新疆石河子地区部分规模化猪场高致病性猪蓝耳病的病原学监测与分析

卢博敏， 云晓宇， 陈星宇， 杨靖宇， 陈凤， 柳旭伟*

(1.新疆农业职业技术学院 动物科技分院，新疆 昌吉 831100； 2.新疆天康畜牧科技有限公司，新疆 昌吉 831100)

高致病性猪蓝耳病是一种病毒性传染病，由猪的繁殖与呼吸系统结合病毒引起，在国内外猪蓝耳病都以其极大的危害性威胁着养猪业的发展[1]。猪蓝耳病以高致病性和传染性使猪群引发繁殖及呼吸障碍综合征和腹泻症状，使猪群出现较高的死亡率[2]。并且猪蓝耳病属于免疫抑制性疫病，其病毒通过抑制猪的体液免疫和细胞免疫致使猪的免疫力下降，从而引发多种其他疫病引发的并发症[3]。为了促进石河子地区养猪业的发展，提高规模化养猪的经济效益。作者于2020年7—12月对石河子周边地区5个团场12个规模化猪场进行高致病性猪蓝耳病的病原学监测，以期为科学防控高致病性猪蓝耳病奠定理论基础。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 样品来源

样品来自2020年7—12月石河子地区5个监测团场共12个规模猪场。其中，A团5个猪场，包括132份血清样、107份睾丸样、32份组织样，共计271份样；B团3个猪场，包括112份血清样、98份睾丸样、22份组织样，共计232份样；C团2个猪场，包括72份血清样、67份睾丸样、13份组织样，共计152份样；D团1个猪场，包括43份血清样、43份睾丸样、7份组织样，共计93份样；E团1个猪场，包括46份血清样、36份睾丸样、7份组织样，共计89份样。

1.1.2 试剂与仪器

核酸提取试剂(上海之江生物科技有限公司)、异丙醇(分析纯)、实时荧光RT-PCR检测试剂盒(哈尔滨元亨生物药业有限公司)、无水乙醇(分析纯)、猪繁殖与呼吸综合征(类NADC-30毒株)。

高压蒸汽灭菌锅(LS-50H D型)，超净工作台(BBS-SDC型)，高速离心机(Sorvall Legend Micro 17型)，核酸提取机(EX3600型)，实时荧光定量PCR分析仪(MICPOCDX48型)，移液器(LE196AL0440445型)。

1.2 方法

1.2.1 样品采集和处理

无菌条件下采集肺、睾丸液、肝、扁桃体、心、脾、肾等病变器官及血清等，将病样研磨处理，使用消毒后的器械取心肝脾肺肾各5 g，置于研磨器玻璃管中(一猪一离心管一套处理器械)，加入0.5 mL生理盐水反复挤压研磨3 min，取1 mL研磨液置于离心管中备用。将处理后的样本于12 000 r·min-1离心10 min，提取上清液备用。

1.2.2 提取病毒DNA

取200 μL的病样上清液，通过核酸提取试剂(上海之江生物科技有限公司)的提取说明书进行核酸提取，获得病毒DNA。

1.2.3 PCR检测

设被检样品、阴性对照和阳性对照的总和为X，则反应体系：无菌无核酸酶水7.0(X+1)μL，RT-PCR反应液12.5(X+1)μL，酶混合液1.0(X+1)μL，荧光探针2.5(X+1)μL。

按照实时荧光RT-PCR检测试剂盒(哈尔滨元亨生物药业有限公司)说明书配制体系，分别加入2 μL DNA模板和2 μL阴阳性对照标准品。在荧光PCR仪上进行以下反应：42 ℃ 5 min，95 ℃ 10 s；循环95 ℃ 5 s，60 ℃ 35 s，共40次，在每次循环第二步(60 ℃ 35 s)收集荧光信号。

2 结果与分析

2.1 不同生产阶段病原监测

表1显示，在监测的12个猪场为期半年的840份送检样品中，高致病性蓝耳病样品96份，病原监测阳性率平均为11.42%。其中，病原监测阳性率最高的为5～9周龄的保育猪，为12.35%；病原监测阳性率最低的为1～4周龄的仔猪，仅为8.33%，其余日龄猪的病原监测阳性率均≥10%。

表1 不同生产阶段的病原监测结果

2.2 不同团场病原监测

表2显示，在监测的5个团场规模猪场半年内送检的840份样品中，5个团场的平均阳性监测率≥10%。其中，高致病性猪蓝耳病阳性率最高为C团，达13.55%；阳性率最低为E团，为10.11%。

表2 不同团场的病原监测结果

2.3 各监测团场每月病原监测对比

监测的5个团场规模猪场半年内送检结果为阳性的96份样品中，分别有A团场29份、B团场27份、C团场21份、D团场10份、E团场9份。图1显示，5个团场监测出阳性的数量在8—10月基本都有上升的趋势，A、B、E团场有较为明显的上升曲线，其中以A团场最具代表性。除D团场以外，其他团场的阳性检出均在10月达到峰值。在10—12月，检测出阳性数量均呈下降趋势，其中A、B、E团场下降趋势较为明显，C、D团场下降虽不明显，但总体来看检出阳性量呈下降趋势。

图1 不同团场每月高致病性猪蓝耳病病原监测结果

3 讨论与分析

3.1 不同生产阶段病原监测结果分析

从不同生产阶段病原监测结果来看，阳性率均低于13.00%，在10.00%上下波动，平均值为11.42%，大大低于肖盛中等[4]报道的新疆北疆地区猪场高致病猪蓝耳病毒79.01%的阳性率，高于彭晓玲等[5]报道的新疆地区生猪高致病性猪蓝耳病的6.4%的阳性率。从监测结果以及石河子市高致病性猪蓝耳病疫情发生的动态情况来看，各团场猪场未出现高致病性猪蓝耳病的暴发，这可能与石河子市规模化猪场的科学养殖技术水平较高，有着较为完善、成熟的疫病防控系统及应急处置措施等有关。同时，石河子市规模化猪场主要是新疆的上市企业进行生产，各监测的规模化猪场均有自己较为完善的产业链，保证了饲料、药品、器械及猪只的流通等各环节的供应安全，未携带病毒。

从监测结果来看，1～4周龄的仔猪的阳性率最低，这可能与这一阶段较高的母源抗体水平有关。同时，还可能与其环境温度、湿度较稳定，不随外界温度变化出现较明显波动，以及接种疫苗的频率和饲养管理等有关[6]。调查发现，各监测猪场使用的系统化标准手册中关于初生仔猪更为规范详尽。由此可见，要尽可能的控制一切人为因素，形成理论系统的养殖指导标准，对于每一阶段的猪只都要形成系统标准的饲养体系。做到“一猪一策，一场一标准”的因地制宜、因猪防控，降低患病率及阳性检出率。相比规模化养殖，小型经营管理的散养农户应该更加重视这一问题，集力群策共同防控[7]。

3.2 不同团场病原监测结果分析

不同团场的样品检测阳性率均不相同。除C团场外，其他团场基本控制在11.00%左右，未出现大规模暴发较为稳定，稍高于张建新等[8]报道的全国高致病性猪蓝耳病10.00%的阳性率，这可能与石河子地区地处新疆北部，气候干燥，一年内温度变化较极端，造成病原易在空气中传播有关。但C团场检出阳性率较高，根据访问与调查发现，C团场在2020年下半年从其他地方引进1批种猪，而其他团场的猪场未引进其他猪只，且在7月中旬对C团场送检的样品中，有1辆外省牌号运猪车辆检测为弱阳性，但同时间段引进猪只并未检测出阳性。因此，C团场猪蓝耳病检出阳性率较高，可能是因为引进猪群的运输车辆携带病毒进入该猪场，因未消杀干净而感染了易感猪群，或者引进猪群时猪的应激反应使免疫力下降，易被病猪感染。因此，需要做好隔离防控，坚持自繁自养原则不轻易引种[9]。如果必须进行引种，则须调查清楚所要引进猪场的疫情，之外还要进行血清学检测，非阳性猪可引进。引进猪群后还应建立合适的隔离区，以方便做好监测，正常需要4～5周时间隔离检疫，健康者方可混群饲养[10]。

3.3 不同监测月份病原监测结果分析

各团猪场送检量与阳性检出量具有一定的时间性，在9—10月时都较高，出现异常的病猪增加，检测出患携有高致病性猪蓝耳病的猪只也有所增加，且在9—10月数量都偏大。但全国范围来看，尤其对比南方某些地区规模化养猪场并未出现猪蓝耳病阳性明显的季节变化[11]。根据猪蓝耳病毒的传染途径发现，病毒的传播与风向、风速及温度湿度有着密不可分的关系。根据新疆地区气温的变化可以大概推断出，该病适宜的温度是20～35 ℃，当超过35 ℃以上，湿度低，紫外线强，在空气中就没有了传播能力。在进入11月以后，新疆石河子地区气温迅速下降，空气湿度低，病毒的活性降低，且基于9、10月阳性率升高，人为进行紧急干预调整，病毒的传播途径被切断，12月时蓝耳病原检出阳性率降低[12]。

4 小结

将各监测猪场送检的病料，运用实验室检查、荧光定量PCR进行诊断，确定其为高致病性猪蓝耳病病毒感染，确诊之后对不同个体的疾病进行专项分析，并制定相应的防控措施。新疆石河子地区未出现大规模的高致病性猪蓝耳病疫情，但受监测的猪场不同程度因为某些原因出现了高致病性禽流感的感染。在制定措施时需要根据各规模化猪场内的具体情况，关注重点突出情况，根据当地气候条件及猪只生长最适条件有所侧重，药物预防需要根据场内猪只的药敏程度对症下药[13]。

对猪场使用PCR技术进行病原性监测是当今比较流行的分子检测技术，在各领域都进行了广泛的应用，高致病性猪蓝耳病病毒对规模猪场养殖危害极大。从利用病原学为期半年的集中监测来看，共监测的规模化猪场12个，监测样品数840份，从2020年下半年所监测点的高致病性猪蓝耳病阳性率来看，监测点平均病原阳性检出率为11.42%，月均最高为10月，检出率为14.88%，监测点阳性检出率最高为13.55%。高致病性猪蓝耳病的发病率高于秋季温度，为20～35 ℃时，但其他季节也存在阳性感染。高致病性猪蓝耳病病毒感染率高，难以根除，不容忽视。