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口腔癌临床病理标本中PD-L1 表达水平

2022-03-23孟庆伟

中国医药导报 2022年5期
关键词:舌癌口腔癌石蜡

孟庆伟

北京怀柔医院口腔科,北京 101400

口腔癌,是头颈部较为常见的恶性肿瘤之一[1-4]。目前,全球有众多研究团队正进行着程序性死亡蛋白配体-1(programmed death ligand-1,PD-L1)类药物治疗各种类型恶性肿瘤的研究[5],然而将PD-1类药物应用于口腔癌方面的研究却鲜有报道。因此,为了探索PD-1类药物在口腔癌方面的应用前景,探究口腔癌发生发展的可能机制,本研究对已确诊的各类型口腔癌患者的肿瘤组织切片,采用免疫组织化学法对PD-1 蛋白进行了染色,初步结果如下:

1 对象与方法

1.1 研究对象

2015 年1 月至2020 年1 月,收集经北京怀柔医院口腔科手术切除并确诊为口腔癌的病理组织20 例,其中口咽癌8 例、上颌窦癌6 例、舌癌6 例,经病理诊断均为鳞状上皮细胞癌。纳入标准:①经病理学确诊为口腔癌;②首次确诊;③病理组织为原位肿瘤切片。排除标准:①曾接受过任何免疫治疗;②曾接受任何靶向治疗;③曾接受任何放、化疗;④病理组织切片为穿刺组织。所有病理组织经福尔马林固定后,进行常规石蜡包埋,5 μm 连续切片。该研究已获得医院医学伦理委员会批准及备案。

1.2 试剂与耗材

PD-L1 兔单克隆抗体(美国spring,M4422);免疫组织化学用超敏型羊抗鼠/兔二抗试剂盒(美国UltraSensitive,KIT-0305);DAB 试剂盒(中杉金桥,ZLI-9017);脱蜡液(中杉金桥,ZLI-9315);内源性过氧化物酶阻断剂(中杉金桥,PV-9000);3%BSA(碧云天,P0007);苏木素染色液(中杉金桥,BSBA-4041);中性树胶(中杉金桥,ZLI-9555);免疫组化抗原修复缓冲液(中杉金桥,ZLI-9065);PBS 磷酸盐缓冲液;梯度酒精(浓度分别为50%、70%、80%、95%、100%)等。

1.3 实验仪器

切片机(德国LEICA,RM2235);烤片机(德国LEICA,H1220);显微镜(日本OLYMPUS,CX31);离心机(美国Thermo,ST-8);切片架;烧杯;量筒等。

1.4 实验方法

①切片脱蜡;②梯度酒精复水;③抗原修复;④一抗孵育:PD-L1/CD274(SP142)兔单克隆抗体1∶200 稀释后取50 μl 滴入切片反应区域,4℃孵育过夜后,PBS 洗涤3 次,3 min/次;⑤二抗孵育:超敏型羊抗鼠/兔二抗1∶100 稀释后取100 μl 滴入切片反应区域,用移液器吸头涂抹均匀,置于烘箱中37℃反应1 h,PBS洗涤3 次,3 min/次;⑥DAB 显色;⑦复染;⑧脱水;⑨透明;⑩封片。

1.5 评价标准

所有切片于光学显微镜(10 目镜×40 物镜)下随机选取10 个组织区域进行摄片,并分别计算阳性细胞比例(阳性细胞数量÷区域内所有细胞数量×100%)后取平均值,依照业内通用的免疫组化阳性等级评价标准[6]进行分级:阳性细胞比例≥50%为强阳性,25%~<50%为中等阳性,5%~<25%为弱阳性,<5%为阴性。

2 结果

2.1 口咽癌病理组织中PD-L1 的表达及分布情况

8 例口咽癌病理组织中,共计4 例(50%)PD-L1呈强阳性表达,1 例(12.5%)PD-L1 呈中等阳性表达,1 例(12.5%)PD-L1 呈弱阳性表达,2 例(25%)呈阴性表达,合计阳性表达率为75%。见图1、表1。

表1 各口咽癌石蜡切片PD-L1 阳性表达情况

图1 口咽癌石蜡切片PD-L1 免疫组化染色结果

2.2 上颌窦癌病理组织中PD-L1 的表达及分布情况

6 例上颌窦癌病理组织中,共计2 例(33.3%)PD-L1 呈强阳性表达,1 例(16.7%)PD-L1 呈中等阳性表达,1 例(16.7%)PD-L1 呈弱阳性表达,2 例(33.3%)呈阴性表达,合计阳性表达率为66.7%。见图2、表2。

表2 各上颌窦癌石蜡切片PD-L1 阳性表达情况

图2 上颌窦癌石蜡切片PD-L1 免疫组化染色结果

2.3 舌癌病理组织中PD-L1 的表达及分布情况

6 例上颌窦癌病理组织中,0 例PD-L1 呈强阳性表达,2例(33.3%)PD-L1呈中等阳性表达,2例(33.3%)PD-L1 呈弱阳性表达,2 例(33.3%)呈阴性表达,合计阳性表达率为66.7%。见图3、表3。

表3 各舌癌石蜡切片PD-L1 阳性表达情况

图3 舌癌石蜡切片PD-L1 免疫组化染色结果

3 讨论

PD-1 是由基因PDCD1 编码,由288 个氨基酸组成的跨膜蛋白[7-16]。现如今,口咽癌、上颌窦癌、舌癌等口腔癌的发病机制不甚明确[5,17-20],亦无具有显著疗效的药物或疗法[21],现阶段多采用常规手术、化疗、放疗等治疗手段,临床效果也不甚明显[21-23]。因此,探寻口腔癌的发病机制及特效药物是当下迫在眉睫的工作。在本研究所收集的20 例口腔癌病理组织中,PD-L1强阳性表达共计6 例(30%),PD-L1 中等阳性表达共计4 例(20%),PD-L1 弱阳性表达共计4 例(20%),PD-L1 阴性表达共计6 例(30%),PD-L1 阳性表达共计14 例(70%)。因此,咽癌、上颌窦癌、舌癌等口腔癌的发病机制亦有可能是肿瘤细胞高表达PD-L1 引起免疫逃逸造成的,PD-1 免疫点抑制剂类药物应用于口腔癌可能具有一定的治疗效果。但限于本研究仅纳入病例较少,该推论是否正确还有待进一步考证。据此,本课题组下一步拟扩大对口腔癌病理组织PD-L1表达的检测范围,为PD-1类药物在口腔癌方面的应用提供准确的实验数据与理论支持。

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