取2次，每次2h，合并煎液，滤过，将滤液进行浓缩、干燥，除去滤液中多余的水分，即得干燥浸膏粉，不同辅料与干浸膏粉以1：1的比例混合均匀，以不同浓度的乙醇溶液作润湿剂润湿，用一号筛和五号筛过筛进行整粒，干燥，即得。

各组于术前记录体重，腹腔注射浓度为8%乌拉坦进行麻醉，麻醉剂量为：0.1ml/10g。除Control组之外的其他三组小鼠需手术丝线结扎卵巢及其周围相连组织，切除双侧卵巢。Control组小鼠在打开腹腔后，只摘除腹腔内适量脂肪。术后将所有小鼠于原环境饲养，自由摄食、饮水。术后三天，每天腹腔注射8万单位的青霉素，防止感染。密切观察小鼠术后状态。CDBE组：每天给予浓度为1.2g/ml的CDBE，给药剂量为0.28ml/10g小鼠体重;Positive组：每天给予浓度0.073g/ml阿仑膦酸钠药液，给药剂量为0.19ml/10g小鼠体重;Control组和Model组：每天给予同体积蒸馏水。以灌胃方式给药，持续给药12周。

1.3观察指标：分析复方鹿骨健骨颗粒的制备及药效学情况。

1.4统计学分析

对本次结果数据由统计员处理分析，并获取最终结论，处理软件为SPSS22.0，统计的全部资料中，用χ2检验计量最后差异、t检验计数资料最后差异，表示方式为用“x±s”和（%）等，若得到结论P<0.05，则表明结果的統计分析要求。

2.结果

2.1复方鹿骨健骨颗粒的制备

当物料与辅料的比例为1：3时，该颗粒剂的吸湿性最弱。所以，最终选择物料：乳糖=1：3进行复方鹿骨健骨颗粒剂的制备。在72 h后，使用浓度为20%乙醇作为润湿剂的颗粒吸湿性最小，80%与60%的浓度乙醇在吸湿性无明显差别。同时，在颗粒剂的制备过程中，在乙醇浓度为20%的时候，润湿剂的使用量最少。结合吸湿性考察结果，可以确定选择浓度为20%的乙醇作为润湿剂最为合适。

2.2复方鹿骨健骨颗粒的药效学

Western Blot实验结果表明：与Control组相比，Model组小鼠右侧股骨中P16和P67 phox蛋白表达水平明显增加;与Model组相比。CDBE给药治疗后，小鼠股骨中蛋白表达水平明显降低，差异具有统计学意义（P<0.05）。

Control组小鼠的骨小梁结构致密且规则。与Control组相比较，Model组小鼠的骨小梁丰度明显降低，骨髓腔明显增大，骨小梁结构中出现大量空白的区域，不能连接成完整的网状结构。CDBE组的小鼠的HE染色切片与Model组相比较，骨小梁丰度增加明显，更加宽厚，并且连接较为紧密，与Control组较为接近。

3.讨论

复方鹿骨健骨颗粒由梅花鹿骨、黄精提取制成，颗粒剂具有便于服用与携带、剂量准确，方便储存与运输，是最接近传统汤剂的现代中药剂型，具有良好的市场开发前景。所以，复方鹿骨健骨颗粒缓解骨质疏松作用具有较好的理论基础。骨质疏松症模型小鼠的骨吸收会增强，会导致骨质中胶原分解加速，但是成骨细胞合成的胶原蛋白质会减少，HyP可以加速体内胶原蛋白的重建以及弹性蛋白的再生和更新，通过补充体内HyP可以促进骨形成，预防和治疗骨质疏松[4]。作为一种骨骼健康补充剂，CDBE可以刺激胶原蛋白质的合成与增加，促进骨质疏松小鼠血清中的Ca2+、FOXP3、OCN、CT、HyP表达。以上这些结果表明CDBE对骨形成的刺激起主导作用。

综上所述，把CDBE治疗的方式用于骨质疏松模型小鼠，可以升高小鼠血液中Ca2+、FOXP3、OCN、CT、E2、和HyP的表达量，使小鼠骨骼中P16及P67 phox蛋白表达水平降低，并且可以改善绝经后小鼠的骨的微组织结构，有效增加胫骨骨小梁的数目、厚度，使骨小梁连接紧密，使小鼠骨的健康情况得到很好的改善，说明复方鹿骨健骨颗粒用于骨质疏松症疗效显著。

参考文献：

[1] 倪立坚，严锦贤，宋红梅，等. 复方巴戟天健骨颗粒的质量标准升级研究[J]. 海峡药学，2021，33（4）：78-81.