阴虚体质原发性高血压的基因多态性研究

丁磊 许月萍 陆海娟 沈翠珍

1.浙江中医药大学 杭州 310053 2.嘉兴市中医医院

原发性高血压（essential hypertension，EH）又称高血压病，是一种多基因遗传性疾病[1]，其发病机制之一是肾素-血管紧张素系统（renin-angiotensin system，RAS）的过度激活[2]。 RAS包括两条轴：一条是起升压作用的血管紧张素转换酶（angiotensin-converting enzyme，ACE）-血管紧张素Ⅱ（angiotensin Ⅱ，AngⅡ）-血管紧张素Ⅱ 1型受体 （angiotensinⅡ-type 1 receptor，AT1R）的经典轴，另一条是起降压作用的ACE2-Ang （1-7）-Mas受体（Mas receptor，MasR）新轴，两者的平衡成为RAS发挥作用的重要基础[3]。近年来，基因多态性研究已逐渐成为热点[4]。有研究发现EH与中医体质密切相关，阴虚质是EH的易患体质[5-7]。本研究旨在探究EH患者阴虚质与平和质这两种体质RAS双轴下的ACE、AT1R、AT2R、MasR4个基因SNP位点的差异，以期揭示EH患者阴虚质的易感基因，为临床上EH的防治提供参考。

1 资料和方法

1.1 一般资料 选择2019年8月至2020年8月在嘉兴市中医医院住院的EH患者，本研究通过嘉兴市中医医院伦理委员会批准（伦理批件号为：MECJHTCM2018-1201）。

1.2 诊断标准 西医诊断标准参照《中国高血压防治指南（2018年修订版）》[8]，即在未使用降压药物的情况下，收缩压≥140 mmHg（1 mmHg=0.133 kpa）和（或）舒张压≥90 mmHg；或既往有高血压病史，目前正在服用高血压药物，虽然血压控制在140/90 mmHg以下，也应诊断为EH。中医体质诊断标准采用中华中医药学会2009年颁布的《中医体质分类与判断》中的问卷分型[9]。

1.3 纳入及排除标准

1.3.1 纳入标准 （1）年龄45～74岁，性别不限；（2）体质辨识结果分别为阴虚质和平和质，并分别由两位中医师确定；（3）符合EH诊断标准，确诊为1、2级EH；（4）自愿参加研究，并签署知情同意书。

1.3.2 排除标准 （1）继发性和恶性高血压患者；（2）有心、肝、肾严重疾病及功能障碍者；（3）妊娠或哺乳期女性；（4）有酗酒、滥用药物或精神疾病史者；（5）恶性肿瘤患者；（6）服用血管紧张素转化酶抑制剂（angiotensin converting enzyme inhibitors，ACEI）或血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂（angiotensin receptor blocker，ARB）类药物者。

1.4 基因与位点测序 患者入院次日清晨7时空腹采集外周静脉血2 mL于抗凝管中，4℃保存备用。采用血液基因组DNA抽提试剂盒[生工生物工程（上海）股份有限公司]提取基因组DNA，经琼脂糖凝胶电泳进行质量检查。4个基因共13个SNP位点。13个位点中，11个位点采用SNaPshot法，2个位点采用一代测序。基因和位点见表1。

表1 基因及SNP位点信息

1.5 统计学分析 采用SPSS 25.0统计软件进行统计分析。计量资料以±s表示，两组间比较采用独立样本t检验。计数资料组间比较采用χ2检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。Hardy-Weinberg遗传平衡检验采用χ2检验，以P＞0.05表示群体具有代表性。

2 结果

2.1 基线比较 本研究共纳入70例阴虚质EH患者和30例平和质EH患者。两组患者年龄、性别、体质量指数（body mass index，BMI）、高血压病程等一般资料比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。 见表2。

表2 两组患者一般资料比较

2.2 Hardy-Weinberg遗传平衡检验 Hardy-Weinberg遗传平衡检验提示，本研究各个基因位点检出率为100%（P＞0.05），说明拟合度良好，样本代表性好。见表3。

表3 Hardy-Weinberg平衡检验[n（%）]

2.3 两组患者RAS系统下各基因多态性差异比较 除AT1R基因下的rs5182位点外，其余位点差异均无统计学意义（P＞0.05）；基因型CC与CT+TT在阴虚质组中的频率分布分别为2.9%、97.1%，与平和质组患者比较差异有统计学意义（P＜0.05）。见表4。

表4 两组患者RAS系统下个基因多态性差异比较[n（%）]

3 讨论

体质是生命过程中，由遗传和获得性因素共同作用所形成的，表现在形体结构、生理机能及心理活动等方面相对稳定的特性[7]。目前中医主要将人群体质分为9种，即平和质、阴虚质、气虚质、阳虚质、痰湿质、湿热质、血瘀质、气郁质和特禀质，其中平和质为正常体质，其余8种体质为偏颇体质[10]。基因组学研究表明，各种偏颇体质在基因表达上普遍存在失调[11]。因此， 本研究以RAS双轴下ACE、AT1R、AT2R、MasR 4个关键基因为切入点，以期探索EH患者阴虚体质人群分子水平生物学基础，以及阴虚质和平和质EH患者的差异，从而更好地为EH患者体质调理及EH的防治提供理论依据。

本研究应用SNaPshot和一代测序两种方法初步了解了阴虚质和平和质EH患者的基因分布特点。测序研究结果显示，除AT1R基因rs5182位点外，其余位点差异均无统计学意义。AT1R基因rs5182位点下基因型CC、CT和TT及基因型CC与CT+TT在阴虚质及平和质EH患者之间的频率分布差异有统计学意义。AT1R基因全部编码区位于第3外显子，在EH的发病机制中发挥着重要作用[12]。从本研究结果可以推断，T等位基因可能是EH患者阴虚体质的易感基因。国外研究显示，A1166C位点（rs5186）多态性与EH相关[13]。一项荟萃分析也表明，中国人群中AT1R基因A1166C位点（rs5186）与EH的易感性相关[14]，而本研究结果提示AT1R基因rs5186位点下各基因型差异并无统计学意义。综上所述，EH患者的基因型研究结果不同，可能跟阴虚体质有关。AT1R基因rs5182位点可能是阴虚质EH患者的一个潜在的调控位点。进一步的研究将增加样本量，希望能够找到更加充分的证据。

另一方面，笔者在出院电话回访中发现EH患者服药情况下降压达标率不高，这与全球数据显示只有约50%的EH患者实现了血压控制相符[15]。尽管血压控制不佳的原因很多，其主要原因仍是个体药物疗效差异较大，而药物的个体反应差异很大程度上与遗传有关。Johnson[16]报道，大多数高血压药物基因组学研究都集中在候选基因上，早期的药物遗传学研究都集中在RAS的基因SNP方面，但正如最近的系统综述所得出的结论，这些研究结果大相径庭。由此可见，对于阴虚质EH患者RAS系统下的基因位点还值得深入研究。但本研究样本量较小，结果可能存在偏倚。后续研究希望通过增加样本量，获得不同地区及种族人群的标本，并进行全基因检测以验证结果。