北流市(县)奶牛结核病流行病学调查研究

2022-03-17李云富叶梅青黄海生刘国红蔡明元

中国牛业科学 2022年6期

李云富，叶梅青，黄海生，刘国红，蔡明元

(北流市动物疫病预防控制中心，广西北流 537400)

牛结核病(Bovine tuberculosis)是由牛型结核分枝杆菌引起的一种人兽共患的慢性传染病，我国将其列为二类动物疫病。OIE将其列为B类疫病。牛对牛型菌易感，特别是奶牛的感染率较高，不仅影响奶业的发展，还由病畜的尸体及乳汁感染人[2]。北流市位于广西东南部，北纬22°08′-22°55′N，东经110°07′-110°47′E，与广东省信宜市、高州市、化州市接壤；属南亚热带季风气候区，年无霜期351 d、平均气温21.7 ℃；作物饲草丰富茂盛，四季长青，饲养奶畜青绿饲料资源丰富；经济综合实力居广西十强县(市)前列，城乡居民对奶品需求不断增长，鲜乳18元～20元/kg畅销无剩，饲养奶牛供应鲜奶具有较好消费市场和较高回报，成为居民创业就业好项目。但由于饲养管理欠规范，潜在疫病防控、乳品质量及公共卫生安全问题。2022年4月，根据《动物防疫法》、《乳品质量安全管理条例》，按照《2022年广西壮族自治区动物疫病监测与流行病学调查实施方案》(桂农厅发[2022]33号)《牛结核病防治技术规范》要求，北流市动物疫控中心组织相关技术人员，应用提纯牛型结核菌素皮内反应诊断，开展奶牛结核病流行病学调查，旨在为科学防控结核病提供依据。

1 监测方法和判定

1.1 人员及分工

本中心抽派技术人员5人，为减少人为操作误差，每个监测环节固定同一人操作，即采血1人、剪剃毛和测皮厚1人、登记1人、酒精消毒1人、注射结核菌素1人，牛只保定由业主完成[1]。

1.2 器材与试剂

1.2.1 人员防护材料一次性防护服、口罩、鞋套、手套、帽等。

1.2.2 器材游标卡尺、1 mL注射器、理发器、胡须刨、酒精棉拭子。

1.2.3 试剂酒精、碘伏、提纯牛型结核菌素(中牧：20头份/瓶)。

1.3 操作方法

1.3.1 牛只保定保持待检牛正常站立姿态，用绳子将牛头统一向左侧固定。

1.3.2 注射部位及术前处理本次检测部位，统一在颈右侧中部上1/3处，先剪毛再剃毛、直径10 cm，用卡尺测量术部中央皮皱厚度，做好记录。作为术后炎性反应皮皱厚度比较基数[1]。

1.3.3 注射剂量 20头份/瓶的中牧提纯牛型结核菌素，先用生理盐水稀释2 mL,即10头份/mL；不论牛大小，每头牛皮内注射0.1 mL。

1.3.4 注射方法先用75%酒精棉以术部中心圆圈向外涂抹消毒，待干爽后皮内注入牛型提纯结核菌素0.1 mL，注射后局部应出现小泡。

皮内注射后，在48，72，96 h点，观察术部有无热痛肿胀等炎性反应，并卡尺测量术部皮皱厚度，做好详细记录。并与术前皮皱厚度比较差值，作为判定依据。

1.4 判定

1.4.1 阳性反应局部有明显的炎性反应，在3个测量小时点的测量值中，只要有1个点测量值皮厚差≥4 mm，判为阳性。

1.4.2 疑似反应局部炎性反应不明显，只要有1个检测时点测量值皮厚差在2.1～3.9 mm间，判为可疑。

1.4.3 阴性反应无炎性反应，皮厚差≤2 mm以下。

1.4.4 凡判定为疑性反应的牛只，于第1次检测间隔42 d进行复检，如仍为疑似，判为阳性[2-3]。

2 调查结果

2.1 监测基本情况

4月19日至6月18日，本中心派出技术人员，采用提纯牛型结核菌素(PPD)皮内变态反应诊断，进行牛结核病监测，共检测了15个奶牛养殖户共奶牛526头，其中：奶水牛养殖户4户，共存栏奶水牛360头，检测结果均为阴性(不列表)；黑白花奶牛养殖场户11户，共存栏奶牛的166头，检测结果阳性14头、阴性152头。阳性奶牛分布在6个场户，疫点概况详见表1。

表1 奶牛结核病监测情况

木棉奶牛场，位于北流市西埌镇木棉村，东经110°24′94″E，北纬22°70′72″N，业主为张某登。建场时间为2000年，从南宁市宾阳县奶农引进产奶奶牛2头(无出栏检疫、流行病监测和调运落地报告)，自此人工配种，自繁自养，公犊育成商品肉牛，母犊培养后备奶牛，伴随对老弱、产奶量偏低、配种难的奶牛作商品肉牛淘汰的逐渐发展历程。经20多年经营，现共存栏黑白花奶牛9头，其中产奶奶牛4头、后备奶牛3头、犊牛2头。4月24日检测奶牛7头(产奶奶牛4头、后备奶牛3头)，结果阳性3头(均为产奶奶牛)、可疑2头(均为后备奶牛)、阴性2头；5月5日检测2头犊牛为阴性。6月6日对可疑牛2头进行复检均为阴性。

邹某孟养殖户，位于北流市北流镇新城村二队，东经110°37'62"E，北纬22°74'20"N。建栏时间2016年，并当年从北流市奶场(因城市扩建停营)引进奶牛6头，无办理检疫、流行病监测和落地报告手续，从此自繁自养，并收集犊牛养育种牛和商品肉牛。现共存栏黑白花奶牛22头，其中产奶奶牛5头、后备奶牛8头、公牛1头、犊牛8头。4月25日监测产奶奶牛5头，结果阳性3头、可疑2头；5月5日检测17头均为阴性；6月7日对可疑牛2头进行复检均为阴性。

正顺养殖有限公司，位于北流市山围镇铁炉村平山坡，东经110°24′E，北纬22°48′N，业主为吴某炎。建场时间为2016年，由原县城郊区养殖点因城市扩建整体搬迁到此，自繁自养，也收集犊牛养育。现共存栏黑白花奶牛35头，其中产奶奶牛6头、后备母牛5头、犊牛24头。5月7日检测牛35头，结果阳性3头(其中产奶奶牛2头，后备奶牛1头)、可疑1头(为产奶奶牛)、阴性31头。6月18日对可疑牛1头进行复检为阴性。

柯某军养殖户，位于北流市山围镇铁炉村，东经110°24′E，北纬22°48′N。建场时间为2006年，当年由中介从南宁宾阳县奶农引进怀胎奶牛4头(无任何手续)，从此自繁自养。现共存栏黑白花奶牛22头，其中产奶奶牛3头、后备牛8头、犊牛11头。5月8日检测22头，结果阳性2头(产奶奶牛)、阴性20头。

徐某静养殖户，位于北流镇环城村二十组，东经110°21′E，北纬22°41′N。建栏时间为1996年，当年从同村奶农彭某琨户(2020年停营)引进奶牛3头(无调运手续)，此后自繁自养。现共存栏黑白花奶牛9头，其中产奶奶牛4头、后备奶牛3头、犊牛2头。5月17日检测牛9头，结果阳性1头(产奶奶牛)、阴性8头。

傅某海养殖户，位于北流市民乐镇斗口村傅屋，东经110°19′E，北纬22°47′N。建场时间为2015年，当年由钦州市合浦县奶农运进奶牛2头(无检疫和落地报告等调运手续)，从事收集其他奶户犊牛喂牛奶养育为主。现共存栏黑白花牛18头，其中产奶奶牛2头、后备母牛1头、犊牛15头。5月23日检测牛18头，结果阳性2头(产奶奶牛)、阴性16头。

本次检出阳性的14头奶牛，都是原来在场内的奶牛。

2.2 追溯追踪调查

通过排查阳性场点现场、问询和查阅相关记录等方式，对6个阳性场点进行了调查。

2.2.1 阳性场点基本情况所有阳性场点均未取得动物防疫合格证，属于散养户，基本都位于距村居500 m以内的位置。如木棉奶牛场位于村道傍，北流市正顺养殖有限公司位于山坡果园中，傅某海养殖户位于离村道边50 m的农田上，柯某军养殖户位于村民集居群间，徐某静养殖户位于离主干路50 m村民居边竹林中，邹某孟养殖户位于离村边200 m田野中。

养殖场设施简易：栏舍都是石棉瓦棚舍，场点周围有简易的物理隔断，养殖场出入口没有设置消毒池，没有隔离栏，没有露天运动场，设置有化粪池。部分养殖户周边菜农可随意出入到化粪池挑粪水淋菜。

饲养方式均是以圈养的形式饲养，饲料以牧草、甘蔗尾、玉米秆、玉米衣、菠萝渣、稻秸及部分成品料为主。

2.2.2 以往监测情况 6个阳性场户，在引进奶牛都无检疫和流行病学检测，无法证明来源健康。由于年份较远，初始引进奶牛已经作肉牛淘汰，都没有向检疫机构报检记录。2021年3月份北流市动物疫病预防控制中心曾对这6个阳性场点进行过结核病监测，当时检测结果均为阴性。

2.2.3 奶牛调出调入情况 6个阳性场点，都是在建好栏舍时调入奶牛，都没有经过动物防疫机构检疫和流行病检测。调入奶牛后都是人工授精自繁自养，所产犊牛自行培育，母犊培养后备奶牛，再也没有调入奶牛。并更新换代把老弱初始奶牛作为肉牛淘汰。淘汰奶牛时也未向当地检疫机构报检，没有调出检疫报告。产奶奶牛往牛奶畅销的养殖户间互动时有发生，但没报移动检疫。从2021年3月份至今没有奶牛从市内外调出调入。

2.2.4 粪便处理情况 6个阳性场(户)点都建设有化粪池，用于收纳牛尿及清洗场地污水净化；牛粪一直都是收集经发酵后作牧草肥料自用。

2.2.5 牛奶销售及处理情况产出的牛奶全部经巴氏灭菌或高温消毒的熟奶进行销售，消费群体主要以邻近居民为主，目前没有收到有因喝这6个阳性场点的牛奶感染结核杆菌的人间病例消息。

结核病检测结果为阳性后，阳性场点也没有再出售过牛奶，所产出牛奶都被以高温消毒的方式进行无害化处理。

根据以上情况，北流市动物疫病预防控制中心综合分析认为：一是6个阳性场点的结核病来源无法查明；二是阳性场点对外散播病原的可能性较低。

3 处置情况

按照《牛结核病防治技术规范》的技术要求，对阳性场点进行如下处置。

3.1 同群牛的处置

对阳性场点的所有牛只进行就地隔离，禁止出入。同时对可疑牛只单独隔离，并派专人监督畜主执行到位，并且在42 d后进行复检。

3.2 阳性奶牛的处置

对14头阳性奶牛进行了淘汰无害化处理。4月29日淘汰了木棉奶牛场的阳性奶牛3头和邹业孟养殖户的阳性奶牛3头；5月13日淘汰了北流市正顺养殖有限公司的阳性奶牛3头和柯有军养殖户的阳性奶牛2头；5月27日淘汰了徐楚静养殖户的阳性奶牛1头和傅廷海养殖户的阳性奶牛2头。所有淘汰阳性奶牛都是送至陆川县国环病害动物无害化处理有限公司进行无害化处理。同时已经开始按照相关文件规定，对被扑杀的奶牛进行扑杀补助申请程序。

3.3 消毒

分别向6个阳性场点发放60 kg二氯异氰脲酸钠粉，指导畜主用二氯异氰脲酸钠消毒水对饲养场所、用具及相关物品进行清洗消毒，对场内可能被污染的饲料、垫料及杂物采取挖坑焚烧处理，对当时场内牛粪进行了堆积密封或化粪池发酵处理，每天对隔离场地采用二氯异氰脲酸钠消毒水进行喷洒消毒，在饲养场出入口处设置消毒池，并放置消毒水。

4 结果分析

4.1 术后炎性反应峰值分布

本次奶牛结核病流行学调查，在提纯牛型结核菌素注射前和术后48、72、96 h点测量术部皮皱厚度，被监测为结核病阳性奶牛14头、可疑奶牛5头，共19头；术后炎性反应皮皱厚峰值在48 h监测点的有序号2、8、13、14、15、17奶牛，占31.58%；峰值在72 h监测点有序号1、3、4、5、6、7、9、11、12、16、18、19奶牛，占63.16%；峰值在96 h点的有序号10奶牛，占5.26%。详见表2。

表2 监测为阳性与可疑奶牛数值

4.2 判定取值分析

本次诊断监测，在48 h、72 h、96 h 3个时间点的监测值中，只要有1个点术后炎性反应皮皱厚峰值与术前值差≥4 mm，判定为阳性；未做24/120 h点监测，如有可能，如增加24、120 h点，对反应过快或慢点牛只监测，结果准确性更有辅佐。本诊断没有按"提纯牛型结核菌素说明书”术后炎性反应72 h监测值为判定，是否妥当有待商榷。

4.3 奶牛福利对疫病影响

本次检测时，强调业主要规范场地用具清洁卫生消毒，加强牛只运动和日晒，丰富粮草营养供给，增强机体抵抗力，业主有可能结合链霉素、对氨基米杨酸钠等药物疗养，可疑牛5头在隔42 d复检均为阴性。相呼应，表1中5个均为阴性的奶牛养殖户，共同点是栏舍通风透气良好，有配套露天运动场，每天按时挤奶、供料饱食后，开栓获解绳自由活动，然后清洁栏舍，并每星期消毒1次。

5 结论

1)北流市属于南亚热带季风气候区，厩棚阴暗潮湿、通风不良、灰尘氨气浓度大、夏季闷热、冬季湿冷，如无夏季散热和冬季保暖设施，久而容易引起机体抵抗力降低，诱发疾病[4]，也是造成环境污染问题所在。部分奶农，利用闲置的老旧泥砖瓦猪栏、仓库，稍加改造，没有露天运动场，舍内圈养为主，粪污净化设施欠完善，栏舍选址及设施未达动物防疫环境卫生要求，久而发生疫病在所难免。良好饲养环境、足够粮草营养、适当运动和日晒，可促进牛防疫功能系统抵御病毒菌侵害。

2)结核杆菌在100 ℃可瞬灭，牛奶沸点为107℃；结核病菌感染人主要通过消化道。6个阳性牛场户的从业人员及家属，做医学检查，没发现有患结核病例。目前没有收到有因喝这6个阳性场点的牛奶感染结核杆菌的人间病例消息。表明牛奶经巴氏灭菌或高温消毒的熟奶进行销售，对外散播病原感染人的可能性较低。

3)奶水牛养殖户4户，存栏奶水牛共360头，检测结果均为阴性。表明奶水牛对北流市夏季闷热、冬季湿冷自然环境具有较强适应性，对结核病菌易感性低。

6 建议

6.1 加强监测净化疫病

北流市奶业，是以小散户养殖奶牛为主体，近期内无法改变。应每年进行1次结核病流行病学调查，对阳性牛无害化处理；每季度对阳性场点的所有牛只进行牛结核病监测，淘汰阳性牛，确保牛群健康；主管局派农业执法人员，监督阳性场点的业主严格做好场地物品卫生消毒管理工作。健康人员才能饲养牲畜；加强饲养管理，牛舍出入口设置消毒池，饲养用具每月定期消毒1次，确保环境卫生。

6.2 普及防疫法律法规、疫控技术

加强对奶牛养殖者的牛疫病检疫工作，需调入奶牛，须有近期口蹄疫检疫，布鲁氏菌病、结核病等流行病监测结果为阴性，方可调入，并做好落地报告和备案。落地隔离观察1个月以上再行检疫，阴性者才能合群。派遣技术人员，定期或不定期到场户组织业主进行奶牛疫病防控技术培训；组建奶牛养殖业主微信群，宣传动物防疫法律法规、支持奶业发展政策措施等信息，促进业主间交流经验，接受养殖户的相关咨询。