关于半枝莲质量标准中不同部位占比的研究

张洪坤，路丽，黄玉瑶，郭长达，高贯彪，吴韶辉，杨美华

作者单位：1亳州市沪谯药业有限公司，安徽 亳州236800；2四川豪运药业股份有限公司，四川 广元628017；3韶关市食品药品检验所，广东 韶关512026；4中国医学科学院北京协和医学院药用植物研究所，北京 100193

半枝莲（Scutellaria barbataD.Don）为唇形科黄芩属植物的干燥全草［1］。夏、秋二季茎叶茂盛时采挖，味辛、苦，寒，归肺、肝、肾经，功可清热解毒，化瘀利尿，近代药理学研究表明半枝莲具有抗肿瘤、抗病原、抑菌、解热、保肝等活性，临床用于治疗各种癌症、肝炎、疔疮肿毒、咽喉肿痛、跌扑伤痛、水肿、黄疸、毒蛇咬伤等病，疗效确切［2-5］。2015 年版《中国药典》收载的半枝莲的规定为全草入药，而目前市场上由于半枝莲的生长特点及考虑经济效益，多收割地上部位入药，由此对半枝莲的质量及药效是否造成影响研究还未见报道。对于全草类中药的不同部位的占比对其质量影响很大，因此，本研究以半枝莲地上部分不同部位中野黄芩苷等多成分含量为指标探明不同部位质量情况，以期了解不同药用部位中各有效成分的含量是否有差异，首次采用灰色关联度法综合评价半枝莲不同药用部位的质量。本研究首次在半枝莲质量标准中确定了不同部位的占比，为半枝莲质量标准中增加控制叶的比例提供依据，并为评价半枝莲不同药用部位的质量及资源合理开发利用、药源管理提供一定的参考。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1仪器 RHP-100 型高速多功能粉碎机（浙江永康市荣浩工贸有限公司）；XS204 型电子天平（d=0.1 mg，Mettler Toledo）；电热套（500 mL，海宁市新华医疗器械厂）；HWS-26 型电热恒温水浴锅（上海一恒科学仪器有限公司）；DHG-9245A 电热鼓风干燥箱（上海一恒科学仪器有限公司）；TU-1901 双光束紫外可见分光光度计（北京普析通用仪器有限责任公司）；Agilent-1200型高效液相色谱仪；YMC Hydro‑sphere C18色谱柱（4.6 mm×250 mm，5µm）。

1.1.2 试药 甲醇（色谱纯，Merck）；甲醇（AR，170212-1，西陇科学股份有限公司）；无水乙醇（AR，161004-1，西陇科学股份有限公司）；石油醚（60～90 ℃）（AR，20160801-2，广州化学试剂厂）；磷酸（色谱纯，阿拉丁）；醋酸（AR，20150601-2，广州化学试剂厂）；野黄芩苷（110842-201508，中国食品药品检定研究院，含量以91.3%计）；野黄芩素（MUST-1602204，成都曼斯特生物科技有限公司）；木犀草素（111520-201605，中国食品药品检定研究院，含量以99.6%计）；芹菜素（MUST-1606130，成都曼斯特生物科技有限公司）。

1.1.3 样品 于2017 年7 月半枝莲开花期间采自亳州市沪谯药业有限公司安徽省寿县半枝莲基地，均经该公司郭长达副主任中药师鉴定为唇形科黄芩属半枝莲（Scutellaria barbataD.Don）的干燥地上部分。采样时要求所有样品均从同一种植区域采集，保证样品均匀，并对样品进行统一方法加工后进行人工挑选，分别筛选出茎、叶、果进行质量比较。

同时，本次研究收集不同产地半枝莲样品，16批次半枝莲药材均是选择夏季采收的半枝莲样品，将不同产地每批半枝莲分别按不同药用部位进行人工挑选，分别筛选出茎、叶、果，记录各部位质量所占比例，进行质量比较。

1.2 方法

1.2.1 浸出物 分别对半枝莲不同药用部位进行测定其水溶性浸出物和醇溶性浸出物，测定方法参照本研究团队的研究成果［6-7］所述的浸出物测定方法。

1.2.2 总黄酮 按2015年版《中国药典》半枝莲【含量测定】项下总黄酮的测定法测定半枝莲不同药用部位的总黄酮含量。

1.2.3 多成分含量测定 该项多成分含量测定方法参照本研究团队的研究成果［6-8］所述的含量测定方法，方法学考察内容不再赘述。

（1）色谱条件与系统适用性试验。色谱柱：YMC Hydrosphere C18（250 mm×4.6 mm，5 µm）；检测器：UV 检测器（335 nm）；以甲醇为流动相A，以0.1%磷酸溶液为流动相B，按表1 中的规定进行梯度洗脱；柱温为30 ℃；流速1 mL/min。

表1 梯度洗脱程序表

（2）对照品溶液的制备。精密称取野黄芩苷、野黄芩素、木犀草素、芹菜素对照品适量，加甲醇制成每1 毫升含野黄芩苷60 µg、含野黄芩素4 µg、含木犀草素5µg、含芹菜素8µg的混合对照品溶液。

（3）供试品溶液的制备。精密称取本品粉末（3号筛）0.2 g，置100 mL 锥形瓶中，加70%乙醇25 mL，立即加热回流15 min，冷却至室温。过滤，取滤液转移于50 mL 容量瓶中，重复提取1 次，合并滤液，加70%乙醇至刻度，用0.45 µm 微孔滤膜滤过，即得。色谱图见图1。

图1 半枝莲多成分测定高效液相色谱图：A为对照品；B为供试品；C为空白对照

2 结果

2.1 半枝莲不同药用部位的各指标测定结果半枝莲不同药用部位的浸出物、总黄酮、野黄芩苷等多成分指标的含量结果见表2。其中，分析对比总黄酮的含量，发现叶的总黄酮含量显著高于茎、果、全草，茎、果、全草含量无明显差异，总体表现为：叶>全草>茎、果；多成分含量测定中，叶的野黄芩苷、野黄芩素、木犀草素、芹菜素含量均高于茎、果、全草，这与总黄酮含量的趋势一致，不同的是，果中野黄芩苷、野黄芩素含量高于茎。浸出物含量比较中，无论是水溶性浸出物还是醇溶性浸出物，叶含量均显著高于茎、果、全草，总体表现为：叶>全草>茎、果，茎与果含量差别不明显。

表2 半枝莲不同药用部位检测结果/%

2.2 灰色关联度分析本研究以半枝莲的7 种测定指标，包括总黄酮、水溶性浸出物、醇溶性浸出物，及野黄芩苷、野黄芩素、木犀草素和芹菜素，建立半枝莲不同药用部位质量灰色模式识别数据集。采用灰色关联度分析法，先对原始数据进行规格化处理后再进行关联度计算，具体计算方法参考本研究团队的研究成果［9-10］所述的灰色关联分析方法计算半枝莲不同药用部位的相对关联度，具体结果见表3。

相对关联度越大，表明其综合质量评价越高，相对关联度综合排序结果可作为药材质量高低评价的依据。由表3 结果可知，半枝莲不同药用部位样品中，以相对关联度的大小排序，从大到小排序为：叶>全草>果≈茎。结果表明，不同部位中叶的综合质量评价最高，其次是全草，叶的比例对半枝莲药材质量标准中的总黄酮和野黄芩苷指标影响比较大，进而直接影响该品种的药材质量。

表3 半枝莲不同药用部位的相对关联度及综合排序

2.3 不同产地半枝莲样品的不同部位比例结果不同产地半枝莲样品的茎、叶、果的比例结果见表4。由结果可知，不同产地共16批半枝莲样品中，叶的平均占比为16.1%，在此基础上下浮20%，得到12.88%，其中，安徽寿县、山东平邑、河南泌阳、河南信阳、河南瓦岗和竹沟镇6 个产地的叶的比例低于12.88%。

表4 不同产地半枝莲茎叶比数据/%

2.4 不同产地半枝莲的各指标测定结果不同产地16批半枝莲样品的总黄酮、野黄芩苷、野黄芩素、木犀草素和芹菜素的含量测定结果见表5。其中，河南泌阳和河南竹沟镇的总黄酮含量不合格，山东平邑和河南瓦岗镇的野黄芩苷含量不合格，河南泌阳的总黄酮和野黄芩苷指标均不合格，分析其原因，关联该样品中叶的比例可知，山东平邑、河南泌阳、河南竹沟三个产地的叶的比例分别为3.8%、2.9%、9.0%，相对于其他产地的叶的比例较低，叶子的比例较低从而导致了半枝莲药材质量不合格。

表5 不同产地半枝莲含量测定结果

3 讨论

半枝莲经人工挑选，将其按茎、叶、花、果、种子进行区分，由于干品半枝莲花、种子量较少，且花与叶子较难区分，因此本次研究仅对半枝莲地上部分全草、茎、叶、果进行质量比较。

通过分析比较发现，半枝莲不同药用部位中叶子的主要指标成分含量明显高于其他药用部位，其次是全草用药，该结果与文献报道基本一致［11-12］。因此建议半枝莲在开花期叶子茂盛时采收为最佳，该时期半枝莲综合质量最高［13-15］，同时切制加工、运输及贮藏保管过程中应防止叶的损失。

本研究以多成分含量和浸出物含量为指标，首次采用灰色关联度法［16-19］综合评价半枝莲不同药用部位的质量，多角度客观评价了不同药用部位的半枝莲样品内在质量，综合评价半枝莲叶的质量最高，为半枝莲的综合质量评价提供新的分析方法。

4 结论

本研究根据不同产地半枝莲含量测定结果结合其对应的茎叶比数据，叶比例低者对应的总黄酮和野黄芩苷等指标成分含量相对较低，甚至出现不合格。因此，在半枝莲的生产、运输及储存各环节均应控制好叶的比例，防止叶子损失影响产品质量。根据研究结果，建议对半枝莲药材质量标准中叶的比例进行限度规定，即不得少于12.0%，从而可以更好地控制其质量。本研究首次在半枝莲质量标准中确定了不同部位的占比，为半枝莲质量标准中增加控制叶的比例提供依据，从而较好地控制该品种的质量。