气相色谱法测定银柴颗粒中薄荷脑和薄荷酮含量*

刘 斌

（四川省德阳市食品药品安全检验检测中心，四川 德阳 618000）

银柴颗粒由忍冬藤、柴胡、枇杷叶、薄荷、芦根5 味中药材组方，具有清热、解表、止咳功效，用于风热感冒、发热咳嗽等症。现行药材质量标准［1］仅对薄荷脑进行薄层色谱定性鉴别，但薄荷含有以薄荷脑和薄荷酮为主的挥发性成分［2］。本研究中建立了同时测定银柴颗粒中薄荷脑和薄荷酮含量的气相色谱（GC）法，为银柴颗粒薄荷质量的有效控制提供参考。现报道如下。

1 仪器与试药

1.1 仪器

Agilent 7890B型气相色谱仪（美国安捷伦公司），配有氢火焰离子化检测器、Agilent 7693 型自动进样器；SPH - 300A 型氢气发生器，SPB - 3 型全自动空气源（北京中惠普分析技术研究所）；XS205 型电子天平（梅特勒- 托利多仪器＜上海＞有限公司，精度为十万分之一）；KQ-700D 型数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司，功率为700 W，频率为40 kHz）。

1.2 试药

薄荷脑对照品（批号为110728 - 201707，纯度为99.8%），薄荷酮对照品（批号为111705-201105，纯度为99.8%），均购自中国食品药品检定研究院；其余试剂均为分析纯；银柴颗粒（厂家GD，批号为190701；厂家YN，批号为190701；厂家HB，批号为200102；厂家FD，批号为200901；厂家KH，批号为191203；厂家FC，批号为200807）。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：HP - INNOWax 石英毛细管柱（30 m ×0.32 mm，0.25 µm）；程序升温：初始温度90 ℃、维持1 min，以3 ℃/min 的速率升至130 ℃、维持2 min，再以30 ℃/ min 的速率升至220 ℃、维持2 min；载气：高纯氮；载气流速：1.5 mL/min；分流比：10∶1；进样口温度：220 ℃；检测器温度：250 ℃；进样量：1µL。

2.2 溶液配制

分别称取薄荷脑对照品199.07 mg，薄荷酮对照品139.34 mg，精密称定，置100 mL 容量瓶中，加乙酸乙酯溶解并定容，摇匀，即得每1 mL 含薄荷脑1.986 7 mg、薄荷酮1.390 6 mg 的混合对照品溶液。取样品适量，研细，取6 g，精密称定，置150 mL 具塞锥形瓶中，精密加入乙酸乙酯20 mL，密封，称定质量，超声处理（功率为420 W，频率为10 kHz）10 min，放冷，再称定重量，补足减失的质量，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液。取缺薄荷的其余药材，按处方比例和制备工艺制备缺薄荷的阴性样品，按供试品溶液制备方法制备阴性对照品溶液。

2.3 方法学考察

专属性试验：精密吸取2.2 项下3 种溶液各1 µL，按2.1项下色谱条件分别进样检测，色谱图见图1。结果薄荷脑和薄荷酮的理论板数分别为142 311和83 216，供试品溶液色谱中在与对照品溶液色谱相应位置有相同保留时间的色谱峰，且阴性对照无干扰，表明方法专属性良好。

1.薄荷酮 2.薄荷脑A.对照品溶液 B.供试品溶液 C.阴性对照品溶液图1 气相色谱图1.Menthol 2.MenthoneA.Reference solution B.Test solution C.Negative reference solutionFig.1 GC chromatograms

线性关系考察、检测限和定量限确定：精密量取2.2项下混合对照品溶液0.5，1.0，2.5，5.0，7.5 mL，分别置10 mL容量瓶中，加乙酸乙酯稀释至刻度，摇匀，按2.1 项下色谱条件进样测定。以待测成分质量浓度（X，µg/mL）为横坐标、峰面积（Y）为纵坐标进行线性回归，得回归方程分别为Y脑= 1.871 1X脑+ 1.099 7（r=0.999 8，n=5），Y酮=1.824 3X酮+2.157 2（r=0.999 8，n=5），表明薄荷脑和薄荷酮的质量浓度分别在99.335 9～1 490.039 0µg/mL，69.530 7～1 042.959 9µg/mL 范围内与峰面积线性关系良好。根据各成分的信噪比（S/N）。计算检测限（S/N= 3）和定量限（S/N= 10）。结果薄荷脑的检测限和定量限分别为0.476 8 mg / L 和1.589 4 mg/L；薄荷酮的检测限和定量限定性检测限分别为0.139 1 mg/L和0.556 2 mg/L。

精密度试验：精密吸取2.2项下混合对照品溶液1µL，按2.1 项下色谱条件连续进样测定6 次，记录峰面积。结果薄荷脑和薄荷酮峰面积的RSD分别为0.87%和0.86%（n=6），表明仪器精密度良好。

重复性试验：取同一批（批号为200807）样品6 份，精密称定，按2.2 项下方法制备供试品溶液，按2.1 项下色谱条件进样测定。结果薄荷脑和薄荷酮峰面积的RSD分别为1.81%和3.84%（n= 6），表明方法重复性良好。

稳定性试验：取同一批（批号为200807）样品6.0 g，精密称定，按2.2 下方法制备供试品溶液，按2.1 项下色谱条件分别于0，4，8，12，16，20，24 h 时进样测定，记录峰面积。结果薄荷脑和薄荷酮峰面积的RSD分别为0.46%和2.13%（n= 7），表明供试品溶液在24 h 内稳定性良好。

加样回收试验：取已知薄荷脑和薄荷酮含量的样品（批号为200807，薄荷脑含量为0.792 4 mg/ g，薄荷酮含量为0.124 3 mg/g）6 份，精密称定，分别精密加入薄荷脑和薄荷酮对照品溶液，按2.1项下色谱条件进样测定，计算回收率。结果见表1。薄荷酮的回收率偏低，主要原因为样品中薄荷所含薄荷酮的含量低于0.01%，属痕量级。

表1 加样回收试验结果（n=6）Tab.1 Results of the recovery test（n=6）

2.4 样品含量测定

取6 批样品，按2.2 项下方法制备供试品溶液，按2.1 项下色谱条件进样测定，记录峰面积，计算样品中薄荷脑和薄荷酮的含量。结果见表2。

3 讨论

曾比较提取溶剂环己烷、石油醚（60～90 ℃）、乙酸乙酯的提取效果，结果乙酸乙酯优于其他溶剂。曾考察了超声时间对提取效果的影响，结果超声处理20 min和10 min后两者含量无显著差异，且均优于超声30 min，故选择超声提取10 min。

由表2 可知，6 个厂家的样品中薄荷脑和薄荷酮的含量差异较大，且FD 厂家的薄荷脑与薄荷酮含量的比值远大于其他厂家，提示存在非法添加薄荷脑的可能性。查阅文献［3 - 7］，发现不同地理位置、环境因素对薄荷药材薄荷油化学成分均有影响，其含量与薄荷种类、品种产地、采收时间、不同部位均密切相关。为提高银柴颗粒的质量标准，建议加强对薄荷饮片的质量控制；针对可能存在薄荷脑代替市售薄荷药材入药的情况，建议提升银柴颗粒制剂的质量标准。

表2 样品含量测定结果（mg/g）Tab.2 Results of content determination of menthol and menthone in the samples（mg/g）

综上所述，本研究中建立的方法操作快捷，结果准确，可用于同时测定银柴颗粒中薄荷脑和薄荷酮含量。